Патенты автора Щербаков Дмитрий Николаевич (RU)
Изобретение относится к биотехнологии. Описана рекомбинантная плазмида pET-GST-3CL, обеспечивающая синтез и транспорт химерной протеазы 3CL SARS-CoV-2 в периплазматическое пространство клеток E. coli в растворимой форме, имеющая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 2 размером 6981 п.н., и содержащая в соответствии с физической и генетической картой, представленной на фиг. 1, следующие элементы: - AmpR promoter, имеющий координаты с 494 п.н. по 598 п.н.; - генетический маркер, определяющий устойчивость к ампициллину клеток бактерии E. coli, трансформированных рекомбинантной плазмидой AmpR, и имеющий координаты с 599 п.н. по 1459 п.н.; - участок начала репликации ori, имеющий координаты с 1630 по 2218 п.н.; - lacI - ДНК-связывающий белок, который ингибирует экспрессию генов E. coli, обеспечивает экспрессию целевого рекомбинантного белка 3CL после добавления индуктора изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозида (IPTG) и имеет координаты с 3648 по 4730 п.н.; - lacI promoter, имеющий координаты с 4731 по 4808 п.н.; - промотор фага Т7, имеющий координаты с 5117 по 5135 п.н. и обеспечивающий экспрессию последовательности гена GST-3CL в клетках E. coli; - lac operator, имеющий координаты с 5136 по 5160 п.н.; - RBS - сайт связывания рибосомы, имеющий координаты с 5191 по 5196 п.н.; - ген GST - глутатион-S-трансфераза из Schistosoma japonicum, имеющий координаты с 5205 по 5857 п.н.; - Pep - участок, кодирующий пептид GSTSAVLQ, и имеющий координаты с 5859 по 5882 п.н.; - химерный ген 3CL SARS-CoV-2 с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 1, имеющий координаты с 5883 по 6806 п.н. и кодирующий синтез белка протеазы 3CL с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 3; - Т7 terminator, имеющий координаты с 6909 по 6956 п.н. Изобретение расширяет арсенал получения белка 3CL. 3 ил., 1 табл., 5 пр.
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к рекомбинантному плазмидному вектору, обеспечивающему экспрессию и секрецию моноклональных антител, и химерному моноклональному антителу M12B9ch. Описан рекомбинантный плазмидный вектор pVEAL-M12B9ch. Он обеспечивает стабильную экспрессию и секрецию химерного моноклонального антитела M12B9ch против ортопоксвирусов в клетках млекопитающих, имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 2 размером 10399 п.н. Описано рекомбинантное химерное моноклональное scFv-Fc антитело M12B9ch против ортопоксвирусов в клетках млекопитающих, полученное с использованием рекомбинантного плазмидного вектора pVEAL-M12B9ch. Техническим результатом изобретения является получение химерного моноклонального scFv-Fc антитела, нейтрализующего вирус осповакцины с более высокой активностью. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 4 ил., 4 пр.
Изобретение относится к биотехнологии. Описан конъюгат белка рецепторсвязывающего домена (RBD) поверхностного гликопротеина S вируса SARS-CoV-2, 308V-542N для получения вакцинного комплекса против коронавирусной инфекции COVID-19, наработанного в клетках CHO, имеющего длину 244 а.о., молекулярный вес 35 кДа, аминокислотную последовательность SEQ ID N 2, связанного с полимером полиглюкин-спермидин (PGS) при расчетном соотношении молекул белка RBD и молекул PGS - 1:1. Также описан вакцинный комплекс против коронавирусной инфекции COVID-19 в виде наночастиц, индуцирующих формирование Т-клеточного иммунитета и SARS-CoV-специфические антитела, обладающие вируснейтрализующей активностью, и состоящих из молекул конъюгата полиглюкин-спермидин-белок RBD по п.1 и молекул плазмидной ДНК pVAX-RBD, причем каждая наночастица имеет размер не менее 50 нанометров, содержит ядро, состоящее из молекул плазмидной ДНК pVAX-RBD и расположенного вокруг ядра слоя конъюгата полиглюкин-спермидин-белок RBD, удерживаемого за счет ионного взаимодействия между отрицательно заряженным ядром и положительно заряженным спермидином. Техническим результатом заявляемого изобретения является создание более простой иммуногенной конструкции, которая при внутримышечном введении способна индуцировать высокий уровень антител, обладающих вируснейтрализующей активностью, а также обеспечивать вирус-специфический Т-клеточный ответ. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 16 ил.,1 табл., 6 пр.
