Патенты автора Кривцов Александр Владимирович (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к урологии, репродуктологии, андрологии, лабораторной диагностике мужского фактора бесплодия, и может быть использовано для прогнозирования инфертильности эякулята у мужчин. В эякуляте мужчины методом твердофазного иммуноферментного анализа определяют концентрацию фактора некроза опухоли-альфа (ФНО-α). При значении ФНО-α выше 11,7 пг/мл прогнозируют инфертильность эякулята. При значении ФНО-α от 0 до 11,7 пг/мл эякулят рассматривают как фертильный. Способ обеспечивает снижение трудоемкости выполнения исследования, доступность в условиях клинико-диагностических лабораторий, повышение точности прогнозирования инфертильности эякулята у мужчин за счет использования количественного критерия, основанного на результатах лабораторного исследования спермы. 3 пр.

Изобретение относится к области медицины, в частности к терапии и токсикологии. Предложен способ определения предрасположенности к нарушению функции вегетативной нервной системы у женщин, ассоциированной с избыточной контаминацией гексаном. У пациентки производят отбор пробы мочи и крови. Определяют в моче содержание гексана, а в крови - содержание иммуноглобулина G (IgG) к гексану и уровень сывороточного серотонина. Также отбирают пробу буккального эпителия. Проводят генотипирование полиморфизма гена GNB3 С825Т (rs5443). При одновременном выполнении следующих диагностических критериев: наличие генотипа С/С гена GNB3 С825Т (rs5443), превышение содержания гексана в моче более, чем в 10 раз по сравнению с фоновым уровнем, равным 0,01 мкг/см3, превышение по сравнению с верхней границей физиологической нормы уровня IgG к гексану более, чем в 2 раза и уровня содержания сывороточного серотонина выше 50-220 нг/мл, диагностируют у пациентки генетическую предрасположенность к нарушению функции вегетативной нервной системы, ассоциированной с избыточной контаминацией гексаном. Изобретение обеспечивает достоверность оценки влияния гексана на возникновение нарушений функции вегетативной нервной системы у женщин. 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к биотехнологии. Производят отбор проб крови и определяют в ней содержание бензола и уровень иммуноглобулина G (IgG) к бензолу. Также у указанного пациента отбирают пробу буккального эпителия и осуществляют выделение из указанной пробы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК). Посредством ПЦР проводят генотипирование полиморфизма гена eNOS (rs1799983) и генотипирование полиморфизма гена HLA-DRA (rs3135388). При одновременном обнаружении диагностических маркеров: наличие гетерозиготного GT генотипа гена еМ%* (rsl799983), наличие гомозиготного СС генотипа гена (rs3135388), при условии наличия бензола в крови не ниже 0,00064 мг/дм3, а также при превышении не менее чем в 2,0 раза уровня IgG к бензолу по сравнению с верхней границей физиологической нормы делают вывод о высокой степени предрасположенности пациента к проявлению коморбидности нарушений функции поджелудочной железы, ассоциированной с артериальной гипертензией у пациента, в условиях избыточной контаминации крови бензолом. Технический результат заключается в обеспечении возможности прогнозирования предрасположенности к проявлению коморбидности нарушений функции поджелудочной железы у взрослых с артериальной гипертензией в условиях контаминации бензолом за счет использования генетических маркеров и расширения количества информационных показателей. