Патенты автора Горкун Тарас Алексеевич (RU)
СПОСОБ ОЧИСТКИ ИМИГЛЮЦЕРАЗЫ // 2668158
Группа изобретений относится к медицине и биотехнологии и может быть использована в фармацевтической промышленности. Предложены способ дегликозилирования имиглюцеразы и очистки имиглюцеразы, включающий этап дегликозилирования имиглюцеразы. Способ дегликозилирования включает выделение полученной в клетках СНО имиглюцеразы и ее последующую обработку нейраминидазой, β-1,4-галактозидазой и β-N-ацетилглюкозаминидазой в одну стадию. Соотношение ферментов нейраминидазы: β-1,4-галактозидазы: β-N-ацетилглюкозаминидазы в смеси составляет: 6 Е:1 Е:14 Е в расчете на 1 г белка. Способ очистки имиглюцеразы включает гидрофобную хроматографию на Butyl-сефарозе, катионный обмен на SP-сефарозе, металло-хелатную хроматографию на IMAC-сефарозе, гидрофобную хроматографию на Phenyl-сефарозе, совмещенную с дегликозилированием целевого белка, фильтрацию через Q-сефарозу и катионный обмен на СМ-сефарозе. Изобретения позволяют получать продукт фармакопейного качества с содержанием не менее 99% имиглюцеразы (по обрашенно-фазовой ВЭЖХ), не более 4% родственных примесей (по эксклюзионной ВЭЖХ), с удельной активностью не менее 35 МЕ/мг и содержанием остаточных белков клетки-продуцента не более 50 нг/мг. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 1 ил., 10 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к получению рекомбинантного проинсулина человека, и может быть использовано в биомедицинской промышленности