Изобретение относится к области фармакологии и медицины, а именно к применению трициклического серусодержащего производного 1,2-дигидрохинолина общей формулы (I) для подавления репликации бета-коронавируса, включая SARS-CoV-2. Соединения формулы (I) обладают низкой токсичностью и могут быть использованы для лечения заболеваний, вызванных бета-коронавирусами, включая SARS-CoV-2. Техническим результатом является эффективное подавление репликации бета-коронавирусов, включая SARS-CoV-2, характеризующийся высокой эффективностью подавления репликации коронавируса в культуре клеток Vero Е6 при низких значениях эффективной концентрации ЕС50, низкой цитотоксичностью и высоким значением индекса селективности SI. В общей формуле (I) R1 представляет собой заместитель, выбранный из метил-, этил-, метокси-, этоксигруппы; R2 представляет собой заместитель, выбранный из метил-, этил-, метокси-, этоксигруппы; R3 представляет собой заместитель, выбранный из метил-, этил-, метокси-, этоксигруппы; R4 представляет собой заместитель, выбранный из метил-, бензил-, 3-фенилакрилоил-, 3-(4-метоксифенил)акрилоил-, 3-фенилпропаноил-, фенилэтила, 2-(4-фторфенокси)ацетил-, 4-хлорфеноксиацетил-, 2-(2,4-дихлорфенокси)ацетил-, 4-нитробензоил-, 2-(1,3-диоксоизоиндолин-2-ил)-3-фенилпропаноил-) группы; 3,4-дихлорфенилкарбамоил-, фуран-2-карбонил-, этилкарбамоил-, 2-нафтилилоксиацетил-, 2-(1,3-диоксоизоиндолин-2-ил)ацетил-, 2-(1,3-диоксогексагидро-1Н-изоиндол-2(3Н)-ил)ацетил-, 2-морфолиноацетил-, пиперидин-1-илацетил-, 2-(4-карбамоилпиперидин-1-ил)ацетил-, 2-(2,5-диоксопирролидин-1-ил)ацетил-, 2-феноксиацетил-, 2-1,3-диоксо-1Н-бензо[de]изохинолин-2(3H)-ил)ацетил-, 2-бензо[d]оксазол-2-илтио)ацетил-, 2-(бензо[d]тиазол-2-илокси)ацетил-, бензоксазол-2-илмеркаптоацетил-, фураноил-, 2-нафлинилиоксиметилкарбонил, 3,4-дихлорфенилкарбамоил; X представляет собой заместитель, выбранный из серы, незамещенного или замещенного по положениям 2,3,4,5,6-ариламина, выбранного из группы, включающей 4-(4-хлорбензилокси)фенилимино-, 4-изопропилфенилимино-, 4-(6-метилбензо[d]тиазол-2-ил)фенилимино-, 4-(N-бензоилсульфамоил)фенилимино-, 4-этоксифенилимино-, 4-этоксикарбонилфенилимино-, фенилимино-, 4-хлорфенилимино-, 3-хлорфенилимино-, 4-сульфамоилфенилимино-, 4-(N-ацетилсульфамоил)фенилимино-, 4-(N-(тиазол-2-ил)сульфамоил)фенилимино-, 2-никотиноилгидразоно-, 4-((4-хлорбензил)окси)фенилимино-, 2-метоксифенилимино-, 4-(N-(пиримидин-2-ил)сульфамоил)фенилимино-, 4-(N-(4,6-диметилпиримидин-2-ил)сульфамоил)фенилимино-. 3 з.п. ф-лы, 1 ил., 1 табл., 20 пр.
Изобретение относится к области фармакологии и медицины и направлено на лечение заболеваний, вызванных бета-коронавирусами, включая SARS-CoV-2. Описано применение кислородсодержащего производного 6-галогенхинолина общей формулы I, где Hal представляет собой заместитель, выбранный из брома, фтора, хлора; R1 - заместитель, выбранный из водорода, алкила (С1-С10), нормального или разветвленного строения, арила без заместителей или замещенного по положениям 2, 3, 4, 5, 6; R2 - заместитель, выбранный из водорода, NHалкил-, NHарил-, NHгетарил-, пирролидинил-, пиперидинил-, морфолинил-, пиперазинил-, гомопиперазинил-, тетрагидрохинолинил-, тетрагидроизохинолинил-, гексаметилениминил-; -SC(S)X, где X=NHалкил-, NHарил-, NH-гетарил-, пирролидинил-, пиперидинил-, морфолинил-, пиперазинил-, гомопиперазинил-, тетрагидрохинолинил-, тетрагидроизохинолинил-, гексаметилениминил-; R3 - заместитель, выбранный из водорода, алкила (С1-С10), нормального или разветвленного строения, алкиларила, арила без заместителей или замещенного по положениям 2, 3, 4, 5, 6 для подавления репликации бета-коронавируса. Технический результат: обеспечение эффективного подавления репликации бета-коронавируса, включая SARA-CoV-2, при низких значениях эффективной концентрации ЕС50, низкой цитотоксичности и высоком значении индекса селективности. 4 з.п. ф-лы, 1 табл., 8 пр.
