Патенты автора Чуланов Владимир Петрович (RU)
Группа изобретений относится к области медицины, а именно к биотехнологии и генной инженерии, и может быть использована для получения системы для АРОВЕС/AID-опосредованной и/или UNG-опосредованной деградации ДНК вируса гепатита В. Система для АРОВЕС/AID-опосредованной и/или UNG-опосредованной деградации ДНК вируса гепатита В, включает слитый белок dCas9-Х, где dCas9 представляет собой мутантный белок Cas9, лишенный эндонуклеазной активности, а Х представляет собой эффекторный белок, выбранный из кор-белка ацетилтрансферазы человека p300 или VP48, VP64, VP160, VP192 и p65HSF1, и (ii) РНК-проводники, специфичные к регуляторным элементам одного или нескольких генов цитидиндезаминаз APOBEC/AID человека и/или гена урацил-ДНК-гликозилазы UNG человека, где указанные РНК-проводники используются для привлечения dCas9 к указанным регуляторным элементам. Группа изобретений также относится к применению заявленной системы для АРОВЕС/AID-опосредованной и/или UNG-опосредованной деградации ДНК вируса гепатита В. Использование данной группы изобретения обеспечивает активацию генов цитидиндезаминаз APOBEC/AID и/или урацил-ДНК-гликозилазы UNG человека с обеспечением дезаминирования цитозиновых оснований вирусной ДНК с последующей эксцизией образующихся урациловых остатков, деградацией вирусной ДНК и элиминацией ее из клеток человека, в частности, гепатоцита. 2 н. и 3 з.п. ф-лы, 3 табл., 8 ил.
Изобретение относится к области медицины, биотехнологии и генной инженерии. Описан комплекс StCas9 белка и нового РНК-проводника для подавления экспрессии вируса гепатита B в клетке-хозяине и для элиминации ДНК вируса гепатита В из клетки-хозяина, такой как клетка млекопитающего. Также описано применение белка StCas9 в комплексе с РНК-проводником для подавления экспрессии вируса гепатита B в клетке-хозяине и для деградации ДНК вируса гепатита В и ее элиминации из клетки-хозяина, включая кольцевую ковалентно замкнутую ДНК, из указанной клетки-хозяина. Указанный РНК-проводник образован первой нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 1 (AGAAAGGCCTTGTAAGTTGG) и второй нуклеотидной последовательностью, представляющей собой РНК-шпильку, фланкирующей указанную первую последовательность с 3´-конца и характеризующейся последовательностью SEQ ID NO: 2 (AACGCGGUCGCCAAAGAGAUGUUUUUGUACUCUGGUACCAGAAGCUACAAAGAUAAGGCUUCAUGCCGAAAUCAACA CCCUGUCAUUUUAUGGCAGGGUGUUUU) и структурой, представленной на фиг. 1. Указанная первая последовательность способна связываться с целевым высококонсервативным участком ДНК вируса гепатита В. Указанная вторая последовательность способна привлекать белок-эндонуклеазу Cas9 Streptococcus thermophilus (StCas9) к указанному целевому высококонсервативному участку вирусной ДНК с обеспечением деградации указанной ДНК вируса гепатита В под действием указанной белка-эндонуклеазы StCas9 без образования внецелевых разрывов в геноме человека. Изобретение обеспечивает новое средство воздействия на ДНК вируса гепатита В – РНК-проводник St10 в комплексе с белком StCas9, позволяющее воздействовать на ДНК вируса гепатита В, причем мишень указанного РНК-проводника консервативна во многих клинически значимых генотипах вируса гепатита В (генотипы А, B, C, D, E и H), обеспечивая, таким образом, деградацию указанной ДНК и ее элиминацию из клетки-хозяина. 2 н. и 18 з.п. ф-лы, 9 ил., 4 табл.
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к генной инженерии. Описан РНК-проводник (направляющих РНК) для подавления экспрессии вируса гепатита B в клетке-хозяине и для элиминации ДНК вируса гепатита В из клетки-хозяина, где указанный РНК-проводник содержит первую нуклеотидную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2, и вторую нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 5, фланкирующую первую последовательность с 3´-конца и представляющую собой РНК-шпильку, причём указанная первая последовательность способна связываться с целевым высококонсервативным участком генома вируса гепатита B, а указанная вторая последовательность содержит РАМ-мотив, способный распознаваться РНК-направляемой ДНК-эндонуклеазой Cas9 Streptococcus pyogenes с обеспечением элиминации вируса гепатита B. Также описан РНК-проводник для подавления экспрессии вируса гепатита B в клетке-хозяине и для элиминации ДНК вируса гепатита В из клетки-хозяина, где указанный РНК-проводник содержит первую нуклеотидную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 4, и вторую нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 6, фланкирующую первую последовательность с 3´-конца и представляющую собой РНК-шпильку, причём указанная первая последовательность способна связываться с целевым высококонсервативным участком генома вируса гепатита B, а указанная вторая последовательность способна распознаваться РНК-направляемой ДНК-эндонуклеазой Cas9 Streptococcus thermophilus с обеспечением элиминации вируса гепатита B. Изобретения могут быть использованы в системах CRISPR-Cas9 для воздействия на высококонсервативные области генома вируса гепатита В (HBV) с последующей элиминацией ДНК вируса HBV, включая кольцевую ковалентно замкнутую ДНК (ккзДНК) HBV, из клетки-хозяина, такой как клетка млекопитающего (например, человека), в частности из гепатоцита человека, а также для подавления репликации вируса гепатита B. По сравнению с известными из уровня техники РНК-проводниками, используемыми в системах CRISPR-Cas9 для воздействия на ДНК HBV, РНК-проводники по изобретению обеспечивают усиленное действие таких систем на высококонсервативные области генома вируса гепатита В и сокращение сроков элиминации вирусной ДНК из клетки-хозяина. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 8 ил., 2 табл., 3 пр.
