Патенты автора Мишанькин Борис Николаевич (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложена рекомбинантная плазмида pNanH, экспрессирующая клонированный ген nanH (нейраминидазы) Vibrio cholerae, встроенный по сайтам BamHI-PstI в полилинкер векторной плазмиды pQE30, под контролем Т5-промотора. Также предложен штамм E.coli – суперпродуцент нейраминидазы NanH Vibrio cholerae, полученный путем трансформации штамма Е.coli JM103 указанной рекомбинантной плазмидой. Преимуществами полученного продуцента является высокий выход искомого белка и отсутствие способности к синтезу каких-либо дополнительных биологически активных субстанций, затрудняющих его выделение и очистку, возможность культивирования без соблюдения режима работы с возбудителями особо опасных инфекций, ускоренное получение препарата нейраминидазы. Изобретение может быть использовано для получения препаратов нейраминидазы V.cholerae в целях создания специфических диагностикумов и фармацевтических препаратов, а также для изучения свойств, биохимической и биологической активности нейраминидазы (NanH) V.cholerae. 2 н.п. ф-лы, 3 ил., 3 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и иммунологии. Предложен способ получения белка OmpT для моделирования противохолерного иммунитета у экспериментальных животных. Способ включает выращивание авирулентного штамма V.cholerae eltor 18950, смыв клеток с последующим осаждением, разрушением в УЗ-дезинтеграторе, обработку ДНК-азой и РНК-азой и центрифугирование. Супернатант ультрацентрифугируют, осадок мембранных белков растворяют в 1% Тритон Х-100, ультрацентрифугируют. Белок OmpT выделяют из надосадочной жидкости, предварительно отдиализированной против 20мМ Трис-НСl (pH 7,6), нанося на колонку с DE-52 целлюлозой. Белки, сорбирующиеся на целлюлозе, эллюируют градиентом NaCl. Способ обеспечивает получение эффективного препарата для моделирования иммунитета у экспериментальных животных. 3 з.п. ф-лы, 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Заявлен способ молекулярно-генетического внутривидового типирования Vibrio cholerae O1 и O139 серогрупп. Способ включает выделение ДНК из исследуемого штамма V. cholerae серогруппы O1 или O139, постановку ПЦР со специфическими праймерами и учет реакции путем электрофореза. Амплификацию исследуемой ДНК проводят сконструированными специфическими праймерами к каждому из шести INDEL-генов, а именно к генам ompU, 1606, eamA, 096, CoA и cheA, каждый из которых имеет по две дискриминируемых аллели. Учет результатов типирования проводят как визуальную идентификацию после электрофореза, причем для каждого исследуемого штамма устанавливают уникальный INDEL-генотип по двум или большему числу INDEL-генов. Путем сравнения выявленных INDEL-генотипов устанавливают общее или различное происхождение исследуемых штаммов V.cholerae O1 и O139 серогрупп. Изобретение позволяет выявлять уникальные генетические маркеры штаммов V.cholerae серогрупп O1 и O139, что может быть использовано в практике работы специализированных учреждений, занимающихся мониторингом за холерой. 1 ил., 4 табл., 3 пр.

Способ дифференциации возбудителей чумы и псевдотуберкулеза по N-ацетил-β-D-глюкозаминидазной активности предусматривает получение суспензии агаровой культуры исследуемых бактерий в концентрации (1-5)×109 м.к., подготовку синтетического субстрата, в качестве которого используют 4-метилумбеллиферил-N-ацетил-β-D-глюкозаминид в количестве 50 мкМ. Субстрат растворяют в 2 мл диметилформамида. Из полученного раствора берут 0,6 мл и добавляют 9,4 мл 0,1 М фосфатного буфера pH 7,4. Смешивают 20 мкл подготовленного субстрата с каплей 0,05 мл суспензии агаровой культуры бактерий в физрастворе, помещенной в чашку Петри. Полученную смесь инкубируют 10-20 мин при 37°C, после чего реакцию останавливают добавлением 5 мкл 10 н. раствора щелочи. Осуществляют дифференцирование в УФ-лучах трансиллюминатора при 366 нм. Яркая флюоресценция голубого цвета свидетельствует о положительном результате реакции и подтверждает, что исследуемый штамм гидролизует подготовленный субстрат и принадлежит к Yersinia pseudotuberculosis. Отсутствие свечения подтверждает принадлежность штамма к Yersinia pestis. Изобретение обеспечивает экспресс-диагностику и дифференциацию указанных бактерий, а именно в течение 10-20 мин. 3 табл., 3 пр.
Изобретение относится к области медицинской микробиологии и касается способа определения активации плазминогена бактериями. Способ включает внесение протамина сульфата в подготовленный супернатант, инкубацию полученной смеси, осаждение клеток центрифугированием, инкубацию супернатанта с протамин сульфатом, осаждение белка и регистрацию активации плазминогена бактериями по количеству отщепившегося аргинина, содержание которого определяют методом Сакагуши по окрашиванию проб в красный цвет. Изобретение позволяет проводить регистрацию явления активации плазминогена бактериями в условиях in vitro с помощью протамина. 4 табл., 4 пр.

Изобретение относится к области медицинской микробиологии и может быть использовано при проведении лабораторного контроля продовольствия на зараженность патогенными биологическими агентами в условиях чрезвычайных ситуаций

 


Наверх