Изобретение относится к области фармакологии и медицины и направлено на лечение заболеваний, вызванных бета-коронавирусами, включая SARS-CoV-2. Описано применение производного 1,3,5-триазино-2,4-диамина общей формулы I, где R1 и R2 представляют собой заместитель, выбранный из водорода; алкила (С1-С10) неразветвленного или разветвленного строения; арила без заместителей или замещенного по положениям 2,3,4,5,6; гетарила, представляющего собой азот-, и/или серу, и/или кислородсодержащий пяти- или шестичленный гетероцикл; R3 представляет собой заместитель, выбранный из водорода; или алкила (С1-С10), неразветвленного или разветвленного строения; или арила без заместителей или замещенного по положениям 2,3,4,5,6; или гетарила, где гетарил - азот-, и/или серу, и/или кислородсодержащий пяти- или шестичленный гетероцикл; или алкилNН, где алкил (С1-С10) неразветвленного или разветвленного строения; или арилNH-, где арил без заместителей или замещенного по положениям 2,3,4,5,6; или гетарилNН-, где гетарил - азот-, и/или серу, и/или кислородсодержащий пяти- или шестичленный гетероцикл; или пирролидин-1-ил, пиперидин-1-ил, морфолин-4-ил-, пиперазин-1-ил-, гомопиперазин-1-ил-, тетрагидрохинолин-1-ил-, тетрагидроизохинолин-2-ил-, гексаметилениминил; или R4CH2-, где R4 выбран из алкила (С1-С10), неразветвленного или разветвленного строения; арила без заместителей или замещенного по положениям 2,3,4,5,6; гетарила, где гетарил - азот-, и/или серу, и/или кислородсодержащий пяти- или шестичленный гетероцикл; пирролидин-1-ила, пиперидин-1-ила, морфолин-4-ила-, пиперазин-1-ила-, гомопиперазин-1-ила-, тетрагидрохинолин-1-ила-, тетрагидроизохинолин-2-ила, гексаметилениминила для подавления репликации бета-коронавируса. Технический результат: обеспечение эффективного подавления репликации бета-коронавируса, включая SARA-CoV-2, при низких значениях эффективной концентрации ЕС50, низкой цитотоксичностью и высоким значением индекса селективности. 4 з.п. ф-лы, 1 табл., 7 пр.
Изобретение относится к биотехнологии. Описана плазмида pVBL-RBDdelta, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующая белок RBD SARS-CoV-2 линии B.1.617.2 и обеспечивающая экспрессию белка этого RBD в клетках млекопитающих и дальнейшую очистку с помощью аффинной хроматографии. Получаемый белок RBD предназначен для непосредственного производства вакцинного препарата против SARS-CoV-2 линии B.1.617.2. Изобретение расширяет арсенал средств для лечения коронавирусной инфекции. 1 ил., 1 табл., 4 пр.
Изобретение относится к биотехнологии. Описана плазмида pVBL-RBDomik, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую белок RBD SARS-CoV-2 линии B.1.1.529, и обеспечивающая экспрессию белка этого RBD в клетках млекопитающих и дальнейшую очистку с помощью аффинной хроматографии. При этом получаемый белок RBD предназначен для непосредственного производства вакцинного препарата против SARS-CoV-2 линии B.1.1.529. Изобретение может быть использовано для получения белка RBD - рекомбинантного структурного домена гликопротеина spike сарбековируса SARS-CoV-2 линии B.1.1.529. 1 ил., 1 табл., 4 пр.
Изобретение относится к биотехнологии. Описана рекомбинантная плазмида pET-GST-3CL-GPG, обеспечивающая синтез протеазы 3CL SARS-CoV-2 в клетках Е.coli в растворимой форме, имеющая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 2. Плазмида имеет карту, представленную на фиг. 1, и содержит следующие элементы: AmpR promoter; генетический маркер, определяющий устойчивость к ампициллину клеток бактерии Е.coli, трансформированных рекомбинантной плазмидой AmpR; участок начала репликации ori; лактозный репрессор lacI; ДНК-связывающий белок, который ингибирует экспрессию генов E.coli и обеспечивает экспрессию целевого рекомбинантного белка 3CL-GPG-6His после добавления индуктора изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозида (IPTG); lacI promoter; промотор фага Т7, обеспечивающий экспрессию последовательности гена GST-3CL-GPG в клетках E.coli; lac operator; RBS; ген GST-глутатион-S-трансфераза из Scihistosoma japonicum; Pep - участок, кодирующий пептид GSTSAVLQ; химерный ген 3CL SARS-CoV-2 включающий также последовательность GPG и 6His, имеющий нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1, и кодирующий синтез протеазы 3CL-GPG-6His с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 3; Т7 terminator. Изобретение может быть использовано в биотехнологии для получения фермента 3CL, являющегося основной протеазой SARS-CoV-2. При этом обеспечивается синтез и транспорт химерного варианта белка 3CL в периплазматическое пространство E.coli в растворимой форме. 3 ил., 1 табл., 5 пр.
