Патенты автора Напалкова Галина Матвеевна (RU)
Изобретение относится к медицине, лабораторной диагностике и касается способа ускоренного линейного иммуноэлектрофореза (ЛИЭФ) для дифференцирования буркхольдерий. Способ включает получение антигенного препарата, линейный иммуноэлектрофорез антигенов исследуемых микроорганизмов и последующий учет результатов, причем для быстрого выявления патогенных возбудителей сапа и мелиоидоза с использованием сывороток иммунных кроличьих или козьих, с титром антител в РИД не ниже 1:16, полученных иммунизацией ВСЭ из ацетон-высушенных клеток штаммов В. pseudomallei 100 или В. mallei 10230, предварительно обработанных ультразвуком 2 раза в течение 2 мин при 50 Гц с охлаждением, содержащих антитела к специфическому высокомолекулярному антигенному комплексу с м.м. не ниже 336 kDa, линейный электрофорез проводят в следующей постановке: пластинку фирмы «GelBond», размером 8,5×10 см, заливают 10 мл 1% раствора агарозы фирмы «Calbiochem», приготовленного на трис-вероналовом буфере, содержащем 0,1 г лактата кальция и 0,7 г азида натрия в 1 л буфера, рН 8,6, разведенном в 5 раз (этот же буфер используется в электродных отсеках), на расстоянии 1 см от края пластинки с анодной стороны вырезают полосу геля шириной 4-5 см, гель растапливают, охлаждают до 48°С, добавляют к нему 5-10 об.% сыворотки, содержащей антитела к исследуемым антигенам, и снова заливают на пластинку, между гелем с сывороткой и исследуемыми пробами антигенов оставляют контактную полоску геля шириной 1-2 мм, после застывания геля с сывороткой на границе с контактной полосой располагают прямоугольные гель-образцы с антигенами, подлежащими исследованию, гель-образцы готовят так же, как сыворотку, внося в охлажденный гель 5-10 об.% исследуемых антигенов, к краям геля прикладывают мостики из 5 слоев фильтровальной бумаги, смоченные электродным буфером, электрофорез проводят при напряженности электрического поля - 4-5 В/см в течение 3-5 ч при комнатной температуре, после остановки электрофореза пластинки просматривают, наличие линий преципитата на границе гель-образца и геля с сыворотками иммунными кроличьими или козьими, содержащими антитела к искомому антигенному комплексу, при данных условиях ЛИЭФ свидетельствует о присутствии антигенов патогенных В. pseudomallei и В. mallei, отрицательный результат указывает на отсутствие антигенов патогенных микроорганизмов, что позволяет дифференцировать возбудители сапа и мелиоидоза от непатогенных близкородственных буркхольдерий. Способ обладает простотой и быстротой исполнения, наглядностью, возможностью определения общих и специфических антигенов буркхольдерий, отбора иммунных сывороток, содержащих антитела к соответствующим антигенам, возможностью количественной оценки результатов при отсутствии потребности в сложном оборудовании. Данный способ может применяться как дополнительный аналитический метод выявления антигенов патогенных буркхольдерий. 5 ил., 4 пр.
Изобретение относится к биотехнологии
Изобретение относится к области медицины и касается разработки принципиальной схемы иммунизации экспериментальных животных антигенами с неизвестными показателями иммуногенности в части эффективной стимуляции выработки гуморальных антител, позволяющей определить предельно допустимую антигенную нагрузку, превышение которой приводит к снижению антителопродуцирующей функции макроорганизма
