Патенты автора Кошелева Настасья Владимировна (RU)

Изобретение относится к биотехнологии и клеточной биологии, а именно к способу получения матрикс-связанных везикул из клеточных культур. Для осуществления способа сначала осуществляют децеллюляризацию клеточных культур, затем их ферментативную обработку с получением раствора ферментированного внеклеточного матрикса и матрикс-связанных везикул. После чего отделяют матрикс-связанные везикулы от фибрилл ферментированного внеклеточного матрикса посредством центрифугирования. При этом децеллюляризацию проводят 0,5% раствором Triton X-100 в 20 мM нашатырного спирта в течение не менее 5 минут из расчета не менее 1 мл раствора на 1,5-2 млн клеток или 600-800 сфероидов. При этом ферментативную обработку проводят раствором ферментов, содержащим диспазу, коллагеназу I и коллагеназу II, взятых в концентрациях 1,5 МЕ/мл, 2 мг/мл, 1 мг/мл, соответственно, из расчета не менее 1 мл раствора на 1,5-2 млн клеток или 600-800 сфероидов. Изобретение позволяет обеспечить высокий выход матрикс-связанных везикул из монослойных клеточных культур и трехмерных клеточных культур в форме сфероидов при сокращении времени обработки материала. 3 з.п. ф-лы, 1 табл., 10 пр.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу получения суспензии единичных жизнеспособных клеток подготовки из клеточных сфероидов – трехмерных клеточных культур. Для осуществления указанного способа сначала проводят ферментативную обработку клеточных сфероидов диссоциирующим агентом до получения суспензии единичных клеток при температуре 37°С на мини-рокер-шейкере с частотой перемешивания содержимого пробирок 15-20 раз/мин в течение 10 минут. Далее осуществляют нейтрализацию ферментативной активности диссоциирующего агента. В качестве диссоциирующего агента используют смесь ферментов TrypLE Express и Accutase, взятых в соотношении 1:1, в количестве не менее 0,5 мл на по меньшей мере 200 сфероидов. Настоящее изобретение позволяет повысить выход единичных жизнеспособных клеток при сокращении времени диссоциации. 2 ил., 2 табл., 7 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к клеточному сфероиду для создания костных тканей и тканеинженерных конструкций, используемых для восполнения костных дефектов, и биотрансплантату для регенерации костной ткани при хирургическом лечении деструктивных, дегенеративно-дистрофических, травматических или врожденных поражений костной ткани. Клеточный сфероид, характеризующийся тем, что включает мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки, индуцированные в ангиогенном направлении, помещен в полную ростовую среду, имеет сферическую форму, диаметр 50-200 мкм, гладкую поверхность. Способ получения биотрансплантата включает нанесение указанного клеточного сфероида на поверхность стерильной матрицы-носителя в виде биокомпозиционного материала и инкубирование не менее 1 суток. Изобретение позволяет повысить эффективность регенерации поврежденных тканей. 3 н. и 5 з.п. ф-лы, 3 ил., 3 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к клеточному сфероиду, его получению и оценке эффекта воздействия на функциональную активность меланоцитов. Способ включает суспендирование культуры меланоцитов в полной ростовой среде для меланоцитов, высевание культуры меланоцитов на чашки Петри в плотности 104 кл/см2, пассирование культуры с получением культуры меланоцитов 3 пассажа, растворение агарозы в базовой ростовой среде с получением раствора агарозы с концентрацией 20 г/л, помещение раствора агарозы в пластмассовую форму с получением пластмассовой формы, содержащей полимеризованную агарозу, выдавливание полимеризованной агарозы из пластмассовой формы в базовую ростовую среду с получением агарозного планшета и перенесение культуры меланоцитов 3 пассажа на полученный агарозный планшет с получением клеточного сфероида. Клеточный сфероид помещен в полную ростовую среду для меланоцитов, находится в неадгезивных условиях, включает 500-3000 меланоцитов, имеет сферическую форму, гладкую поверхность, диаметр 50-200 мкм, способен к синтезу меланина, при этом меланоциты в составе сфероида не пролиферируют в отсутствие оцениваемого физического и/или химического воздействия. Способ оценки эффекта воздействия на функциональную активность меланоцитов с использованием клеточного сфероида включает физическое и/или химическое воздействие на клеточный сфероид, измерение уровня функциональной активности меланоцитов в составе клеточного сфероида и оценку эффекта воздействия путем сравнения уровня функциональной активности меланоцитов в составе клеточного сфероида, подвергнутых воздействию, с уровнем функциональной активности меланоцитов в составе клеточного сфероида контрольной группы. Изобретение позволяет расширить арсенал имеющихся технических средств. 3 н. и 34 з.п. ф-лы, 1 табл., 15 ил., 2 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к получению мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток, культивированных в виде сфероидов и индуцированных в ангиогенном направлении. Способ включает изолирование фрагмента ткани донора, содержащей мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки, перенос фрагмента ткани донора в среду, содержащую культуральную среду, аминокислоту и антибиотик, механическое измельчение фрагмента ткани донора с получением гомогената, инкубирование полученного гомогената в растворе протеолитических ферментов при 37°С до момента получения клеточной суспензии. Далее добавляют питательную среду, содержащую культуральную среду, аминокислоту, антибиотик, сыворотку крови; осуществляют центрифугирование клеточной суспензии до момента полного осаждения клеток, удаление супернатанта, ресуспендирование выделенных клеток в питательной среде, содержащей культуральную среду, аминокислоту, антибиотик, сыворотку крови, культивирование выделенных клеток в монослойной культуре при 37°С в среде 5% СО2 как минимум 2 пассажа, дезагрегация монослоя, культивирование в неадгезивных условиях клеток как минимум 2-го пассажа в концентрации от 1×106 кл/мл до 5×106 кл/мл в питательной среде, содержащей культуральную среду, аминокислоту, антибиотик, сыворотку крови, фактор индукции ангиогенеза с получением клеточной культуры, содержащей мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки, культивированные в виде сфероидов. Изобретение позволяет получить мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки, культивированные в виде сфероидов и индуцированные в ангиогенном направлении. 24 з.п. ф-лы, 3 ил, 3 пр.
Изобретение относится к области медицины, офтальмологии и биотехнологии. Предложен способ подготовки клеточных культур в виде сфероидов для формирования передних слоев искусственной роговицы, включающий использование кусочков лимба. Изобретение может использоваться для конструирования передних слоев искусственной роговицы с целью компенсации поврежденных тканей роговицы глаза. 1 пр.

Изобретение относится к области эмбриологии и касается способа культивирования зиготы и/или эмбриона и композиции для добавления в среду культивирования зигот и/или эмбрионов

Изобретение относится к области эмбриологии и касается способа управления качеством ооцитов и композиция для добавления в среду культивирования ооцитов

 


Наверх