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к универсальному рекомбинантному вектору pBuc и плазмидной генетической конструкции pBuc-7В4, обеспечивающей синтез и секрецию полноразмерных рекомбинантных белков моноклональных антител, в частности антитела 7В4 против вируса Западного Нила, в клетках яичника китайского хомяка (СНО) и полученной с использованием указанного вектора pBuc, и может быть использовано в медицине и биотехнологии. Данные белки будут обладать терапевтическим потенциалом. Также их можно будет использовать в научно-исследовательских целях. Изобретение позволяет создать универсальный интеграционный вектор pBuc и плазмидную генетическую конструкцию pBuc-7В4, обеспечивающую синтез и секрецию антитела 7В4 против вируса Западного Нила в клетках животных и полученную с использованием указанного вектора pBuc. 2 н.п. ф-лы, 3 ил., 2 табл., 4 пр.
Изобретение относится к биотехнологии и генетической инженерии. Создана плазмидная ДНК-матрица pVAX-RBD, имеющая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1 размером 3710 п.н., молекулярную массу 2.6×103 кДа, содержащая целевой ген, кодирующий химерный белок 176-RBD, перед которым находится промотор РНК-полимеразы фага Т7, обеспечивающий синтез in vitro мРНК-RBD с помощью РНК-полимеразы Т7. Молекула мРНК-RBD, имеющая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 2, получена с использованием ДНК-матрицы pVAX-RBD, содержит открытую рамку считывания, кодирующую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, обеспечивающую синтез и секрецию белка-иммуногена RBD SARS-CoV 2 в организме млекопитающих, и содержащую гибридную сигнальную последовательность 176, консенсусную последовательность Козак, 7-метилгуанозиновый кэп на 5'-конце мРНК, полиаденозиновый (поли А) хвост на 3'-конце мРНК, длиной 150-200 нуклеотидов, и 5'- и 3'-нетранслируемые области (UTR) перед и после открытой рамки считывания. Комплекс в виде наночастиц, индуцирующих SARS-CoV-специфические антитела, обладающие вируснейтрализующей активностью, состоящих из молекул конъюгата полиглюкинхпермидин и молекул мРНК-RBD, взятых в разных зарядовых соотношениях от 1:1 до 1:30, соответствующих весовому соотношению от 1:3 до 1:90, имеющих размер в диапазоне 50-900 нанометров, причем каждая наночастица содержит ядро, состоящее из молекул мРНК-RBD и покрытое слоем конъюгата полиглюкинхпермидин, удерживаемого за счет ионного взаимодействия между отрицательно заряженным ядром и положительно заряженным спермидином. Техническим результатом является создание более эффективного средства доставки мРНК-RBD в клетки организма для синтеза в них белка RBD SARS-Cov-2 и повышение уровня секреции указанного белка из клеток для обеспечения презентации белка RBD иммунной системе организма. 3 н.п. ф-лы, 7 ил., 1 табл., 5 пр.
Изобретение относится к молекулярной генетике и биотехнологии, а именно к универсальному рекомбинантному вектору, который используют для получения плазмидных генетических конструкций, обеспечивающих синтез и секрецию целевых рекомбинантных белков в клетках дрожжей вида Kluyveromyces lactis. ниверсальный рекомбинантный вектор pSVO имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 1 и содержит элементы в соответствии с физической и генетической картой, представленной на Фиг. 1г. Плазмидная генетическая конструкция pSVO-Gluc обеспечивает синтез и секрецию целевого белка люциферазы из Gaussia princeps в клетках дрожжей вида Kluyveromyces lactis, имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 2 и содержит элементы в соответствии с физической и генетической картой, представленной на Фиг. 2. Плазмидная генетическая конструкция pSVO-Vic обеспечивает синтез и секрецию целевого белка прохимозина альпака в клетках дрожжей вида Kluyveromyces lactis, имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 3 и содержит элементы в соответствии с физической и генетической картой, представленной на Фиг. 5. Техническим результатом заявляемого изобретения является создание универсального рекомбинантного вектора pSVO и плазмидных генетических конструкций pSVO-Gluc и pSVO-Vic, обеспечивающих синтез и секрецию целевых белков в клетках дрожжей вида Kluyveromyces lactis и полученных с использованием указанного универсального вектора. 3 н.п. ф-лы, 5 ил., 2 табл., 3 пр.