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к ранней диагностике атеросклероза. Сущность: отбирают у пациента пробу буккального эпителия и осуществляют выделение из указанной пробы дезоксирибонуклеиновой кислоты ДНК. На детектирующем амплификаторе с использованием полимеразной цепной реакции проводят генотипирование полиморфизма генов FAS и ММР9, используя в качестве праймера участок ДНК путем исследования генотипов гена FAS (rs1159120) и гена ММР9 (rs17576). В пробе крови определяют содержание триглицеридов. И при одновременном выполнении следующих условий: наличии комбинации СС генотипа гена FAS (rs1159120), а также генотипа АА гена ММР9 (rs17576), при одновременном превышении уровня триглицеридов в крови выше верхней границы физиологической нормы в 1,15-2,15 раза, оценивают риск развития атеросклероза у мужчин среднего возраста как высокий. Изобретение позволяет обеспечить достоверность диагностики прогнозирования риска развития атеросклероза у мужчин среднего возраста (36-45 лет). 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области медицины, в частности к неврологии, и предназначено для прогнозирования индивидуального риска развития посттравматической эпилепсии. Образец ДНК, выделенный из венозной крови пациента, исследуют по полиморфизмам генов GRIN1 (rs1126442) и GRIN2A (rs1969060). Для каждого из указанных полиморфизмов устанавливают гетерозиготное, или нормальное гомозиготное, или вариантное гомозиготное состояние генотипов АА и GG исследуемых генов. Далее проводят сопоставление выявленных гомозиготных генотипов с таблицей индексов индивидуального риска развития посттравматической эпилепсии для конкретного генотипа. При значении индекса более 1,03 делают вывод о высоком индивидуальном риске развития посттравматической эпилепсии. При значении, равном или менее 1,03, - об отсутствии индивидуального риска развития посттравматической эпилепсии. Изобретение обеспечивает повышение точности прогнозирования индивидуального риска развития посттравматической эпилепсии. 2 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области медицины, в частности к дерматологии, и предназначено для прогнозирования риска возникновения кожной патологии в виде меланоза или дисхромии, ассоциированной с избыточной контаминацией мышьяком. Производят отбор проб крови, мочи и буккального эпителия. Определяют в пробе мочи содержание мышьяка, в сыворотке крови - уровень С-пептида, а из пробы буккального эпителия выделяют ДНК. При одновременном обнаружении наличия вариантного гомозиготного генотипа гена TERT (rs10054203), вариантного гомозиготного или гетерозиготного генотипов гена ММР9 Gln279Arg (rs17576), вариантного гомозиготного генотипа гена ZMPSTE24 (rs2076697) при условии одновременного наличия мышьяка в моче выше 300 мкг/дм3, а также при превышении уровня С-пептида в сыворотке крови выше диапазона нормы 0,5-3,2 нг/см3 прогнозируют повышенный риск возникновения кожной патологии в виде меланоза или дисхромии, ассоциированной с избыточной контаминацией мышьяком. Изобретение обеспечивает достоверную оценку влияния мышьяка на предрасположенность проявлений кожной патологии у человека. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ прогнозирования скорости прогрессирования рассеянного склероза у больных, получающих терапию препаратами интерферона-бета. Изобретение дает возможность прогнозирования скорости течения PC до назначения лечения препаратами интерферона-бета и осуществляется следующим образом: образец ДНК, выделенный из периферической венозной крови больного PC, исследуют по полиморфизмам, используя в качестве праймеров участок ДНК генов KIF1B С/Т (rs10492972), ZFHX4 C/G (rs11787532), STARD13 G/T (rs9527281), CIT C/T (rs7308076), ZFAT A/C (rs733254), для каждого из указанных полиморфизмов устанавливают гетерозиготный или гомозиготный генотип и определяют доминирующую аллель, а при наличии гетерозиготного генотипа ее определяют путем соотношения пороговых циклов амплификации по каналам FAM и VIC (HEX), определяют гаплотип как сочетание пяти доминирующих аллелей и при наличии в геноме больного PC гаплотипа TGTCA прогнозируют высокую скорость прогрессирования рассеянного склероза у больных, получающих терапию препаратами интерферона-бета. 3 пр.

