Патенты автора Тюмина Ольга Владимировна (RU)
Изобретение относится к области медицины, а именно челюстно-лицевой хирургии, и направлено на создание многокомпонентного остеогенного трансплантата. Остеогенный трансплантат содержит дентальный имплант и многокомпонентную фракцию, состоящую из аутологичного клеточного пула стромально-васкулярной фракции, тромбоцитарной массы, фибриноген аутологичной плазмы крови пациента, гранулированного остеокондуктивного костнопластического материала животного происхождения и может быть использован при хирургическом лечении врожденных и приобретенных дефектов кости сложной геометрической формы. 9 ил., 1 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно челюстно-лицевой хирургии, и может быть использовано для изготовления многокомпонентного остеогенного трансплантата при хирургическом устранении врожденных и приобретенных дефектов кости челюстей. Готовят аутологичный клеточный пул стромально-васкулярной фракции следующим образом: методом туменисцентной липоаспирации производится забор 200 мл жировой ткани из области передней брюшной стенки, жировая ткань отмывается фосфатно-солевым раствором, подвергается ферментативной обработке раствором коллагеназы 1 типа, после чего выделяются клетки стромально-васкулярной фракции, которые помещаются в стерильные культуральные чашки Петри с ростовой средой, а затем ставятся в газовый CO2 инкубатор для культивирования при температуре +37°C и содержании CO2 - 5% на 7-14 дней до достижения монослоя, после чего клетки 2-3 кратно пассируют до достижения 50 млн клеток; у пациента производится пункция кубитальной вены, забор периферической крови в объеме 40 мл в 4-е пробирки с К2 ЭДТА, после чего готовят фибриноген аутологичной плазмы крови пациента и тромбоцитарную массу следующим образом: пробирки центрифугируются двукратно: первоначально с целью оседания эритроцитов и лейкоцитов, затем отбирается плазма крови из 4 пробирок в отдельную пробирку с получением фибриногена аутологичной плазмы крови пациента, далее вновь центрифугируют пробирку с получением 6 мл тромбоцитарной массы, к 2 мл фибриногена аутологичной плазмы крови пациента добавляется остеокондуктивный костнопластический материал животного происхождения, полученная смесь проходит стадию дегазации путем погружения в физиологический раствор при +37°С двукратно по 20 минут каждый в термостате, далее вносится аутологичный клеточный пул стромально-васкулярной фракции в объеме 15 млн клеток, затем вносится тромбоцитарная масса, добавляется 200 мкл стерильного раствора глюконата кальция, после чего проводится инкубация полученной смеси при температуре +37 градусов 15 минут, до формирования фибринового сгустка, с дальнейшей упаковкой в стерильный флакон, маркировкой и транспортировкой до операционной в термоконтейнере при комнатной температуре, в операционной за 40 минут до использования с целью хирургического устранения врожденных и приобретенных дефектов кости челюстей во флакон с указанной выше смесью вносится дентальный имплантат, при этом многокомпонентный остеогенный трансплантат включает: дентальный имплант - 10 об.%, аутологичный клеточный пул стромально-васкулярной фракции - 10 об.%, тромбоцитарная масса - 5 об.%, фибриноген аутологичной плазмы крови пациента - 20 об.%, гранулированный остеокондуктивный костнопластический материал животного происхождения - 55 об.%. Способ обеспечивает устранение рисков осложнения лечения, снижение материальных затрат и сокращение сроков реабилитации пациента за счет исключения неконтролируемого изменение формы и объема трансплантата в реципиентном ложе в послеоперационном периоде. 8 ил.