Изобретение относится к генной инженерии, биотехнологии и медицине. Описан интегративный плазмидный вектор pVEAL2-S-RBD, обеспечивающий экспрессию и секрецию белка RBD коронавируса SARS-CoV-2 в клетках млекопитающих, имеющий размер 9910 п.н., нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 2 и содержащий элементы в соответствии с физической и генетической картой, представленной на Фиг. 1. Также создан рекомбинантный штамм клеточной линии яичника китайского хомячка СНО-K1-RBD - продуцент рекомбинантного белка RBD вируса SARS-CoV-2, содержащего интегративный плазмидный вектор pVEAL2-S-RBD по п. 1, имеющий нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 2, обеспечивающий экспрессию и секрецию белка RBD коронавируса SARS-CoV-2 и депонированный под номером 322 в коллекции культур клеток ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора (справка о депонировании прилагается). Также получен рекомбинантный белок RBD коронавируса SARS-CoV-2, продуцируемый рекомбинантным штаммом клеток яичника китайского хомячка СНО-K1-RBD по п. 2 и имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3. Техническим результатом является повышение выхода целевого рекомбинантного белка RBD SARS-CoV-2. Изобретение может быть использовано для создания вакцин. 3 н.п. ф-лы, 5 ил., 1 табл., 5 пр.
Изобретение относится к биотехнологии. Описан универсальный интеграционный вектор pVEAL и рекомбинантая плазмида pVEAL-15742, обеспечивающая синтез и секрецию scFv-Fc антител ADI-15742, способных нейтрализовать вирус Эбола в клетках млекопитающих. Универсальный интеграционный вектор pVEAL служит для создания целевых плазмидных конструкций, обеспечивающих синтез и секрецию scFv-Fc моноклональных антител, имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 1 и содержит элементы в соответствии с физической и генетической картой, представленной на Фиг. 1. Плазмидная генетическая конструкция pVEAL-15742, обеспечивающая синтез и секрецию целевого белка scFv-Fc антитела ADI 15742 против вируса Эбола, имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 2 и содержит элементы в соответствии с физической и генетической картой, представленной на Фиг. 2. Техническим результатом заявляемого изобретения является создание универсального интеграционного вектора pVEAL и плазмидной генетической конструкции pVEAL-15742, обеспечивающей синтез и секрецию целевого белка scFv-Fc антитела ADI 15742 против вируса Эбола в клетках млекопитающих СНО-K1, полученного с использованием указанного универсального вектора pVEAL. 2 н.п. ф-лы, 6 ил., 5 пр.
Изобретение относится к биотехнологии. Заявлена плазмида pUSB2-AmQ. Размер плазмиды pUSB2-AmQ 7495 пар оснований. Плазмида pUSB2-AmQ содержит ряд структурных элементов. Синтетический промотор обеспечивает эффективную транскрипцию контролируемой мРНК. Рекомбинантный ген α-амилазы В. amyloliquefaciens кодирует целевой рекомбинантный белок. Последовательность bla кодирует белок бета-лактамазу. Последовательность bla является селективным маркером для трансформации штаммов Е. coli. Участок repB обеспечивает инициацию репликации в штаммах В. subtilis. Хлорамфениколацетилаза является селективным маркером для трансформации штаммов В. subtilis. Рекомбинантный штамм Bacillus subtilis WB800N/pUSB2-AmQ получен трансформацией исходного штамма плазмидой pUSB2-AmQ. Штамм обеспечивает продукцию α-амилазы. При культивировании штамм Bacillus subtilis WB800N/pUSB2-AmQ обеспечивает синтез рекомбинантной альфа-амилазы 90% от общего секретируемого белка Bacillus subtilis. 2 н.п. ф-лы, 7 ил., 5 табл., 4 пр.
Группа изобретений относится к рекомбинантной плазмиде, обеспечивающей синтез рекомбинантного модифицированного тканевого фактора человека, и рекомбинантному штамму, продуцирующему рекомбинантный тканевый фактор человека. Предложена рекомбинантная плазмида pET21-TF7 размером 6171 пар оснований (п.о.), содержая следующие структурные элементы: промотор бактериофага Т7; рекомбинантный ген, кодирующий модифицированный тканевой фактор человека; нетранслируемую область терминации транскрипции бактериального оперона; терминатор РНК-полимеразы фага Т7; последовательность bla (AmpR); последовательность ColE1 (ori). При этом рекомбинантный ген модифицированного тканевого фактора человека имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1 от нуклеотида в положении 5205 п.о. до нуклеотида в положении 5996 п.о., кодирующий целевой белок с полной аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2, встроенный по сайтам рестрикции FauND I и CciNI в область полилинкера вектора рЕТ21а, содержащего промотор и терминатор РНК-полимеразы фага Т7. Указанная плазмида обеспечивает синтез рекомбинантного модифицированного тканевого фактора человека, размером 29,6 кДа в клетках Escherichia coli BL21(DE3). Предложен также рекомбинантный штамм Escherichia coli BL21(DE3)/pET21-TF7, продуцирующий рекомбинантный тканевый фактор человека и полученный трансформацией указанной рекомбинантной плазмидой pET21-TF7. Группа изобретений обеспечивает высокий и стабильный выход целевого продукта. 2 н.п. ф-лы, 5 ил., 1 табл., 3 пр.
