Патенты автора Писанов Руслан Вячеславович (RU)
Cпособ относится к биотехнологии, а именно к способам молекулярно-генетического типирования штаммов Salmonella enterica, циркулирующих на различных территориях, с целью их дифференциации. Способ молекулярно-генетического типирования штаммов сальмонелл по INDEL-маркерам, включающий выделение ДНК из исследуемого штамма S. enterica, постановку ПЦР со специфическими праймерами и учет реакции с помощью электрофореза в ПААГ, отличающийся тем, что из ДНК исследуемого штамма S. enterica выявляют семь общих INDEL-маркеров, имеющих делеции определенного размера, а именно STY4288, STY3837, STY1159, STY0523, STY0257, STY2730 и STY3176, с последующей их амплификацией с помощью сконструированных специфических праймеров, выявляющих два альтернативных аллеля. при этом учет результатов дифференциации проводят визуально после электрофореза в 8% полиакриламидном геле в присутствии маркера молекулярных масс ДНК, причем для каждого штамма устанавливают уникальный INDEL-генотип по семи INDEL-маркерам, а путем сравнения выявленных INDEL-генотипов между собой и с известными генотипами идентификационной таблицы устанавливают общее или различное происхождение исследуемых штаммов S. enterica. 2 з.п. ф-лы, 3 табл., 3 пр.
Настоящее изобретение относится к способу получения монодисперсных полимерных микросфер с альдегидными группами, которые могут быть использованы в создании диагностических препаратов для реакции латекс-агглютинации в клинических диагностических и иммунологических исследованиях. Способ включает постановку реакции полимеризации с применением акролеина, при этом осадительную дисперсную полимеризацию проводят в условиях одномоментно протекающих анионной и радикальной полимеризаций путем предварительной подготовки реагентов с отмывкой и перегонкой акролеина в присутствии гидрохинона, далее осуществляют синтез полимерных микросфер, для чего в реактор загружают дистиллированную воду, в которую при постоянном перемешивании на электромагнитной мешалке вносят поливинилпирролидон, персульфат калия и свежеперегнанный акролеин, далее при перемешивании в реакционную смесь по каплям добавляют 5%-ный раствор тетраметилэтилендиамина (ТЭМЭД) для получения микросфер. Заявленный способ позволяет получать в короткие сроки качественные монодисперсные полимерные микросферы с альдегидными группами размером 1,3-2,0 мкм, содержание альдегидных групп в которых составляет 1,3 ммоль/1г полимера. 5 з.п. ф-лы, 5 пр.
Предполагаемое изобретение относится к области медицинской микробиологии, а именно молекулярной диагностики и генетической инженерии, и может быть использовано в лабораторных исследованиях вновь выявленных штаммов Yersinia pseudotuberculosis и при характеристике штаммов, находящихся в коллекциях культур клеток учреждений, занимающихся их изучением. Представлен способ генетической дифференциации штаммов Yersinia pseudotuberculosis путем молекулярно-генетического типирования. Способ генотипирования позволяет достоверно и быстро осуществлять дифференциацию штаммов Y. pseudotuberculosis, выделенных в различных регионах, областях и странах. 1 з.п. ф-лы, 4 табл., 2 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии. Предложена рекомбинантная плазмида pNanH, экспрессирующая клонированный ген nanH (нейраминидазы) Vibrio cholerae, встроенный по сайтам BamHI-PstI в полилинкер векторной плазмиды pQE30, под контролем Т5-промотора. Также предложен штамм E.coli – суперпродуцент нейраминидазы NanH Vibrio cholerae, полученный путем трансформации штамма Е.coli JM103 указанной рекомбинантной плазмидой. Преимуществами полученного продуцента является высокий выход искомого белка и отсутствие способности к синтезу каких-либо дополнительных биологически активных субстанций, затрудняющих его выделение и очистку, возможность культивирования без соблюдения режима работы с возбудителями особо опасных инфекций, ускоренное получение препарата нейраминидазы. Изобретение может быть использовано для получения препаратов нейраминидазы V.cholerae в целях создания специфических диагностикумов и фармацевтических препаратов, а также для изучения свойств, биохимической и биологической активности нейраминидазы (NanH) V.cholerae. 2 н.п. ф-лы, 3 ил., 3 пр.