Изобретение относится к области медицины, а именно к челюстно-лицевой хирургии, и раскрывает способ костной пластики нижней челюсти. Способ заключается в выращивании костной ткани путем имплантации в толщу губчатой части подвздошной кости имплантата из пористого политетрафторэтилена, имплантат включает реконструктивную пластину для нижней челюсти, обвитую нетканым титановым материалом со сквозной пористостью, пластину имплантируют в губчатую часть подвздошной кости методом наложения имплантата на предварительно декортицированный гребень подвздошной кости с последующим выращиванием на период 4 недели, имплантат устанавливают в область костного дефекта нижней челюсти, далее подготовленный имплантат с насыщенной костной тканью интраоперационно вторично обвивают нетканым титановым материалом в соответствии с недостающим объемом мягких тканей в области нижней челюсти, формируя демпферную подушку, на которую равномерно наносят взвесь аутологичных мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток, после этого концы пластины фиксируют к нижней челюсти винтами для фиксации. Способ позволяет восполнить дефект комплекса мягких тканей в области нижней челюсти, уменьшить травматичность лечения, уменьшить процессы резорбции имплантата и нижней челюсти. 1 пр., 2 ил.
Изобретение относится к медицине, а именно к биотехнологии, и может быть использовано для получения и концентрирования микроРНК-содержащих экзосом мультипотентных мезенхимально-стромальных клеток. Способ включает выработку мезенхимально-стромальных клеток пуповины, жировой ткани и пульпы зуба, последующее культивирование и сбор культуральной жидкости, обогащенной экзосомами, концентрацию экзосом и обеднение крупномолекулярными белками с целью снижения сенсибилизации, заморозку или высушивание полученного концентрата для долгосрочного хранения. В качестве источника экзосом используют мультипотентные мезенхимально-стромальные клетки (ММСК) от 1 до 4 пассажа, полученные от тестированных доноров, при этом источниками клеток являются пульпа зуба, жировая ткань, костный мозг, пуповина, для накопления экзосом ММСК культивируют в среде альфа-МЕМ или ДМЕМ с низким содержанием глюкозы, 5 мМ Л-аланил-глютамина и активированной тромбоцитарной плазмой пуповинной крови (UCPRP), культивирование клеток в вышеописанной среде осуществляют до 80-100% монослоя культуры, причем культивирование может быть статичным или проточным: при статичном культивировании клетки помещают в культуральную посуду типа флакон, чашка Петри. При достижении 80-100% монослоя культуральную жидкость меняют каждые 24 часа, собранную культуральную среду сохраняют для выделения экзосом, при этом с одной культуры производят 5-7 съемов обогащенной среды, а при проточном культивировании клетки помещают в инкубатор проточного типа на клеточные носители, в качестве которых используют микрочастицы, половолоконные структуры, при достижении клетками монослоя культуральную среду полностью меняют на новую, после чего производят стандартное культивирование в течение 7 дней. При получении обогащенной экзосомами среды производится ее концентрирование с удалением белковой фракции свыше 100 кДа, за счет использования системы тангенциальной фильтрации для удаления крупных частиц и концентрирования: сначала культуральную среду центрифугируют 30 минут при 2000g или фильтруют фильтром на 1-10 мкм для удаления крупных остатков клеток, далее надосадочную жидкость фильтруют тангенциальным фильтром с порами 100 кДа или 500 кДа. В результате фильтрации объем жидкости уменьшают, а экзосомы концентрируются в диафильтрате, последний далее фильтруют ультрафильтрацией для удаления микровезкул и других крупных частиц с использованием фильтров с размерами 0.22 мкм и 0.1 мкм, полученный фильтрат содержит экзосомы, которые измеряют с помощью проточной цитометрии и измерения уровня РНК или другими доступными методами. Полученные экзосомы могут быть использованы в течение 2 недель в неизменном виде для производства косметических или лекарственных форм, могут быть заморожены при -20°С, -40°С, -60°С и -80°С и храниться на протяжении 6 месяцев, или подвергнуты лиофилизации для долгосрочного хранения: до 1 года при комнатной температуре и более 2 лет при отрицательных температурах или +4°С. Использование данного способа позволяет получить и концентрировать микроРНК-содержащие экзосомы мультипотентных мезенхимально-стромальных клеток для применения в средствах для стимуляции регенеративных процессов.