Изобретение относится к биотехнологии, медицине и молекулярной биологии, в частности к конструированию in vitro ДНК-конструкции pET21-VP40VE, содержащей ген матриксного белка VP40 вируса Эбола (штамм Zaire, изолят Mayinga) и рекомбинантному белку VP40-ВЭ, обладающему иммуногенными и антигенными свойствами. Рекомбинантная плазмидная ДНК pET21-VP40VE предназначена для экспрессии гена матриксного белка VP40 вируса Эбола (штамм Zaire, изолят Mayinga) в прокариотической системе E.coli и получения рекомбинантного белка VP40-VE, которая имеет размер 6366 п.н. и содержит в своем составе: ген bla (координаты с 599 по 1459 п.н.) в качестве генетического маркера, определяющего устойчивость к ампициллину клеток бактерии E.coli (BL21/DE3(+), трансформированных рекомбинантной плазмидой pET21-VP40VE; участок начала репликации ori (координаты с 1630 по 2218 п.н.); промотор фага T7 (координаты с 5117 по 5135 п.н.); лактозный репрессор (координаты с 3648 п.н. по 4730 п.н.); ДНК-связывающий белок, который ингибирует экспрессию генов E.coli и обеспечивает экспрессию целевого рекомбинантного белка VP40-ВЭ; уникальные сайты узнавания рестрикционными эндонуклеазами, имеющие следующие координаты: NheI (5204 п.н.) и XhoI (6205 п.н.); ген VP40 ВЭ (штамм Zaire, изолят Mayinga) (981п.н.), встроенный в экспрессионную кассету по сайтам рестрикции NheI (5204 п.н.) и XhoI (6205 п.н.) (с 4479 по5459 нуклеотид геномной РНК), который кодирует 327 аминокислотных остатков (а.о.) вирусного матриксного белка VP40; последовательность (18 п.н.), кодирующая полигистидиновый (6xHis) политракт из шести гистидинов на N-конце кодируемого белка для последующей очистки его с помощью метода аффинной Ni-хроматографии. Рекомбинантный белок VP40-ВЭ получен в результате экспрессии гена матриксного белка VP40 вируса Эбола (штамм Zaire, изолят Mayinga) в бактериальной системе экспрессии E.coli в составе рекомбинантной ДНК-конструкции pET21-VP40VE, имеющий молекулярную массу 36114,68 Да и аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1 длиной 333 а.о., включая 6 гистидинов и стоп-кодон, и обладающий иммуногенными и антигенными свойствами и предназначенный для индукции в организме мышей линии Balb/c антител, узнающих в иммунохимических реакциях вирусный белок VP40-BE, а также взаимодействующий с мышиными моноклональными антителами, поликлональными козьими и человеческими антителами, специфичными к инактивированному и инфекционному вирусу Эбола. Изобретение позволяет повысить выход целевого рекомбинантного матриксного белка VP40-ВЭ. 2 н.п. ф-лы, 14 ил., 3 табл., 8 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой рекомбинантную плазмидную ДНК pET21-NPVE предназначенную для экспрессии гена нуклеопротеина NP вируса Эбола (штамм Zaire, изолят Mayinga) в прокариотической системе E.coli и получения рекомбинантного белка NP-ВЭ, имеет размер 7593 п.н. и содержит в своем составе: ген bla (координаты с 599 по 1459 п.н.) в качестве генетического маркера; участок начала репликации ori (координаты с 1630 по 2218 п.н.); промотор фага T7 (координаты с 5117 по 5135 п.н.; лактозный репрессор (координаты с 3648 п.н. по 4730 п.н.); ДНК-связывающий белок, который ингибирует экспрессию генов E.coli и обеспечивает экспрессию целевого рекомбинантного белка NP-ВЭ после добавления индуктора изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозида (IPTG); уникальные сайты узнавания рестрикционными эндонуклеазами, имеющие следующие координаты: NheI (5209 п.н.) и XhoI (7432 п.н.); полноразмерный ген NP вируса Эбола (изолят Mayinga, штамм Zaire) 2217 п.н. (с 470 по 2686 нуклеотид геномной РНК), встроенный в экспрессионную кассету по сайтам рестрикции NheI (5209 п.н.) и XhoI (7432 п.н.), который кодирует 739 аминокислотных остатков (а.о.) вирусного нуклеопротеина; последовательность (18 п.н.), кодирующая полигистидиновый (6xHis) политракт из шести гистидинов на N-конце кодируемого белка для последующей очистки его с помощью метода аффинной Ni-хроматографии и рекомбинантный белок NP-ВЭ полученный в результате экспрессии гена нуклепротеина NP вируса Эбола (штамм Zaire, изолят Mayinga) в бактериальной системе экспрессии E.coli в составе рекомбинантной ДНК-конструкции pET21-NPVE, имеющий расчетную молекулярную массу 84457,42 Да, и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 длиной 748 а.о., включая 6xHis, и стоп-кодон, и обладающий иммуногенными и антигенными свойствами, и предназначенный для индукции в организме мышей линии Balb/c антител, узнающих в иммунохимических реакциях вирусный белок NP-ВЭ, а также взаимодействующий с мышиными моноклональными антителами, поликлональными козьими и человеческими антителами, специфичными к инактивированному и инфекционному вирусу, соответственно. Изобретение позволяет повысить выход целевого рекомбинантного белка NP-ВЭ. 2 н.п. ф-лы, 3 табл., 14 ил.
