Патенты автора Франк Людмила Алексеевна (RU)

Изобретение относится к биотехнологии, генной и белковой инженерии и предназначено для получения генетически слитых гибридных белков. Предложены рекомбинантные плазмиды ДНК pFLAG-sc14D5a-NLuc-r1 и pFLAG-NLuc-r2-sc14D5a, содержащие уникальный ген одноцепочечного антитела мыши, направленного против белка Е вируса клещевого энцефалита, и гены фрагментов люциферазы NLuc-r1 и NLuc-r2. Предложен гибридный белок, экспрессирующийся в трансформированных упомянутыми плазмидными ДНК клетках Escherichia coli Rosetta-gami2 с последующими выделением из цитоплазматической фракции и очисткой металл-хелатной хроматографией гибридных белков sc14D5a-NLuc-r1 и NLuc-r2-sc14D5a. Изобретение позволяет получить два гибридных белка, обладающих способностью связывать белки Е вируса клещевого энцефалита с комплементацией фрагментов люциферазы NanoLuc и возникновением биолюминесцентной активности в присутствии субстрата - целентеразина, как потенциально пригодной высокочувствительной системы для выявления вируса клещевого энцефалита в биологических образцах однофазным биолюминесцентным анализом. 3 н.п. ф-лы, 9 ил., 6 пр.

Группа изобретений относится к биотехнологии, генной и белковой инженерии. Сконструирована плазмида pET19b-Surv-OL, обеспечивающая в клетках Escherichia coli синтез рекомбинантного гибридного белка сурвивин-обелин, способного связываться с анти-сурвивин антителами и обладающего биолюминесцентной активностью Са2+-регулируемого фотопротеина обелина, и может быть использована в медицине. Указанная плазмида содержит последовательность ДНК SEQ ID NO: 1. Изобретение относится также к белку Surv-OL, выделенному из клеток Escherichia coli, трансформированных плазмидой pET19b-Surv-OL, с молекулярной массой 39,7 кДа; состоящему из сурвивина, коннекторного пептида - LEENLYFQGTA и апофотопротеина обелина Obelia longissima, имеющего аминокислотную последовательность, кодируемую нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 1. Изобретение позволяет обеспечить получение бифункционального гибридного белка, состоящего из рекомбинантного сурвивина, обладающего способностью связываться с соответствующими антителами к сурвивину и одновременно биолюминесцентной активностью, как потенциального высокочувствительного биолюминесцентного репортера для выявления онкомаркера сурвивина методом биолюминесцентного иммуноанализа конкурентного типа. 2 н.п. ф-лы, 6 ил., 4 пр.

