Патенты автора Павлович Наталья Владимировна (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии. Описан способ определения подвидов Francisella tularensis методом мультипраймерной ПЦР, включающий выделение ДНК из исследуемого штамма F. tularensis, постановку ПЦР со специфическими праймерами и учет реакции с помощью электрофореза. Предложенный способ отличается тем, что на ДНК F. tularensis выявляют два общих INDEL-гена, имеющих делеции определенного размера, а именно ft1779 и ft426, с последующей их амплификацией с помощью сконструированных специфических праймеров: к гену ft1779 - праймеры GCCTTTTCAGTTCTTGAAATTGT и TTTGAGATTCGTGTAGTGTACTTGTG, с длиной амплифицированного фрагмента 98 п.н., или 107 п.н., или 950 п.н., к гену ft426 - праймеры GATAGACGCTGCATCGACAC и ACTAGAGTTAACCCATTCAACAAGA, с длиной амплифицированного фрагмента 174 п.н. или 196 п.н. Изобретение расширяет арсенал способов определения подвидов Francisella tularensis методом мультипраймерной ПЦР. 2 з.п. ф-лы, 1 ил., 1 табл., 4 пр.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способам молекулярно-генетического типирования штаммов возбудителей инфекционных заболеваний, которые используются при микробиологическом и молекулярно-генетическом мониторинге штаммов F. tularensis, циркулирующих на различных территориях, с целью их дифференциации. Сущность изобретения заключается в том, что из ДНК F. tularensis выявляют пять общих INDEL-генов, имеющих делеции определенного размера, а именно ft263, ft278, ft502, ft1779 и ft09, с последующей их амплификацией с помощью сконструированных специфических праймеров, выявляющих два альтернативных аллеля. 2 з.п. ф-лы, 3 ил., 2 табл., 4 пр.

Изобретение относится к оценке вирулентности in vitro штаммов туляремийного микроба подвидов Francisella tularensis subsp. tularensis, subsp. mediasiatica, subsp. Holartica. Способ включает тестирование исследуемой культуры на присутствие бактериального ЛПС с помощью индикатора и субстрата, в качестве которого используют специфические антитела иммунохроматографического «ИХ-теста» к ЛПС исследуемой пробы, которую вносят в объеме 0,1 мл в лунку теста с предварительной подготовкой бактериальной взвеси по отраслевому стандарту мутности и с последующим кипячением при 100°C в течение 30 минут, учет результатов осуществляют через 15 минут визуально по наличию в стрипе полос, если обозначились две полосы (одна контрольная, а вторая опытная), то делают заключение, что в пробе присутствует вирулентный штамм одного из подвидов туляремии, а если наблюдаем одну полосу (контрольную), то штамм относят к авирулентным. 3 табл., 3 ил., 2 пр.