Группа изобретений относится к рекомбинантной плазмиде pET32-TrexVic, обеспечивающей синтез химерного белка прохимозина Vicugna pacos, а также рекомбинантному штамму Escherichia coli, продуцирующему указанный белок. Рекомбинантная плазмида pET32-TrexVic имеет размер 6826 пар оснований (п.о.) и обеспечивает синтез химерного белка прохимозина Vicugna pacos размером 52 кДа в клетках Escherichia coli BL21(DE3)pLysE. Плазмида содержит следующие существенные для ее функционирования и экспрессии целевого белка структурные элементы: промотор бактериофага Т7, рекомбинантный ген прохимозина Vicugna pacos, кодирующий целевой химерный белок, терминатор РНК-полимеразы фага Т7, последовательность тиоредоксина, добавленную в состав нуклеотидной последовательности гена прохимозина Vicugna pacos на N-конец, последовательность bla (AmpR), кодирующую белок бета-лактамазу, последовательность ColE1 (ori), обеспечивающую репликацию плазмиды в штаммах Е. coli. При этом рекомбинантный ген белка прохимозина Vicugna pacos имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1 от нуклеотида в положении 5209 п.о. до нуклеотида в положении 6649 п.о., кодирующий целевой химерный белок прохимозин Vicugna pacos с полной аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2, встроенный по сайтам рестрикции FauND I и HindIII в область полилинкера вектора рЕТ32а, содержащего промотор и терминатор РНК-полимеразы фага Т7. Предложен также штамм Escherichia coli BL21(DE3)pLysE/pET32-TrxVic, продуцирующий химерный белок прохимозина Vicugna pacos и полученный трансформацией рекомбинантной плазмидой pET32-TrexVic. Группа изобретений обеспечивает высокую скорость рефолдинга целевого фермента. 2 н.п. ф-лы, 5 ил., 2 табл., 5 пр.
Изобретение относится к соединению гидрохлорид 1,7,7-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-ил 3-(пиперидин-1-ил)пропионат формулы I
,у которого выявлена биологическая активность, заключающаяся в ингибировании репродукции вируса Эбола. Данное соединение I предлагается использовать в качестве ингибитора репродукции вируса Эбола, которое может быть применено в медицине, вирусологии и фармакологии. Технический результат - повышение эффективности подавления репродукции вируса Эбола по сравнению с соединением-прототипом и расширение ассортимента ингибиторов репродукции данного вируса. 1 табл., 6 пр.