Изобретение относится к биотехнологии, генной инженерии, медицинской микробиологии. Предложена рекомбинантная плазмида pHFQ2.21, экспрессирующая клонированный ген hfq (шаперона) Vibrio cholerae 01 биовара El Tor, встроенный по сайтам Bam HI-PstI в полилинкер векторной плазмиды pQE30, под контролем Т5-промотора. Указанной плазмидой трансформируют штамм Е. coli Jm109 с получением штамма Escherichia coli KM 2030, являющегося суперпродуцентом шаперона (Hfq) Vibrio cholerae 01 El Tor. Предложенный штамм депонирован в Государственной коллекции патогенных бактерий «Микроб». Содержание шаперона (Hfq) Vibrio cholerae 01 El Tor, находящегося внутри клеток в растворимой форме, составляет до 10% суммарных клеточных белков. Изобретение может быть использовано для получения препаратов шаперона (Hfq) Vibrio cholerae в целях создания специфических сорбентов для связывания малых РНК, а также для изучения свойств, биохимической и биологической активности шаперона (Hfq) Vibrio cholerae. 2 н.п. ф-лы, 1 ил., 2 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии, и может быть использовано для получения диагностикума для количественного определения токсина холерного вибриона, выделенного из объектов окружающей среды. Для этого получают экспериментальные антитоксические иммунные кроличьи сыворотки путем иммунизации кроликов весом 2,5-3,0 кг с помощью введения препарата чистого холерного токсина в дозе 100 мкг белка подкожно в паховый лимфатический узел и внутривенно в краевую ушную вену в количестве 3 инъекций с интервалом в 14 дней, затем через 14 дней после последней инъекции осуществляют обескровливание кроликов, а из крови готовят сыворотки с последующим определением титра антител. Далее выделяют иммуноглобулины из кроличьих сывороток, для этого предварительно готовят физиологический раствор, забуференный двузамещенным фосфатом натрия и однозамещенным фосфатом калия при рН 7,2 (ЗФР), затем готовят водный раствор метанола, смешивая 6 мл метанола с 8 мл дистиллированной воды, смесь охлаждают, после чего полученную сыворотку в количестве 4 мл соединяют с 2 мл забуференного физиологического раствора (ЗФР), помещают в центрифужные стаканы, ставят на лед и выливают в них сыворотку при температуре 0°С, затем добавляют забуференный физиологический раствор, перемешивают, вливают метанольную воду 14 мл, понижая при этом температуру до - 5°С, после чего стакан со смесью ставят в холодильник на 30-40 минут, а затем центрифугируют при 2000 об/мин в течение 20 минут при нулевой температуре, полученную надосадочную жидкость сливают, а осадок суспендируют в ЗФР от исходного объема сыворотки, определяют количество белка по методу Лоури, получая в результате сенситин. Готовят полимерный носитель, используя метод анионной полимеризации мономера - акрилового альдегида - в водно-щелочной среде с получением монодисперсных частиц сферической формы диаметром 1,0 ±0,1 микрон, которые окрашивают тианином и отмывают дистиллированной водой. Затем сенсибилизируют полимерный носитель иммуноглобулинами к холерному токсину, для этого осадок отмытого носителя суспендируют в боратном буфере (рН8,4), добавляют к нему иммуноглобулины и оставляют для контакта при перемешивании в течение 2 часов при 20°С, в результате альдегидные реакционные группы на поверхности частиц специфически взаимодействуют с аминогруппами белковых молекул иммуноглобулинов. После этого суспензию охлаждают до 4-5°С и выдерживают при этой температуре 16-18 часов. Блокируют свободные альдегидные группы путем введения в суспензию 0,5%-ного раствора желатозы на забуференном физиологическом растворе (рН 7,0-7,1) и инкубацией в течение 2 часов при комнатной температуре. Суспензию диагностикума центрифугируют в течение 10 минут при 6000 об/мин. и трижды отмывают забуференным физиологическим раствором (рН 7,0-7,1) от избытка желатозы, а конечный осадок суспендируют в 0,1%-ном растворе желатозы в забуференном физиологическом растворе (рН 7,0-7,1). Лиофилизацию диагностикума осуществляют путем суспендирования препарата в 20 мл 3% желатозо-сахарозной среды, затем суспензию разливают в ампулы по 1 мл, замораживают в жидком азоте с последующим вакуумным высушиванием, постепенно поднимая температуру до 22-23°С в течение суток. Использование данного способа позволяет получить диагностикум для количественного определения токсина холерного вибриона, выделенного из объектов окружающей среды, с целью выявления эпидемически опасных токсигенных штаммов холерного вибриона. 2 з.п. ф-лы, 3 табл., 2 пр.
