Патенты автора Ольховский Игорь Алексеевич (RU)

Изобретение относится к области медицинской биотехнологии. Изобретение представляет собой набор реагентов для обнаружения возбудителей клещевых боррелиозов, содержащий ДНК-полимеразу, буфер для изотермической реакции, следующие внешние и внутренние праймеры для выявления ДНК Borrelia burgdorferi s. l.:F3: 5’-GCTGTTGAGCTCCTTCTTG-3’;B3: 5’-CACCAGCGTCACTTTCAG-3’;FIP: 5’-TGCAAATCTATTCTCTGGCGAAGGTTGAGCACCTTCTTGAACA-3’;BIP: 5’-ACAGCAATCGCTTCATCTTGATTCTCAAGCTTCTTGGACC-3’, - новым является то, что дополнительно включает следующие петлевые праймеры для выявления ДНК Borrelia burgdorferi s. l.:LF: 5’-TGCTCCCACATGAACTCTTAA-3’; LB: 5’-AAGGAGCTCAGGCTGCTCAGA-3’, праймеры для выявления ДНК Borrelia miyamotoi:F3: 5’-TTCTAACAAAGGACAATATTCCT-3’;B3: 5’-TTCATTTAAGGGGAAACGATT-3’;FIP: 5’-CGTTTTCTCTAGCTCGATTGGGAAACACGACCCAGAAATTGACA-3’;BIP: 5’-CGATATTACGCCACTGACTTCACATGGTTTTTTGTTTTCAGGATCA-3’;LF: 5’-TGTGCAACATTTGTGGTTG-3’;LB: 5’- TCACTAAGTCTCAGTGAAAGA-3’, ДНК полимеразу Bst 2.0 или Bsm и соответствующий изотермический Bst 2.0 или Bsm буфер, а также MgSO4 или MgCl2 соответственно, смесь нуклеотидов dNTP, бетаин, деионизированную воду, положительный и отрицательный контроли, а также флуоресцентные красители EVA green или бромистый этидий. Изобретение позволяет повысить экспрессность и специфичность анализа по обнаружению клещевого боррелиоза, увеличить достоверность постановки диагноза за счет расширения перечня определяемых одновременно возбудителей инфекции, а также возможность осуществления анализа в полевых условиях, в т.ч. на цельных клещах. 3 ил., 3 пр.

Изобретение относится к молекулярной биологии, биотехнологии и медицине, в частности к гематологии, онкологии, и может применяться для оценки эффективности терапии Ph-позитивных онкогематологических заболеваний. Набор для мультиплексного ПЦР анализа уровня экспрессии химерных молекул РНК с одновременным выявлением мутаций резистентности к терапии ИТК, а также ускоренного и экономичного способа диагностики Ph-позитивных онкогематологических заболеваний на его основе содержит буферный раствор, дезоксинуклеотидтрифосфаты, специфичные праймеры, TaqMan зонды, Taq-полимеразу, MgCI2 и воду в оптимальных соотношениях, обеспечивающих оптимальную работу фермента. Способ оценки эффективности терапии ингибиторами тирозинкиназ при Ph-позитивных новообразованиях с использованием заявленного набора включает также проведение амплификации в следующем температурном режиме: предварительная денатурация 95°С – 5 минут; 50 циклов реакции в режиме 95°С – 15 с, 60°С – 40 с. Количественную оценку доли химерной ДНК рассчитывают исходя из значений пороговых циклов Ct в реакциях амплификации фрагментов BCR-ABL1 и ABL1, где количество копий ABL1 рассчитывают по формуле: IS(%)=(N(BCR-ABL1)/N(ABL1))⋅1,265⋅100. При определении уровня BCR-ABL1 выше 1% делается вывод о наличии резистентости пациента к используемым препаратам ИТК. В случае если одновременно выявленная разность значений Ct (исследуемой мутации) и Ct(ABL1) для любой из выявляемых мутаций меньше заданного критического порога, делается вывод, что выявленная мутация или комбинация мутаций является причиной данной резистентности. Техническим результатом, достигаемым заявляемым изобретением, является изготовление набора реактивов для мультиплексной ПЦР в реальном времени, позволяющего в одной аналитической постановке произвести количественную оценку уровня химерного транскрипта BCR-ABL1 в пробе крови, а также выявление 8 мутаций резистентности к ИТК - G250E, Y253H, E244K, E255V, T315I, F317L, F359I, F359V - для оценки эффективности терапии, что позволит при сокращении времени исследования и затрат материалов получить более полную информацию о течении заболевания. 2 н.п. ф-лы, 9 табл., 4 ил., 3 пр.

