Патенты автора Нагорный Сергей Андреевич (RU)
Изобретение относится к области медицинской паразитологии, ветеринарии, биотехнологии. Описан способ диагностики возбудителей дирофиляриоза, включающий ПЦР в режиме реального времени с помощью предлагаемых праймеров, специфичных для каждого вида дирофилярий и состоящих из двух пар видовых праймеров: для Dirofilaria repens (F2690DR) 5’- АAGTGTTGATGGTCAACCTGAA-3’ (R2812DR) 5’- GTAGAACGCATATTCTGAGT-3’ для Dirofilaria immitis(F2690DI) 5’- GAGTGTAGAGGGTCAGCCTGAG-3’(R2812DI) 5’- GTAGAACGTATATTCTGAAC- 3’.Выявление осуществляют автоматически в ходе проведения ПЦР на мониторе компьютера в виде кривых и в численных значениях, отражающих накопление продуктов амплификации специфичных для D. repens и D. immitis со специфическими праймерами. В случае наличия в пробе ДНК D. Repens, будет выявляться положительная реакция с праймерами F2690DR/R2812DR, а в случае наличия в пробе ДНК D. Immitis, будет выявляться положительная реакция с праймерами F2690DI/R2812DI. Предварительно подготавливают исследуемую ДНК. Для этого осуществляют промывку нативных гельминтов однократно в стерильном 0,9% растворе NaCl, далее замораживание при температуре -20±2°С. Затем механическое перетирание и гомогенизация до получения однородной суспензии, из которой выделяют ДНК с использованием набора М-Сорб-кровь («НПФ СИНТОЛ», Россия) для постановки ПЦР. Кроме того, ПЦР проводят в объеме 25 мкл и реакционная смесь содержит: 10-кратный ПЦР буфер с EVAGreen – 2,5 мкл; 25 мМ MgCl2 - 2,5 мкл; 2,5 мМ смесь dNTP – 2,5 мкл; праймер видовой F (1 О.Е.) - 1 мкл; праймер видовой R (1 О.Е.) – 1 мкл; ДНК-Taq-полимераза (5 Ед/мкл) – 0,3 мкл, деионизованная вода – 12,2 мкл. При этом ПЦР проводят с соблюдением режимов:- денатурация при 95°С - 5 мин (1 цикл);- затем 45 циклов амплификации, включающих: денатурацию при 95°С - 10 с, отжиг при 60°С - 10 с, синтез при 72°С - 30 с;- дополнительный блок «Melt curve» при температурном режиме 60 – 90°С - 10 мин (1 цикл), дискретность 0,5°С/10 с;- хранение при 10°С.Изобретение может быль использовано при молекулярно-генетической диагностике возбудителей дирофиляриоза, а также для межвидовой дифференциации видов Dirofilaria repens и Dirofilaria immitis. Технический результат предлагаемого изобретения заключается в достоверном выявлении видов возбудителей дирофиляриоза D. repens и D. Immitis. 3 з.п. ф-лы, 5 ил., 3 пр.
Способ подготовки проб материала для идентификации вида нематод методом MALDI TOFF Biotyper // 2703280
Изобретение относится к медицине и ветеринарии и может быть использовано для идентификации видового состава нематод методом MALDI TOFF Biotyper. Для этого проводят механическую ультразвуковую гомогенизацию головного конца нематод, который предварительно обрабатывают антибиотиками широкого спектра действия. После гомогенизации биоматериал помещают в 0,9%-ный раствор NaCl, центрифугируют и отбирают надосадочную жидкость для последующего анализа методом масс-спектрометрии. При этом получают масс-спектрометрические протеомные профили объектов исследования с использованием набора MALDI Sepsityper в программе Flex control и MALDI Biotyper с программным обеспечением «blood culture project» и осуществляют построение графиков в Flex Analisis, позволяющих проводить видовую идентификацию дирофилярий и аскаридат. 1 табл., 5 ил., 4 пр.
Изобретение относится к области медицины и ветеринарии и касается способа получения очищенного антигена Dirofilaria immitis. Представленный способ включает механическую гомогенизацию, центрифугирование гомогената, отбор надосадочной жидкости и использование ее как антигена, при этом для гомогенизации используют головной конец длиной 2 см половозрелой самки Dirofilaria immitis, который помещают в 0,25 М водный раствор сахарозы в соотношении 1:3, замораживают при температуре -18°С, проводят механическую гомогенизацию и экстракцию белков в 0,25 М водном растворе сахарозы при 4°С в течение 12 часов, далее проводят ультразвуковую гомогенизацию супернатанта при 70 кГц 5 раз по 30 секунд с интервалом в 30 секунд в 3 циклах при 0°С, образовавшийся после ультразвуковой гомогенизации супернатант растворяют в охлажденном ацетоне при температуре 0°С в соотношении 1:20 с экспозицией 1 час при температуре 4°С. Представленное изобретение позволяет получить антиген с высокими показателями чувствительности и специфичности и может быть использовано в диагностике дирофиляриоза у людей и животных. 2 табл., 1 пр.
Изобретение относится к медицине и ветеринарии, а именно к иммунодиагностике, и может быть использовано для прижизненной серодиагностики дирофиляриоза у животных и человека
