Патенты автора ХАРПЕР Элейн (GB)
АНАЛИЗ ДЛЯ ОЦЕНКИ ЭНДОСОМАЛЬНОГО ПЕРЕНОСА // 2673086
Изобретение касается способа оценки способности высвобождения эндосомой тестовой молекулы, причем упомянутая тестовая молекула представляет собой клостридиальный нейротоксин или перенаправленную не цитотоксическую протеазу и обладает способностью к протеолитическому расщеплению и инактивированию белка SNARE, где способ включает: i) приведение эукариотной клетки в контакт с тестовой молекулой, которая должна быть оценена на способность высвобождения эндосомой, причем упомянутая эукариотная клетка содержит клеточную мембрану, включающую в себя центр связывания, присутствующий на внешней поверхности клеточной мембраны упомянутой клетки; ii) инкубирование тестовой молекулы с упомянутой эукариотной клеткой, что, таким образом, допускает: a) связывание тестовой молекулы и образование связанного комплекса с центром связывания, присутствующим на эукариотной клетке, что позволяет, таким образом, упомянутому связанному комплексу попадать в эукариотную клетку за счет эндоцитоза; b) формирование одной или более эндосом в упомянутой клетке, причем одна или более эндосом содержит тестовую молекулу; и c) введение упомянутой тестовой молекулы в цитозоли эукариотной клетки сквозь эндосомальную мембрану одной или более эндосом; iii) удаление избыточной тестовой молекулы, которая не связана с центрами связывания, присутствующими на эукариотных клетках; iv) детектирование количества тестовых молекул, присутствующих в одной или более эндосом, или выявление количества тестовых молекул, присутствующих в цитозоли упомянутой эукариотной клетки; v) сопоставление количества тестовых молекул, выявленных на этапе iv), с контрольным значением, причем упомянутое контрольное значение отображает количество тестовых молекул, присутствующих в одной или более эндосомах, или количество тестовых молекул, присутствующих в цитозоли, перед выполнением этапа iv); vi) расчет параметра высвобождения эндосомы для тестовой молекулы путем определения относительного изменения количества тестовых молекул, которые присутствуют в одной или более эндосом, или путем определения относительного изменения количества тестовых молекул, присутствующих в цитозоли упомянутой эукариотной клетки; причем этап (iv) содержит детектирование тестовой молекулы с использованием флуоресцентной метки. Изобретение также касается способа оценки способности тестовой молекулы ингибитора подавлять эндосомальное высвобождение контрольной молекулы с одной или более эндосом эукариотной клетки. 2 н. и 7 з.п. ф-лы, 12 пр., 8 ил.
СЛИТЫЕ БЕЛКИ ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ В ТЕРАПИИ // 2651492
Настоящее изобретение относится к биотехнологии и медицине, в частности к одноцепочечному слитому белку для ингибирования клеточной секреции клетки-мишени, нуклеиновой кислоте, вектору экспрессии, способу получения слитого белка и трехцепочечного нецитотоксического белка при действии протеазы на слитый белок, а также применениям белков согласно изобретению для лечения патофизиологических состояний, связанных с клеточной гиперсекрецией. Указанный белок включает нецитотоксическую протеазу, нацеливающий фрагмент, способный к связыванию с участком связывания на клетке-мишени, домен транслокации, способный перемещать протеазу в цитозоль клетки-мишени, два участка протеолитического расщепления и ковалентную связь между нацеливающим фрагментом и доменом транслокации. Настоящее изобретение позволяет улучшить связывание за счёт наличия в структуре слитого белка определённых нацеливающих фрагментов. 8 н. и 15 з.п. ф-лы, 1 ил., 18 пр.
