Патенты автора Ефимова Лина Викторовна (RU)
Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой рекомбинантную плазмидную ДНК pET31b-2хUBI18-35, кодирующую аминокислотную последовательность рекомбинантного антимикробного пептида UBI18-35, кодируемого нуклеотидной последовательностью: 5’-AAAGTGGCGAAACAGGAAAAGAAAAAGAA AAAGACCGGTCGTGCGAAACGTCGT-3’, имеющая молярную массу 1,8 МДа. Плазмидная ДНК обеспечивает синтез пептида UBI18-35 в составе белка-слияния с кетостероидизомеразой и состоит из фрагмента ДНК плазмиды pET31b+, гидролизованного по сайту AlwNI (PstNI), лигированной по указанному сайту с фрагментом, кодирующим 2 молекулы UBI18-35, ограниченные с обеих концов тринуклеотидами, кодирующими метиониновые остатки, содержащего сайт инициации репликации плазмиды pBR322, промотор и терминатор транскрипции фага Т7-РНК полимеразы, стартовый кодон, ген, кодирующий кетостероидизомеразу, последовательность, кодирующую 6 гистидиновых остатков, стоп-кодон, генетический маркер АМРr - ген β-лактамазы, определяющий устойчивость трансформированных плазмидой pET31b-2хUBI18-35 клеток Escherichia coli к ампициллину. Изобретение относится также к способу получения рекомбинантного антимикробного пептида UBI18-35, предусматривающему трансформацию клеток Escherichia coli BL21 Rosetta DE3 pLysS указанной плазмидой, выращивание клеток трансформированных клеток Escherichia coli в среде с последующим культивированием; отделением клеток центрифугированием, отмывкой телец включения, содержащих 2 молекулы рекомбинантного антимикробного пептида UBI18-35 в составе белка-слияния с кетостероидизомеразой и 6-гистидиновым тагом, растворением их в буфере с добавлением мочевины, последующим отделением пептидов от кетостероидизомеразы и 6 гистидиновых остатков, разделением их между собой с использованием бромциана и хроматографической очисткой рекомбинантного пептида. 2 н.п. ф-лы, 9 ил., 1 табл.
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к способам генерации антиген-специфических клеток с цитотоксической активностью против клеток рака молочной железы, и может быть использовано в медицине. Способ включает выделение мононуклеарных клеток (МНК) из периферической крови пациента, разделение клеток на прилипающую и неприлипающую фракции, добавление к прилипающей фракции МНК ростовых факторов, нагрузку дендритных клеток антигенами опухолевого лизата in vitro, стимуляцию созревания дендритных клеток в течение последующих суток. При этом к полученным незрелым ДК добавляют лизат аутологичных опухолевых клеток в дозе 100 мкг/мл, а еще через 48 часов в течение последующих 24 часов вносят рчФНО-альфа в дозе 25 нг/мл. Затем проводят совместное культивирование зрелых активированных лизатом дендритных клеток и неприлипающей фракции МНК в соотношении 1:10 в присутствии рекомбинантного человеческого интерлейкина-12 в дозе 10 нг/мл и рекомбинантного человеческого интерлейкина-18 в дозе 100 нг/мл. Изобретение позволяет повысить уровень цитотоксической и интерферон-продуцирующей активности антиген-активированных дендритных клеток при сокращении сроков их культивирования. 4 табл.
Изобретение относится к области биохимии
