Патенты автора Болтовская Виолетта Викторовна (RU)
Изобретение относится к области биотехнологии, предполагающей получение биоматериалов для регенеративной медицины, в частности к способу биотехнологической обработки молочных зубов. Для осуществления указанного способа используют естественно выпавшие молочные зубы или молочные зубы, удаленные по ортодонтическим показаниям. Сначала производят транспортировку полученного материала, его отмывку. Затем после первичной трехкратной отмывки зуба стерильным раствором Хенкса с антибиотиками его дополнительно обрабатывают при помощи ультразвуковой ванны с частотой ультразвуковых волн 40 кГц в течение 2 минут, используя стерильный раствор Хенкса с Гентамицином 8 мкг/ мл. Далее после аспирации содержимого канала зуба в шприц его переносят в центрифужную пробирку и инкубируют ее в течение 2 минут в термошейкере при температуре 37°С. Полная питательная среда, в которой ресуспендируют осадок клеток, включает 10% FBS, тестированную на поддержание роста МСК. После помещения клеток в культуральный флакон его помещают на 1 час в термошейкер при температуре +37°С, скорости 50 об/мин. Далее осматривают состояние клеток при помощи инвертированного микроскопа. При культивировании в СО2-инкубаторе смену среды проводят каждые 5 суток; на 4 пассаже определяют количество и жизнеспособность клеток в камере Горяева, используя 0,4% раствор трипанового синего. После чего проводят криоконсервацию МСК. При этом после аспирации содержимого канала для получения МСК зуб обрабатывают 3% раствором гипохлорита натрия, 3% раствором перекиси водорода, убирают эмаль, цемент, обнажают околопульпарный дентин с помощью алмазного бора с водяным охлаждением. Затем подвергают материал низкочастотной ультразвуковой обработке с частотой 24-40 кГц. Перед деминерализацией проводят контроль состояния поверхностей материала с помощью спектроскопии комбинационного рассеяния, определяя отношение интенсивности линии фосфат-иона 960 см-1 к интенсивности линии Амида I 1660 см-1, которое имеет значение от 11 до 17, и отношение интенсивности линии карбонат-иона 1070 см-1 к интенсивности линии Амида I 1660 см-1, которое имеет значение от 2,6 до 3,3. Деминерализуют материал в 2,4Н-4,8Н растворе соляной кислоты. После деминерализации оценивают ее эффективность, исследуя поверхности материала с помощью спектроскопии комбинационного рассеяния, определяя отношение интенсивности линии фосфат-иона 960 см-1 к интенсивности линии Амида I 1660 см-1, которое принимает значение от 0,25 до 0,65, и отношение интенсивности линии карбонат-иона 1070 см-1 к интенсивности линии Амида I 1660 см-1, которое принимает значение от 0,4 до 0,55. Деминерализованный дентин промывают в апирогенной воде, замораживают при температуре -60°С, лиофилизируют, расфасовывают, упаковывают и стерилизуют радиационным способом. Настоящее изобретение позволяет одновременно получить культуру мезенхимальных стромальных клеток (МСК) и деминерализованного дентина из молочных зубов. 2 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения и культивирования фибробластоподобных клеток из пульпы молочных зубов, включающий забор, подготовку, ферментативную обработку материала, выделение суспензии клеток при центрифугировании, где при появлении признаков выпадения молочного зуба у ребенка его родителям выдают стерильный пенициллиновый флакон с раствором Хенкса с антибиотиками, в который помещают выпавший зуб; после доставки флакона в лабораторию, зуб извлекают стерильным инструментом в чашку Петри и трижды отмывают стерильным раствором Хенкса с антибиотиками; переносят зуб в новую пробирку со стерильным раствором Хенкса с антибиотиками и помещают ее в медицинский холодильник на 24 часа; в оставшийся в транспортировочном флаконе раствор добавляют три капли сыворотки плодов коровы и помещают его в термостат, инкубируя при 37° в течение 24 часов, после чего проводят контроль стерильности забора; при отсутствии признаков контаминации материала в инсулиновый шприц набирают 0,2 мл 0,1% коллагеназы из панкреаса краба ООО «БиолоТ»; иглу шприца вводят в канал молочного зуба и аспирируют содержимое канала в шприц; переносят содержимое в центрифужную пробирку и инкубируют ее в течение двух минут при комнатной температуре; инактивируют действие фермента, добавляя в пробирку 2 мл стерильного 0,02% раствора Версена и 1 мл 10% полной ростовой среды α-МЕМ с глютамином; центрифугируют пробирку в холодовой центрифуге при температуре 