Способ дифференциации штаммов Helicobacter pylori путем молекулярно-генетического типирования // 2688434
Изобретение относится к области медицинской микробиологии, а именно к способам молекулярно-генетического типирования штаммов возбудителей инфекционных заболеваний, которые используются при микробиологическом и молекулярно-генетическом мониторинге штаммов H.pylori, циркулирующих на различных территориях, с целью их дифференциации. Из ДНК Н. pylori исследуемой пробы выявляют пять общих INDEL-генов, имеющих делеции определенного размера, а именно IND-3330, 5605, 6405, 340 и 1390, с последующей их амплификацией с помощью сконструированных специфических праймеров, выявляющих два альтернативных аллеля: к гену IND-3330 - праймеры и с длиной амплифицированного фрагмента 60 п. н. или 69 п. н., к гену IND-5605 - праймеры и с длиной амплифицированного фрагмента 93 п. н. или 102 п. н., к гену IND-6405 - праймеры и с длиной амплифицированного фрагмента 100 п. н. или 106 п. н. к гену IND-340 - праймеры и с длиной амплифицированного фрагмента 79 п. н. или 85 п. н., к гену IND-13 90 - праймеры и с длиной амплифицированного фрагмента 64 п. н. или 76 п. н., при этом учет результатов дифференциации проводят визуально после электрофореза в 8% полиакриламидном геле в присутствии маркера молекулярных масс ДНК, причем для каждого штамма устанавливают уникальный INDEL-генотип по пяти INDEL-генам, а путем сравнения выявленных INDEL-генотипов между собой и с известными генотипами идентификационной таблицы устанавливают общее или различное происхождение исследуемых штаммов Н. pylori. При этом ПЦР проводят в объеме 25 мкл и реакционная смесь содержит: 1,5 мМ Mg-буфер, 0,2 мМ смеси дНТФ, 1,0 мкМ смеси праймеров (по 0,5 мкМ каждого праймера), 25 нг ДНК-матрицы,1 ед. ДНК-полимеразы, оставшийся объем - вода, при этом в качестве матрицы используют геномную ДНК, объемом 5 мкл, которую получают из разных штаммов Н. pylori. ПЦР проводят с соблюдением режимов: 1 этап - денатурация при 95°С - 3 мин (1 цикл); 2 этап - денатурация при 95°С - 20 с, отжиг при 55°С - 20 с, синтез при 72°С - 20 с (35 циклов); 3 этап - досинтез при 72°С - 7 мин (1 цикл). Способ позволяет достоверно и быстро дифференцировать один штамм от другого и определить их происхождение. 2 з.п. ф-лы, 2 ил., 3 табл., 4 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к рекомбинантной плазмиде pHlyA. Плазмида pHlyA экспрессирует клонированный ген hlyA (гемолизина) Vibrio cholerae, встроенный по сайтам BamHI-Pstl в полилинкер векторной плазмиды pQE30 под контролем Т5-промотора. Изобретение также относится к штамму Escherichia coli KM 2028. Указанный штамм является носителем плазмиды pHlyA и предназначен для продукции прогемолизина (proHlyA) Vibrio cholerae. Настоящее изобретение позволяет получать прогемолизин с высоким выходом. 2 н.п. ф-лы, 2 ил., 3 пр.
Изобретение относится к медицинской микробиологии. Исследуемую культуру V. cholerae выращивают на агаре Мартена, готовят бактериальную суспензию 1х109 м.к./мл по стандарту мутности ОСО ГИСК им. Тарасевича, вносят в 2 емкости с питательной средой с последующим культивированием при 37°C. По специальной методике определяют показатели внеклеточного и внутриклеточного продуцирования кадаверина. Проводят исследование проб в системе капиллярного электрофореза Backman. Учет результатов ведут с помощью компьютерных электрофореграмм с получением показателей образцов в момент детекции кадаверина. По формуле определяют количество продуцируемого кадаверина в исследуемых пробах. Изобретение позволяет по количественной концентрации кадаверина оценивать потенциал холерных вибрионов в реализации их адаптивных функций и возможности выживать в различных средах. 1 ил., 3 табл. 3 пр.
Изобретение относится к биотехнологии, генной инженерии, медицинской микробиологии и может быть использовано для изучения роли цитотонического фактора cef (CHO cell elongating factor) в патогенезе холеры, его биохимической и биологической активности
Изобретение относится к биотехнологии, генной инженерии, медицинской микробиологии
Изобретение относится к биотехнологии, генной инженерии, медицинской микробиологии и представляет собой рекомбинантную плазмиду рНР61, экспрессирующую клонированный ген hapA (гемагглютинин/протеазы) Vibrio cholerae, а также штамм E.coli KM 192 Государстенной коллекции патогенных бактерий «Микроб», несущий рекомбинантную плазмиду рНР61, - продуцент гемагглютинин/протеазы (НА/Р) Vibrio cholerae
