Патенты автора Чернохаева Любовь Леонидовна (RU)
Изобретение относится к области биохимии, генной инженерии и биотехнологии, в частности к способу получения конъюгата рекомбинантного аналога интерферона бета 1b с полимером олигосахаридной природы. Настоящий способ включает получение рекомбинатного аналога интерферона бета 1b, соединенного с белком-стабилизатором тиоредоксином через сайт расщепления энтерокиназой, хроматографическую очистку полученного аналога, его конъюгацию с полимером олигосахаридной природы, гидролиз ферментом энтерокиназой, выделение полученного конъюгата и его очистку. Указанный способ отличается тем, что полимером олигосахаридной природы является D3000-7(Sa-Sp)-(Sp-M), в котором D3000 - диальдегид декстран, (Sa-Sp) - Neu5Ac-Lactose-N(CH)-CH(2)-CH(2)-NH(2), (Sp-M) - малеимид-CH(2)-NH(2), и рекомбинатный аналог интерферона бета 1b оптимизирован для экспрессии в клетках Е. coli. Настоящее изобретение позволяет получать конъюгат рекомбинантного аналога интерферона бета 1b с полимером олигосахаридной природы с высоким выходом. 12 ил., 7 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу очистки рекомбинантного белка - аналога интерферона альфа-17, представленного последовательностью SEQ ID NO: 1. Получают растворимую фракцию слитого рекомбинантного белка с белком стабилизатором тиоредоксином из штамма-продуцента Escherichia coli BL21(DE3), трансфицированного плазмидной ДНК рЕТ-32а, несущей ген, представленный последовательностью SEQ ID NO 2. Осуществляют хроматографическую очистку на металл-аффинном сорбенте с применением Ni-Sepharose. Далее проводят гидролиз слитого рекомбинантного белка ферментом энтерокиназой, инкубируя 1 час при 37°C. Осуществляют денатурацию примесей при нагревании до 64°C в течение 60 мин. Проводят FPLC очистку на ионообменном сорбенте SP-Sepharose и обратнофазовую HPLC очистку целевого рекомбинантного белка на колонке Superdex 75. Изобретение позволяет значительно обогатить целевой продукт, приводит к его однородности и хроматографической чистоте более 99%. 15 ил., 6 пр.