4°С, скорости вращения 1200 об/мин в течение 5 минут; надосадочную жидкость утилизируют; осадок клеток ресуспендируют в полной питательной среде α-МЕМ с глютамином, включающей 10% FBS, 8 мкг/мл гентамицина; подсчитывают количество выделенных жизнеспособных клеток в камере Горяева, используя 0,4% раствор трипанового синего; высевают клетки в дозе 1×105 жизнеспособных кл./см2 в культуральный флакон с полной питательной средой α-МЕМ с глютамином, включающей 10% FBS, 8 мкг/мл гентамицина; культивирование проводят в CO2-инкубаторе при температуре 37°С, 5% CO2 и постоянной влажности; через день добавляют во флакон 0,2 мл новую аналогичную питательную среду; первую смену среды проводят на 7 сутки; кондиционированную культуральную среду из флакона с клетками отбирают пипеткой, центрифугируют ее в холодовой центрифуге при температуре 4°С, скорости вращения 1500 об/мин в течение 10 минут, после чего возвращают в культуральный флакон и добавляют свежую среду в соотношении 1:1; по достижении 80% конфлюентного монослоя проводят пересев клеток из расчета 1:2; 1 ПФ. Изобретение позволяет получить и культивировать фибробластоподобные клетки из пульпы молочных зубов. 1 табл., 1 ил.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для получения и культивирования фибробластоподобных клеток из пуповины новорожденного. Для этого проводят забор пуповины у здоровых женщин после рождения ребенка путем кесарева сечения. Пуповину трижды отмывают стерильным раствором Хенкса с антибиотиком от сгустков крови и слизи. Удаляют кровеносные сосуды. Оставшуюся ткань измельчают, переносят материал в центрифужные пробирки и заливают 0,2% раствором коллагеназы. Пробирки помещают в термошейкер при температуре +37°С, скорости вращения 100 об/мин на 16 часов. Фильтруют содержимое в новые пробирки. Вносят в них стерильный 0,02% раствор Версена в соотношении 1:1 и центрифугируют пробирки в холодовой центрифуге в течение 20 минут. Осадок клеток ресуспендируют в полной питательной среде и подсчитывают количество выделенных жизнеспособных клеток. Высевают клетки в культуральный флакон. Культивирование проводят в СО2-инкубаторе и смену среды проводят каждые 5 суток культивирования. По достижении 80% конфлюентности клеточного монослоя проводят пересев клеток из расчета 1:2. Изобретение позволяет получать фибробластоподобные клетки без риска контаминации условно-патогенной флорой. 1 табл.
Изобретение относится к медицине, лабораторным исследованиям и может быть использовано для обработки предметных стекол с зеркальным покрытием для культивирования и изучения культур клеток in vitro с помощью микроскопа МИМ-340. Способ обработки предметных стекол с зеркальным покрытием включает дезинфекцию путем погружения стекол в вертикальном положении в емкость с 70% этиловым спиртом на 30 минут; предстерилизационную очистку путем погружения стекол в вертикальном положении в емкость с дистиллированной водой объемом до 200 мл, в которой предварительно растворяют 5 г моющего средства; при исходной температуре раствора 30°С стекла выдерживают в нем в течение 30 минут, после чего каждое стекло моют в этом растворе с помощью стерильных ватных тампонов; ополаскивают стекла под проточной водой в течение трех минут, затем ополаскивают стекла дистиллированной водой в течение пяти минут; сушат стекла в вертикальном положении в ламинарном шкафу при комнатной температуре до полного исчезновения влаги; стерилизацию ультрафиолетовым облучением стекол в ламинарном шкафу в течение 30 минут; каждое стекло заворачивают в стерильный материал и помещают в стерильную чашку Петри, которую герметично закрывают.
КЛЕТОЧНЫЙ ТРАНСПЛАНТАТ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ И ТРАВМАТИЧЕСКИХ ПОВРЕЖДЕНИЙ СУСТАВНОГО ХРЯЩА // 2402340
Изобретение относится к медицине и биотехнологии и представляет собой клеточный трансплантат, состоящий из жизнеспособных клеток, получаемых из гиалиновой хрящевой ткани, для лечения деструктивно-дистрофических заболеваний и травматических повреждений суставного хряща, отличающийся тем, что клеточный трансплантат состоит из хондробластов и фибробластоподобных клеток, выращенных из аллогенной (донорской) гиалиновой хрящевой ткани реберного или суставного хряща и иммобилизованных на биорезорбируемом трехмерном аллогенном костном носителе
Изобретение относится к биотехнологии, конкретно к морфологическим исследованиям культивируемых клеток, и может быть использовано для стимуляции роста фибробластов в культуре