Изобретение относится к медицине, и может быть использовано для получения цитокинов из тромбоцитов пуповинной крови. Способ включает три этапа: на первом этапе производят забор пуповинной крови у разных доноров, вводят в каждый пакет с донорской кровью раствор Стабизол в объеме 20% от объема крови пакета, центрифугируют каждый из пакетов с кровью в режиме плавного изменения программы, в результате чего кровь разделяется на обогащенную тромбоцитами плазму и эритроциты. Указанная программа состоит из следующих режимов: разгон до 540 RCF в течение 5 мин; разгон до 900 RCF в течение 2 мин; торможение до 300 RCF и вращение в течение 2 мин; торможение до 100 RCF и вращение в течение 1,3 мин с последующим отключением центрифуги, затем из пакетов удаляют эритроциты и утилизируют их. На втором этапе проводят объединение всех донорских пакетов ОТП и концентрирование всех тромбоцитов, для чего полученную обогащенную тромбоцитами плазму переносят в соответствующее количество пробирок типа фалькон объемом 50 мл, проводят центрифугирование для концентрирования тромбоцитов в режиме 15 минут на скорости 4000g, в результате центрифугирования получают концентрат тромбоцитов и обедненную плазму. Обедненную плазму убирают для использования в качестве растворителя, оставляя 5 мл плазмы на дне пробирок, полученные тромбоцитарные концентраты разных доноров объединяют в одной пробирке объемом 50 мл и разводят обедненной плазмой до объема 50 мл или в качестве растворителя используют физиологический раствор, если в дальнейшем требуется исключить белки плазмы; полученный пул тромбоконцентрата повторно центрифугируют в режиме 60 минут на скорости 50g для удаления остатков эритроцитов и лейкоцитов. После центрифугирования надосадочную жидкость в объеме 45-48 мл переносят в новую пробирку объемом 50 мл, а 1 мл раствора отправляют в лабораторию для подсчета тромбоцитов на автоматизированном гематологическом анализаторе. На третьем этапе полученный тромбоконцентрат с известным количеством тромбоцитов на мл или мкл подвергают процедуре хранения/активации, при этом фалькон с тромбоконцентратом опускают в криохранилище сухого типа на 15 минут при температуре -196 градусов Цельсия, замороженный продукт помешают на хранение в морозильную камеру при температуре -80 градусов Цельсия, где хранят до 3-х лет. Дальнейшую активацию продукта проводят перед непосредственным использованием путем быстрого размораживания, для этого фалькон помещают в водяную баню с температурой +37 градусов Цельсия до полного оттаивания продукта, а при необходимости получить продукт с концентрацией цитокинов/тромбоцитов менее, чем в замороженном продукте, конечный продукт разводят в соответствующее количество раз, при этом используют исходную концентрацию тромбоцитов. Предлагаемый способ позволяет приготовить коктейль цитокинов для его дальнейшего применения в качестве субстрата для изготовления лекарственных препаратов. Способ экономичен и позволяет производить продукт с концентрацией цитокинов до 1 млн/мкл.
Изобретение относится к области медицины и предназначено для ПЦР-диагностики гена резус-фактора плода по крови беременной женщины. Предложен набор с лиофилизированными праймерами, содержащий готовые к амплификации реакционные пробирки с лиофилизированными праймерами и праймерами-зондами для экзонов RHD-5 и RHD-7 гена RHD. Все смеси в реакционных пробирках подготовлены для реакции в необходимых объемах, подвергнуты заморозке в жидком азоте, затем высушены по программе лиофилизации. Изобретение обеспечивает создание набора, эффективного для ПЦР-диагностики гена резус-фактора плода по крови беременной женщины с увеличенным сроком годности, с возможностью транспортировки в дальние регионы без строгого соблюдения температурного режима. 1 табл.
Изобретение относится к созданию пребиотика, предназначенного для стимуляции роста собственной молочнокислой флоры Додерлейн при дисбиозе влагалища и восстановления индивидуального биоценоза влагалища
