Патенты автора Широков Дмитрий Алексеевич (RU)
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Описан новый высоковирулентный штамм вируса инфекционной бурсальной болезни (ИББ) серотипа 1, обладающий высокой биологической активностью в нативном виде, а также высокой антигенной и иммуногенной активностью после инактивации. Штамм депонирован в Государственной коллекции вирусов в НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского ФГБУ «НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России под № 2888. Штамм «DD1» вируса ИББ может быть использован для производства высокоиммуногенных инактивированных сорбированных и эмульгированных вакцин. 3 табл., 4 пр.
Предложен способ получения рекомбинантного белка VP3 вируса инфекционной бурсальной болезни, включающий создание генно-инженерной конструкции. При этом используют клетки эмбриональной почки человека (линия Expi293F), трансфекцию которых проводят плазмидой pEG-VP3-His, содержащей вставку по сайтам рестрикции HindIII и BamHI нуклеотидной последовательности, кодирующей зрелый белок VP3 штамма DDI IBDV с 6-гистидиновым участком на С-конце и стоп-кодоном (нуклеотидная последовательность гена VP3-His - SEQ ID №1), под контролем немедленно-раннего промотера цитомегаловируса, а также содержащей ген, обеспечивающий устойчивость к неомицину и канамицину, под контролем промотера ранних генов вируса SV40. Отбирают клоны, растущие на селективном маркере G-418. Анализируют клоны на продукцию рекомбинантного VP3 с помощью вестерн-блоттинга с окраской моноклональными антителами на гистидиновый тэг. Переводят клетки целевого клона в суспензионную культуру, культивируют, затем получают цитоплазматическую фракцию клеток линии Expi293F/VP3-His. Рекомбинантный белок VP3 выделяют из указанной цитоплазматической фракции клеток с помощью аффинной хроматографии на колонке с сорбентом Ni-NTA-сефарозой, после чего проводят анализ антигенной активности выделенного рекомбинантного белка VP3. Изобретение обеспечивает получение стабильных линий клеток человека, продуцирующих правильно фолдированный и высокоиммуногенный белок VP3. 6 ил., 6 пр.
Изобретение относится к биотехнологии и генной инженерии и представляет собой рекомбинантный слитый белок формулы S-L-R, в том числе SR10, SR13, SR15, SdR10, SdR13 или SdR15, специфически узнающий меланомные клетки, в котором S - мономер стрептавидина, L - линкер, имеющий аминокислотную последовательность Ser-Arg-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys, содержащую сайт расщепления энтеропептидазой и обозначаемую как «d», или аминокислотную последовательность Ser-Arg-Ala-Gly-Ala,R - меланома-адресующий олигопептид, представляющий собой R10, имеющий аминокислотную последовательность Asp-Gly-Ala-Arg-Tyr-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Asp-Gly, или R13, имеющий аминокислотную последовательность Leu-Ser-Gly-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Glu-Glu, или R15, имеющий аминокислотную последовательность Asp-Gly-Phe-Pro-Gly-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Ser-Gln-Glu. Настоящее изобретение также раскрывает рекомбинантные плазмидные ДНК pSR и pSdR для экспрессии указанных слитых белков, бактериальные штаммы Escherichia coli MG1655/pSR и MG1655/pSdR, продуценты указанных слитых белков и способ получения меланома-адресующего олигопептида R из рекомбинантных слитых белков SdR10, SdR13 или SdR15. Настоящее изобретение позволяет получить слитые белки, которые обеспечивают селективное и эффективное связывание с рецепторами на поверхности меланомных клеток, и может быть использовано в диагностике и терапии онкологических заболеваний человека. 6 н. и 3 з.п. ф-лы, 7 ил., 5 пр.
Изобретение относится к микробиологической промышленности, медицинской биотехнологии и генной инженерии