Изобретение относится к области молекулярной биологии, а именно к способам синтеза флуоресцентного зонда, предназначенного для выявления делеции короткого плеча 17 хромосомы (del 17p). Синтез флуоресцентно-меченого ДНК-зонда для реакции флуоресцентной in situ гибридизации (FISH) проводят путем использования для получения ДНК-мишени ВАС-клона RP11-89D11 и встраиванием флуоресцентной метки цианин (Cy3) с последующей стабилизацией в буферном растворе с оптимальным составом буфера, содержащим: 3 мкл ПЦР-буфера 10Х, 4 мкл MgCl2 (25 мМ), по 2 мкл DOP праймеров (15 мкМ), по 1 мкл dATP, dTTP, dGTP (8 мМ), 2 мкл dCTP (2 мМ), 3,8 мкл Cy3-dCTP (2 мМ), 4,2 мкл воды, 0,5 мкл Taq ДНК полимеразы (5 ед/мкл) и 4 мкл ДНК BAC-клона в объеме реакционной смеси 30 мкл. Культивирование бактерий проводят в среде Luria-Bertani с антибиотиком хлорамфениколом в концентрации не менее 12 мкг/мл. Выделение плазмидной ДНК проводят при помощи колонок с силикатным носителем. Изобретение позволяет получить достаточную концентрацию специфического ДНК-зонда для реакции флуоресцентной in situ гибридизации (FISH) с высокой яркостью получаемого флуоресцентного сигнала, что позволяет проводить визуальное обнаружение данной делеции. 1 табл., 5 ил., 1 пр.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использована для диагностики выявления Ph-негативных миелопролиферативных новообразований. Предложен набор, содержащий специфичные праймеры и флуоресцентно-меченые ДНК-зонды. Праймеры имеют следующий нуклеотидный состав (5'-3'-): JAK2-W-F, JAK2-W-R, JAK2-W-P, JAK2-M-F, JAK2-M-R, JAK2-M-P, CALR-l-F, CALR-l-R, MPL-K-F, MPL-K-R, CALR-1-P, MPL-K-P, CALR-2-F, CALR-2-R, MPL-L-F, MPL-L-R, CALR-2-P, MPL-L-P. В TaqMan зондах на 5' конце применяют красители: флуоресцеин (FAM) и хлорированный флуоресцеин (HEX). Для тушения флуоресценции используют Black Hole Quencher-1 (BHQ1) на 3' конце. Также предложен способ диагностики Ph-негативных миелопролиферативных новообразований, включающий проведение полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Группа изобретений позволяет проводить одновременное исследование нескольких мутаций в одной аналитической серии, что приводит к результату в более короткие сроки. А также обеспечивает точную диагностику хронических Ph-негативных миелопролиферативных опухолей, позволяет выявлять группу пациентов с наличием сочетанных патогенетических мутаций. 2 н.п. ф-лы, 3 ил., 3 табл., 1 пр.

Изобретение относится к способу определения резистентности тромбоцитов к ацетилсалициловой кислоте (АСК) путем импедансного исследования агрегационной функции тромбоцитов in vitro, при котором исследуют агрегационную активность после инкубации образца биологического материала с АСК с использованием индуктора агрегации, причем агрегацию тромбоцитов индуцируют коллагеном в оптимальной концентрации 2 мг/мл и одновременно с измерением импеданса проводят определение динамики освобождения гранул тромбоцитов люминесцентным методом, где перед проведением агрегации пробы калибруются с помощью стандарта аденозинтрифосфата (АТФ), по полученным агрегатограммам определяют значения амплитуды агрегации в Омах и присваивают полученным значениям баллы: значения ≤6 соответствуют 0 баллов, значения 7-9 соответствуют 1 баллу, значения 10-12 соответствуют 2 баллам, значения >12 соответствуют 3 баллам; затем определяют интенсивность высвобождения АТФ из гранул тромбоцитов в нмолях и присваивают полученным значениям баллы: значения <0,5 соответствуют 0 баллам, значения 0,5-1,0 соответствуют 1 баллу, значения 1,0-1,5 соответствуют 2 баллам, значения >1,5 соответствуют 3 баллам, и далее рассчитывают индекс резистентности (ИР) по формуле, при этом значение показателя ИР более 4 указывает на наличие аспиринорезистентности тромбоцитов. Изобретение обеспечивает проведение быстрой комплексной диагностики резистентности тромбоцитов к АСК с оценкой функционального состояния гранул тромбоцитов до начала лечения и возможность предотвращения развития нежелательных тромботических или геморрагических осложнений. 2 ил., 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Иммуноферментная тест-система для определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке (плазме) крови человека. Тест-система включает иммуносорбент на основе антигенов вируса иммунодефицита человека 1 типа (env ВИЧ-1 и ВИЧ-1 группы О), раствор для разведения образцов (РРС) и детектирующие реагенты (конъюгаты, хромоген/субстрат). Изобретение относится также к способу определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке (плазме) крови человека путем исследования сыворотки крови больного при помощи описанной иммуноферментной тест-системы. Изобретение позволяет быстро и просто определять вероятные сроки заражения ВИЧ-инфекцией. 2 н.п. ф-лы, 4 табл., 2 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии и аллергологии

 


Наверх