Изобретение относится к области медицины, в частности к педиатрии и эндокринологии, и предназначено для определения предрасположенности к развитию ожирения у детей в условиях избыточной контаминации алюминием. Производят отбор проб крови и мочи у ребенка. В пробе мочи определяют содержание алюминия, а в сыворотке крови - уровень IgG к алюминию. Из пробы буккального эпителия выделяют ДНК. На детектирующем амплификаторе с использованием полимеразной цепной реакции в режиме реального времени проводят генотипирование полиморфизма гена MTNR1B (rs 10830963) и гена SIRT1 (rs 7069102). При одновременном обнаружения следующих диагностических критериев: наличие вариантного гомозиготного или гетерозиготного генотипов гена MTNR1B (rs 10830963) и гена SIRT1 (rs 7069102) при условии одновременного превышения концентрации алюминия в моче более чем в 2 раза по сравнению с референтным уровнем содержания алюминия в моче, а также при превышении по сравнению с верхней границей физиологической нормы уровня IgG к алюминию, делают вывод о наличии у ребенка предрасположенности к развитию ожирения в условиях избыточной контаминации алюминием. Изобретение обеспечивает достоверную оценку влияния алюминия на предрасположенность проявлений эндокринных нарушений в виде ожирения. 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования риска развития у мужчин эссенциальной гипертензии, ассоциированной с ожирением. Из пробы буккального эпителия выделяют ДНК, проводят генотипирование полиморфизма генов рецепторов, активируемых пероксисомными пролифераторами: PPARA, PPARG и PPARGC1A. При наличии вариантного гомозиготного или гетерозиготного генотипов гена PPARA (rs4253778), гена PPARG (rs1801282) и гена PPARGC1A (rs8192678) прогнозируют риск развития у мужчин эссенциальной гипертензии, ассоциированной с ожирением. Изобретение обеспечивает достоверное прогнозирование риска развития у мужчин эссенциальной гипертензии, ассоциированной с ожирением, за счет использования в качестве диагностических критериев совокупности генетических вариантов локусов rs4253778 PPARA, rs1801282 PPARG и rs8192678 PPARGC1A. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области медицины, в частности к педиатрии и аллергологии. Предложен способ диагностики ранних проявлений респираторного аллергоза у детей в условиях избыточной контаминации алюминием. В пробе крови ребенка определяют содержание алюминия и уровень иммуноглобулина G (IgG) к алюминию. Выделяют ДНК из пробы буккального эпителия. Затем на детектирующем амплификаторе с использованием ПЦР в режиме реального времени проводят генотипирование полиморфизма генов TLR4 и ММР9. При одновременном выполнении следующих условий: наличие вариантного гомозиготного или гетерозиготного генотипов гена TLR4 A8595G (rs 1927911) и гена ММР9 Gln279Arg A/G (rs 17576), при превышении концентрации алюминия в крови выше референтного уровня более чем в 2 раза, а также при превышении по сравнению с верхней границей физиологической нормы уровня IgG к алюминию диагностируют у ребенка наличие ранних проявлений респираторного аллергоза в условиях избыточной контаминации алюминием. Изобретение обеспечивает достоверную оценку влияния алюминия на наличие проявлений респираторного аллергоза. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ диагностики у детей астено-вегетативного синдрома в условиях экспозиции алюминием. В пробе мочи ребенка определяют содержание алюминия. Выделяют ДНК из пробы буккального эпителия. Затем на детектирующем амплификаторе с использованием ПЦР в режиме реального времени проводят генотипирование полиморфизма генов ионотропного рецептора глутамата GRIA1 (rs545098) и гена глиального глутаматного транспортера SLC2A1 (rs841839). При одновременном выполнении следующих условий: наличие вариантного гомозиготного или гетерозиготного генотипов гена GRIA1 (rs545098) и гена SLC2A1 (rs841839), при условии одновременного обнаружения у пациента превышения содержания алюминия в моче более чем в 1,3 раза по сравнению с референтным диагностируют у ребенка наличие астено-вегетативного синдрома в условиях экспозиции алюминием. Изобретение обеспечивает достоверное установление на ранней стадии оценки влияния алюминия на возникновение астено-вегетативного синдрома за счет использования в качестве информативного критерия совокупности генетических маркеров и содержания алюминия в моче. 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области медицины и биологии. Способ выявления у детей ранних нарушений физиологической функции сердца в условиях контаминации фенолом включает отбор пробы крови у ребенка и определение в пробе содержания фенола, отбор пробы буккального эпителия и осуществление выделения из указанной пробы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), генотипирование полиморфизма генов MTHFR и SULTIAI, исследование генотипов гена MTHFR С677Т (rs1801133) и гена SULTIAI G2663A (rs9282861), при одновременном выполнении следующих условий: наличие вариантного гомозиготного или гетерозиготного генотипов гена MTHFR С677Т (rs1801133) и гена SULTIAI G2663A (rs9282861), и при превышении концентрации фенола в крови выше фонового уровня более чем в 1,5 раза, диагностируют у ребенка наличие ранних нарушений физиологической функции сердца в виде функциональной кардиопатии, связанной с контаминацией фенолом. 1 табл.