Изобретение относится к микробиологической промышленности, биотехнологии, генной и белковой инженерии и касается рекомбинантной плазмидной ДНК pET19b-SAV, обеспечивающей синтез полноразмерного белка стрептавидина, имеющей молекулярную массу 4 МДа и размер 6126 п.о. и содержащей, в соответствии с физической и генетической картой плазмиды, сайты рестрикции NcoI, XhoI, NcoI-XhoI фрагмент ДНК плазмиды pET19b длиной 5643 п.о., включающий промотор T7lac, ген lacI белка-репрессора lac-оперона, ген β-лактамазы, определяющий резистентность к ампициллину при трансформации Е. coli, участок ori инициации репликации; фрагмент ДНК NcoI-XhoI размером 483 п.о., представляющий собой последовательность, кодирующую полноразмерный стрептавидин без лидерного пептида SEQ ID No. 1; а также штамма бактерий Escherichia coli - продуцента полноразмерного стрептавидина, полученного трансформацией культуры клеток Escherichia coli BL21-Codon Plus(DE3) плазмидной ДНК pET19b-SAV, имеющей нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 1 белка полноразмерного стрептавидина. Изобретение позволяет получить рекомбинантный штамм E. coli, обладающий способностью синтезировать стрептавидин с полноценной биологической активностью в раствор цитоплазмы, что упрощает процедуру получения высокоочищенного белка (одностадийная аффинная хроматография) по сравнению с получением стрептавидина из периплазматической, а также из нерастворимой фракций, требующего нескольких стадий очистки. 2 н.п. ф-лы, 4 ил., 3 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины, а именно к области ДНК аптамеров, способных специфично и с высоким сродством связываться с сердечным тропонином I человека. Основными областями применения ДНК-аптамеров к сердечному тропонину I являются клинические исследования, медицинская диагностика инфаркта миокарда, в том числе создание высокочувствительных и высокоэффективных систем для детекции сердечного тропонина I. ДНК аптамеры, связывающие сердечный тропонин I человека, представлены одноцепочечными ДНК. ДНК аптамер ТnАр2 имеет первичную последовательность 5'-GGCAGCAGGAAGACAAGACAGGCAGTGT CACGCGCTCAAGGGTGGAGGGGTCGGGG AGGTTGGTTCTGTGGTTGCTCTGT-3', отобран в результате позитивной селекции против нативного сердечного тропонина I человека и негативной селекции против человеческих сывороточного альбумина, сердечных тропонинов С и Т, миоглобина и креатинкиназы MB; ДНК аптамер TnAp2t1 имеет первичную последовательность 5'-AGACAAGACAGGCAGTGTCA CGCGCTCAAGGGTGGAGG GGTCGGGGAGGTTGGT-3', отобран в результате позитивной селекции против нативного сердечного тропонина I человека и негативной селекции против человеческих сывороточного альбумина, сердечных тропонинов С и Т, миоглобина и креатинкиназы MB и оптимизации последовательности аптамера ТnАр2; ДНК аптамер TnAp2t2 имеет первичную последовательность 5'-GGCAGTGTCACGCGCTCAAGG GTGGAGGGGTCGGGGAGGT-3', отобран в результате позитивной селекции против нативного сердечного тропонина I человека и негативной селекции против человеческих сывороточного альбумина, сердечных тропонинов С и Т, миоглобина и креатинкиназы MB и оптимизации последовательности аптамера ТnАр2; ДНК аптамер TnAp2t3 имеет первичную последовательность 5'-GCTCAAGGGTGGAGGGGTCGGGGAGGT-3', отобран в результате позитивной селекции против нативного сердечного тропонина I человека и негативной селекции против человеческих сывороточного альбумина, сердечных тропонинов С и Т, миоглобина и креатинкиназы MB и оптимизации последовательности аптамера ТnАр2; ДНК аптамер ТnАр12 имеет первичную последовательность 5'-GGCAGCAGGAAGACAAGACATCGGGAGGGAG GGAGGGCAGTCTAGTCTCATGTG TTTCCATGGTTCTGTGGTTGCTCTGT-3', отобран в результате позитивной селекции против нативного сердечного тропонина I человека и негативной селекции против человеческих сывороточного альбумина, сердечных тропонинов С и Т, миоглобина и креатинкиназы MB. Полученные ДНК аптамеры обладают способностью специфично и высокоафинно связываться с человеческим сердечным тропонином I, а также расширяется их ассортимент. 4 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Описан способ выявления в крови больных циркулирующих мишеней, ассоциированных с определенным диагнозом. Обрабатывают твердую фазу биоспецифическими реагентами, отделяют непрореагировавшую жидкую фазу, инкубируют с мишенью, ассоциированной с определенным диагнозом. Далее обрабатывают твердую фазу репортером, разделяют жидкую и твердую фазы. Проводят анализ твердой фазы. В качестве твердой фазы используют магнитные микрочастицы с ковалентно иммобилизованными молекулами стрептавидина, в качестве биоспецифического реагента для первой обработки твердой фазы используют ДНК-аптамер, связывающийся с поверхностью за счет гибридизации с меченным биотином олигонуклеотидом 5'-CGTGGTTACAGTCAGAGGAG-3'-Вio, комплементарным константному концевому участку ДНК-аптамера, а в качестве репортера - другой ДНК-аптамер, меченный конъюгатом того же олигонуклеотида с Са2+-регулируемым фотопротеином обелином. Техническим результатом изобретения является разработка более чувствительного, универсального, экспрессного и технологичного биолюминесцентного способа выявления мишеней, ассоциированных с определенным диагнозом, в крови пациентов. 3 ил., 2 пр.

