Патенты автора Гапоненко Александр Константинович (RU)
Изобретение относится к области сельскохозяйственной биотехнологии, в частности к методам культивирования in vitro соматических клеток и геномного редактирования высших растений. Изобретение представляет собой новый способ изоляции протопластов пшеницы для редактирования генома. Данный метод включает эффективную изоляцию протопластов пшеницы из 7-10-ти дневных побегов. Эффективность изоляции достигается за счет низкотемпературной обработки растений-доноров и вакуум-инфильтрации охлажденного ферментного раствора. Во время измельчения побегов и перед обработкой ферментами ткани листьев выдерживаются на осмотической среде, для снижения повреждения клеток во время механического воздействия на клетки ткани. Трансфекция протопластов может осуществляться широким перечнем генетических конструкций. Данная система трансфекции и визуализации протопластов может быть использована с различными маркерными системами отбора, в том числе отбор с репортерными генами. Изобретение может быть использовано для сравнительной оценки эффективности редактирования генома пшеницы различными генно-инженерными конструкциями путем трансфекции протопластов с эффективностью до 40,5%. 1 ил., 1 табл.
Изобретение относится к области сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения трансгенных растений пшеницы методом биобаллистики, включающий в себя холодовой шок (низкотемпературную обработку растений-доноров), культивирование эксплантов перед трансформацией на среде для индукции каллусообразования, при этом среда содержит пиклорам, осмотическую обработку эксплантов перед трансформацией, при этом экспланты помещают на среду с высоким осмотическим давлением, чтобы вызвать плазмолиз, введение в клетки эксплантов чужеродной ДНК с использованием пушки PIG (particle inflow gun), пролиферацию трансформированных клеток без селективного отбора, регенерацию и селективный отбор трансгенных побегов, укоренение побегов на среде с селективным агентом при пониженной температуре, где для индукции каллусообразования у незрелых зародышей используют холодовой шок, где низкотемпературную обработку свежесобранных колосьев растений-доноров осуществляют при +4°C в течение 48 часов, для индукции каллусообразования у незрелых зародышей используют модифицированную питательную среду, содержащую 0,5 мг 2,4-D, 2 мг пиклорама, 40 г мальтозы, 0,5 г глютамина, 0,1 г гидролизата казеина, перед и после трансформации экспланты выдерживают на осмотической среде, содержащей 120 г/л мальтозы, при этом перед трансформацией в течение 4-6 часов, а после трансформации в течение 20-24 часов, после трансформации клетки экспланта проходят этап размножения (пролиферации) на питательной среде без селективного агента, укоренение побегов проводят на селективной среде и при пониженной температуре. Изобретение может быть использовано для создания трансгенных растений пшеницы с эффективностью до 7,8%. 1 ил., 3 табл., 6 пр.
Изобретение относится к селекции и биотехнологии растений, в частности к высокоэффективной системе генетической трансформации сахарной свеклы
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способу получения растения пшеницы, устойчивого к клопу-вредной черепашке (Eurygaster integryceps Puton)