Изобретение относится к области медицины. Изобретение представляет собой способ снижения резистентности возбудителя туляремии к цефалоспоринам, где в качестве препарата используют неионогенное поверхностно-активное вещество твин 80 в количестве (0,5-1)%, посредством которого повышают проницаемость наружных структур клеток возбудителя туляремии, при этом исследования осуществляют in vivo и in vitro, причем в последнем случае используют диско-диффузионный метод и метод серийных разведений, после этого проводят оценку результатов исследований, соответствующую проведенным методам. При этом для диско-диффузионного метода готовят чашки с агаром Мюллера-Хинтона в два ряда, в один из которых вводят (0,5-1)% твин 80, затем на поверхность агара засевают бактерии исследуемых штаммов туляремии из предварительно подготовленной суспензии, содержащей 108 м.кл./мл, после впитывания суспензии в агар на его поверхность накладывают диски с цефалоспориновыми антибиотиками, а на контрольные чашки с твином и без него диски не накладывают, посевы инкубируют в течение 24-48 часов при 37°С, оценку результатов проводят визуально по формированию зон подавления роста бактерий, если последние имеют в диаметре 25-40 мм, то подтверждают их чувствительность к антибиотику, причем на чашках со средой без твина 80 зоны подавления отсутствуют. Кроме того, для метода серийных разведений готовят два ряда чашек с питательной средой Мюллера-Хинтона, куда вводят цефалоспориновый антибиотик в различных концентрациях, а именно 25, 50, 100, 250, 500 мкг/мл среды, при этом параллельно готовят такой же ряд чашек, но в среду дополнительно вводят твин 80 в концентрации (0,5-1)%, затем на чашки засевают по 0,05 мл исследуемого штамма из бактериальной взвеси, содержащей 108 м.кл./мл по оптическому стандарту мутности 10 ед., в качестве контроля используют среду Мюллера-Хинтона без антибиотика и среду Мюллера-Хинтона, содержащую (0,5-1)% твина 80 без антибиотика, посевы инкубируют при 37°С в течение 24-48 часов, после этого учитывают рост бактерий по величине минимальной подавляющей концентрации, чем она меньше, тем чувствительней штамм туляремийного микроба к антибиотикам при обязательном росте бактерий на контрольных чашках. При этом для проведения in vivo, животных заражают подкожно предварительно подготовленной культурой возбудителя туляремии в объеме 0,1 мл, содержащем 103 м.кл./мл, затем через 24 часа животных начинают лечить цефтазидимом в количестве 12 мг/мышь, разведенным в растворе (0,5-1)% твина 80, курс проводят 7 дней, а результаты оценивают по эффективности терапии, а именно по процентному отношению выживших животных к количеству зараженных или средней продолжительности жизни выживших животных. Причем предварительную подготовку исследуемых штаммов проводят по следующей технологии: готовят бактериальную взвесь концентрацией 109 м.кл./мл по оптическому стандарту мутности 10 ед., разводят ее физиологическим раствором в 10 раз до 108 м.кл./мл. Кроме того, предварительную подготовку культуры возбудителя туляремии осуществляют следующим образом: из суточной агаровой культуры готовят суспензию на физиологическом растворе, соответствующую 1 млрд м.кл./мл по оптическому стандарту мутности 10 ед., после ее титруют с помощью 10-кратных разведений в физиологическом растворе до концентрации 104 м.кл./мл. Изобретение позволяет повысить антибактериальную активность цефалоспоринов в отношении туляримийного микроба in vitro и in vivо, с использованием нетоксичного ПАВ – твин 80. 5 з.п. ф-лы, 1 ил., 3 табл., 3 пр.

Изобретение относится к медицинской микробиологии. Описан способ идентификации подвидов возбудителя туляремии Francisella tularensis subsp. tularensis, Francisella tularensis subsp. mediasiatica и Francisella tularensis subsp. holarctica, включающий стадии выделения ДНК микроорганизма из исследуемого материала и проведение с полученной ДНК двух реакций амплификации. При этом используется набор сконструированных специфических праймеров к вариабельным участкам области RD6 туляремийного микроба, где набор состоит из трех праймеров: RD6-com ATACTAGCTTCAATCTCTGTGG СТТТ RD6-hol ATGCACTGGTTGGAATACAAATC RD6-tul CACATAGCAAATTAGTTGGATATGGA и второй из двух праймеров: RD6-del1 AACAATACCAACACTATTGAGTAAAA RD6-del2 AGCCATGCAATTATTAAAGC. Подвид возбудителя туляремии определяют по размеру специфического амплификата, в случае первой реакции амплификации если он составляет 212 п.о., а во второй 85 п.о., то регистрируют Francisella tularensis subsp. holarctica, если соответственно 425-91 п.о., то Francisella tularensis subsp. tularensis и 419-85 п.о. определяют как Francisella tularensis subsp. mediasiatica. Изобретение расширяет арсенал средств для выявления трёх основных подвидов туляремийного микроба. 2 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области медицинской микробиологии и касается способа дифференциации бактерий Francisella tularensis subsp.mediasiatica

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской микробиологии, и касается способа оценки клинической эффективности антибактериальных препаратов для возбудителей особо опасных инфекций Francisella tularensis и Brucella spp
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике туляремии у людей, и касается дифференциации инфекционного и поствакцинального антительного ответа при туляремии у человека

 


Наверх