Группа изобретений относится к биотехнологии, генной и белковой инженерии. Сконструирована плазмида pFLAG-sc14D5a-Rm7, обеспечивающая в клетках Escherichia coli синтез рекомбинантного белка sc14D5a-Rm7, способного связывать белок Ε вируса клещевого энцефалита и обладающего биолюминесцентной активностью. Создан штамм бактерий Escherichia coli - продуцент гибридного белка sc14D5a-Rm7 в цитоплазматическом растворе. Получен рекомбинантный белок sc14D5a-Rm7, выделенный из клеток Escherichia coli, трансформированных плазмидой pFLAG-sc14D5a-Rm7, имеющий молекулярную массу около 63,9 кДа; состоящий из одноцепочечного антитела человека против белка Ε вируса клещевого энцефалита, коннекторного пептида GGSGGSGGSGGS и рекомбинантной люциферазы Renilla muelleri; имеющий аминокислотную последовательность, кодируемую нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO:1, обеспечивает выявление белка Ε вируса клещевого энцефалита в диапазоне от 1 нг до 0,025 нг методом биолюминесцентного твердофазного иммуноанализа. Технический результат: получение бифункционального гибридного белка, обладающего способностью связывать белок Ε вируса клещевого энцефалита и одновременно биолюминесцентной активностью. 3 н.п. ф-лы, 7 ил., 6 пр.

Изобретение относится к получению сорбентов для выделения и детекции рекомбинантных белков, содержащих полигистидиновые последовательности. Предложен способ получения магнитного аффинного сорбента для выделения рекомбинантных белков. Способ включает нанесение пористого кремнеземного слоя на поверхность магнитных микросфер летучих зол от сжигания угля и пропитку раствором, содержащим ионы переходных металлов. В качестве микросфер используют фракцию магнитных микросфер, содержащую 40-41 мас.% стеклофазы. Нанесение пористого кремнеземного слоя осуществляют в гидротермальных условиях. Магнитные микросферы контактируют с жидкой реакционной смесью, содержащей тетраэтоксисилан и гексадецилтриаммоний бромид в качестве структуроформирующего агента. После нанесения кремнезёмного слоя твердую фазу отделяют, промывают, термообрабатывают и активируют при кипячении в водной среде. Изобретение позволяет повысить прочность кремнезёмной оболочки на поверхности микросфер без снижения сорбционной ёмкости по белкам среднего размера. 6 з.п. ф-лы, 2 ил., 3 табл., 9 пр.

Группа изобретений относится к биотехнологии, генной и белковой инженерии, конкретно к рекомбинантной плазмидной ДНК pG1-Rm7, обеспечивающей в клетках Escherichia coli синтез гибридного белка G1-Rm7, способного связывать фактор некроза опухолей и обладающего биолюминесцентной активностью люциферазы Renilla muelleri, где указанная плазмидная ДНК включает нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1, и может быть использована в медицине. Изобретения также относятся к белку pG1-Rm7 с молекулярной массой 65,4 кДа, состоящему из одноцепочечного антитела против фактора некроза опухолей, пептида GGSGGS и модифицированной люциферазы Renalla muelleri и характеризующемся SEQ ID NO: 2. Изобретения позволяют получить высокочувствительный репортер для выявления фактора некроза опухолей методом биолюминесцентного анализа. 2 н.п. ф-лы, 4 ил., 3 пр.

Способ одновременного определения двух аналитов биолюминесцентным молекулярным микроанализом относится к биохимии, а именно к способам проведения иммуноферментного и ДНК гибридизационного анализа. Способ одновременного определения двух аналитов биолюминесцентным молекулярным микроанализом включает обработку твердой фазы биоспецифическим реагентом, отделение непрореагировавшей жидкой фазы, обработку твердой фазы ферментосодержащим конъюгатом, разделение жидкой и твердой фаз и анализ твердой фазы, в котором в качестве биоспецифического реагента для первой обработки твердой фазы используют два иммуноглобулина или один иммуноглобулин с двойной специфичностью или два олигонуклеотида, а конечную обработку твердой фазы проводят одновременно двумя ферментсодержащими конъюгатами, состоящими, соответственно, из рекомбинантных Cа2+ зависимых фотопротеинов обелинов с разными характеристиками биолюминесценции и молекул разной биоспецифичностью, где в качестве рекомбинантных обелинов используют обелин W92F; H22E и обелин Y138F, с последующим анализом на планшетном биолюминометре с быстро перемещающимися широкополостными светофильтрами с разделением сигналов и по спектру и по времени. 4 ил., 3 пр.

Изобретение относится к биохимии, а именно к способам проведения иммуноферментного и ДНК-гибридизационного анализа

 


Наверх