Группа изобретений относится к области биотехнологии, генной инженерии и медицины. Предложен искусственный ген YkuJ-MPER, кодирующий белок-иммуноген YkuJ-MPER против ВИЧ-1, имеющий нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1 длиной 360 п.н. Предложена также рекомбинантная плазмидная ДНК pET21a-YkuJ-MPER, предназначенная для получения белка-иммуногена, обеспечивающего индукцию ВИЧ-специфического В-клеточного ответа, имеющая размер 5700 п.н., молекулярную массу 3,8·103 кДа, содержащая ген YkuJ-MPER, кодирующий белок-иммуноген YkuJ-MPER против ВИЧ-1, находящийся под контролем промотора РНК-полимеразы фага Т7, обеспечивающего его экспрессию в клетках Е. coli. Предложен также искусственный белок-иммуноген YkuJ-MPER, состоящий из участка белка В. subtilis YkuJ и двух участков MPER ВИЧ-1, имеющий молекулярную массу 14,2 кДа и аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2. Группа изобретений обеспечивает эффективную индукцию широконейтрализующих анти-ВИЧ-1 антител при подборе оптимальной стратегии иммунизации. 3 н.п. ф-лы, 12 ил., 1 табл., 6 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению конъюгатов люминесцентных наночастиц диоксида кремния с антителами, и может быть использовано в диагностике для выявления гиперэкспрессирующегося на поверхности опухолевых клеток рецептора эпидермального фактора роста человека 2 (HER2/neu). Получают конъюгат люминесцентных наночастиц диоксида кремния с рекомбинантными однодоменными нано - моноантителами ламы, характеризующийся тем, что люминесцентные наночастицы диоксида кремния со средним размером 50±5 нм имеют модифицированную эпоксидными группами гидрофильную поверхность, химически связанную с аминогруппами рекомбинантных однодоменных нано - моноантител ламы, имеющих аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, молекулярную массу 17 кДа и способных специфически взаимодействовать с рекомбинантным белком HER2/neu. Изобретение повышает эффективность использования конъюгатов молекул - маркеров с рекомбинантными нано – моноантителами, специфичными к белку HER2/neu. 1 з.п. ф-лы, 7 ил., 1 табл., 8 пр.
Группа изобретений относится к рекомбинантной плазмиде, обеспечивающей синтез химерного белка прохимозина В Bos Taurus, и рекомбинантному штамму Е. coli - продуценту химерного белка прохимозина В Bos taurus в клетках E. coli. Рекомбинантная плазмида рЕТ21а-ProChym размером 6504 пар оснований (п.о.) содержит следующие существенные для ее функционирования и экспрессии целевого белка структурные элементы: промотер бактериофага Т7, обеспечивающий эффективную транскрипцию контролируемой мРНК; рекомбинантный ген прохимозина В Bos taurus, кодирующий целевой химерный белок; Т7 терминатор, являющийся нетранслируемой областью терминации транскрипции бактериального оперона, обеспечивающей эффективное окончание транскрипции; последовательность экспрессионного тага Т7, добавленную в состав нуклеотидной последовательности гена прохимозина В Bos taurus на N-конец, для увеличения выхода целевого белка; последовательность blа, кодирующий белок бета-лактамазу, являющуюся селективным маркером для трансформации штаммов Е. coli; последовательность ColE1, обеспечивающий репликацию плазмиды в штаммах Е. coli. Рекомбинантный ген белка прохимозина В Bos taurus имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1 от нуклеотида в положении 5205 п.о. до нуклеотида в положении 6347 п.о., кодирующий целевой химерный белок прохимозин В Bos taurus с полной аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2, встроенный по сайтам рестрикции FauND I и Sfr274 I в область полилинкера вектора рЕТ21а, содержащего промотор и терминатор РНК-полимеразы фага Т7. Предложенный рекомбинантный штамм Escherichia coli BL21(DE3)pLysE рЕТ21а-ProChym получен трансформацией рекомбинантной плазмидой рЕT21a-ProChym и депонирован в Коллекции бактерий, бактериофагов и грибов ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора под регистрационным номером В-1362. Группа изобретений обеспечивает высокую продукцию прохимозина. 2 н.п. ф-лы, 5 ил., 2 табл., 6 пр.
Способ очистки нитчатого бактериофага М13 // 2610178
Изобретение касается способа очистки нитчатого бактериофага М13. Способ включает удаление бактериальной массы после наработки бактериофага путем первого и второго последовательного центрифугирования с последующей первой очисткой супернатанта бактериофага изоэлектрическим осаждением реагентом при pH 4,2, последующих третьего центрифугирования и ресуспендирования осадка с бактериофагом, а также повторной очисткой суспензии бактериофага изоэлектрическим осаждением реагентом при pH 4,2 и четвертого центрифугирования осадка с бактериофагом с получением готового продукта. Для изоэлектрического осаждения в качестве реагента используют натрий-ацетатный буфер со значением рН=4,2 в соотношении с супернатантом бактериофагов не менее 3:1 при первом изоэлектрическом осаждении, осадок с бактериофагами после третьего центрифугирования ресуспендировали в TBS-буфере, а при повторной очистке ресуспендированного бактериофага изоэлектрическим осаждением используют натрий-ацетатный буфер со значением рН=4,2 в соотношении с ресуспендированным бактериофагом не менее 1:1. Причем первое и второе центрифугирование проводят соответственно при 5000 об/мин и 12000 об/мин в течение 10 минут при 20°С, а третье и четвертое центрифугирование осуществляют при 10000 об/мин в течение 10 минут при 4°С. Изобретение обеспечивает более высокий уровень стерильности и чистоты бактериофага, особенно малых его количеств при более простой методике. 1 з.п. ф-лы, 7 табл., 9 пр.
Изобретение относится к молекулярной биологии, вирусологии и медицинской биотехнологии
