Патенты автора Ащеулова Дарья Олеговна (RU)
Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой рекомбинантную плазмидную ДНК pET31b-2хUBI18-35, кодирующую аминокислотную последовательность рекомбинантного антимикробного пептида UBI18-35, кодируемого нуклеотидной последовательностью: 5’-AAAGTGGCGAAACAGGAAAAGAAAAAGAA AAAGACCGGTCGTGCGAAACGTCGT-3’, имеющая молярную массу 1,8 МДа. Плазмидная ДНК обеспечивает синтез пептида UBI18-35 в составе белка-слияния с кетостероидизомеразой и состоит из фрагмента ДНК плазмиды pET31b+, гидролизованного по сайту AlwNI (PstNI), лигированной по указанному сайту с фрагментом, кодирующим 2 молекулы UBI18-35, ограниченные с обеих концов тринуклеотидами, кодирующими метиониновые остатки, содержащего сайт инициации репликации плазмиды pBR322, промотор и терминатор транскрипции фага Т7-РНК полимеразы, стартовый кодон, ген, кодирующий кетостероидизомеразу, последовательность, кодирующую 6 гистидиновых остатков, стоп-кодон, генетический маркер АМРr - ген β-лактамазы, определяющий устойчивость трансформированных плазмидой pET31b-2хUBI18-35 клеток Escherichia coli к ампициллину. Изобретение относится также к способу получения рекомбинантного антимикробного пептида UBI18-35, предусматривающему трансформацию клеток Escherichia coli BL21 Rosetta DE3 pLysS указанной плазмидой, выращивание клеток трансформированных клеток Escherichia coli в среде с последующим культивированием; отделением клеток центрифугированием, отмывкой телец включения, содержащих 2 молекулы рекомбинантного антимикробного пептида UBI18-35 в составе белка-слияния с кетостероидизомеразой и 6-гистидиновым тагом, растворением их в буфере с добавлением мочевины, последующим отделением пептидов от кетостероидизомеразы и 6 гистидиновых остатков, разделением их между собой с использованием бромциана и хроматографической очисткой рекомбинантного пептида. 2 н.п. ф-лы, 9 ил., 1 табл.
Изобретение относится к области биохимии, генной инженерии и биотехнологии, в частности к рекомбинантной плазмидной ДНК pET31b-pHLIP. Указанная плазмидная ДНК кодирует аминокислотную последовательность рекомбинантного рН-зависимого встраивающегося пептида и обеспечивает его синтез в составе белка-слияния с кетостероидизомеразой. Изобретение также относится к способу получения указанного пептида. Настоящий способ предусматривает трансформацию клеток Escherichia coli плазмидной ДНК pET31b-pHLIP, выращивание трансформированных клеток в среде с ампициллином, индукцию экспрессии, последующее культивирование, отделение клеток центрифугированием, отмывку телец включения, растворение их в буфере с добавлением мочевины, очистку методом металл-хелатной хроматографии, последующее отделение пептида от кетостероидизмеразы и 6 гистидиновых остатков с использованием бромциана. Настоящее изобретение позволяет получать рекомбинантный рН-зависимый встраивающийся пептид. 2 н.п. ф-лы, 9 ил., 5 пр.