Изобретение относится к области медицины, в частности к молекулярно-генетической диагностике, и раскрывает способ выявления нарушений физиологической иммуносупрессии у детей в первом поколении по мужской линии с отягощенной наследственностью в условиях избыточной экспозиции алюминием. Способ характеризуется тем, что используют комбинацию следующих диагностических критериев: генетический критерий гена FOXp3, уровень Т-регуляторных лимфоцитов CD127 и уровень контаминации алюминием выше референтного. При одновременном наличии вариантного гомозиготного или гетерозиготного генотипов гена FOXp3 Т(-3499)С у сына и/или у матери, снижение в крови ребенка относительного и абсолютного уровня Т-регуляторных лимфоцитов, на мембране которых отсутствует рецептор CD127 (CD127-), по отношению к нижней границе физиологической нормы и при превышении концентрации алюминия в крови выше референтного уровня, делают вывод о наличии нарушений физиологической иммуносупрессии у ребенка в первом поколении по мужской линии с отягощенной наследственностью в условиях избыточной экспозиции алюминием. Изобретение может быть использовано для идентификации неблагоприятного воздействия алюминия, поступающего из окружающей среды. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии и иммунологии, и может быть использовано для выявления нарушения у детей иммунологической реактивности в условиях избыточной экспозиции стронцием. Для этого проводят отбор пробы крови у ребенка с определением в ней содержания стронция, а также пробы буккального эпителия с выделением дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК). Затем на детектирующем амплификаторе с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени проводят генотипирование полиморфизма генов TLR4 и HLA-DR, используя в качестве праймера участок ДНК путем исследования генотипов гена TLR4 A8595G (rs1927911) и гена HLA-DR С/Т (rs3135388), устанавливая при этом для каждого из указанных генов одно из следующих его состояний: гетерозиготное, или нормальное гомозиготное, или вариантное гомозиготное. При одновременном выполнении следующих условий: наличие вариантного гомозиготного или гетерозиготного генотипов гена TLR4 A8595G (rs1927911) и/или гена HLA-DR С/Т (rs3135388) и превышении концентрации стронция в крови выше референтного уровня на 20% диагностируют у ребенка наличие нарушений иммунологической реактивности в условиях избыточной экспозиции стронцием. Способ позволяет обеспечить точность оценки влияния стронция на наличие нарушения иммунологической реактивности, с обеспечением возможности в последующем судить о развитии аутоиммунных и атопических состояний у детей уже на ранних стадиях их формирования. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для оценки влияния алюминия на иммунный статус. Для этого в пробе крови пациента определяют содержание алюминия, и в тех пробах крови пациентов, где содержание алюминия выше референтного значения, извлекают иммунокомпетентные клетки. Определяют мембранный маркер лимфоцитов CD11a/CD18 и количество внутриклеточного маркера апоптоза - белка bcl2. Затем рассчитывают интегральный коэффициент Ккр., равный отношению содержания CD11a/CD18 к содержанию белка bcl2: Ккр=(CD11a/CD18)/bcl2. При значении указанного интегрального коэффициента более 70 при одновременном содержании алюминия в крови пациента выше его референтного значения оценивают состояние иммунного статуса пациента от воздействия алюминия как соответствующее патологическому повышению иммунологической реактивности. Использование данного способа позволяет достоверно установить влияние алюминия на возникновение иммунодефицита за счет использования в качестве информативного критерия совокупности уровня контаминации алюминием и соотношения клеточного рецептора и белка, характеризующих инициируемый алюминием процесс клеточной гибели как маркер эффекта иммунотоксического действия. 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области медицины и биологии, в частности к исследованиям таких канцерогенных веществ, как нитрозамины, модифицирующие апоптоз у детей, проживающих в неблагоприятных условиях среды обитания. Сущность изобретения: производят отбор пробы крови у ребенка и определяют в пробе наличие нитрозамина - нитрозодиметиламина (НДМА), в тех пробах крови пациентов, где установлено наличие НДМА, извлекают мононуклеарные клетки и с использованием метода проточной цитометрии определяют количество белка р53. Также у указанного ребенка отбирают пробу буккального эпителия и осуществляют выделение из указанной пробы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК). Затем на детектирующем амплификаторе с использованием ПЦР проводят генотипирование полиморфизма, используя в качестве праймера участок ДНК Arg72Pro (rs1042522) гена ТР53, путем исследования его аллельного состояния, устанавливая при этом для гена ТР53 одно из следующих его состояний: гетерозиготное, или нормальное гомозиготное, или патологическое гомозиготное. И если одновременно установлено наличие патологического гомозиготного или гетерозиготного генотипов Arg72Pro гена ТР53, снижение в крови содержания р53 в 1,5 и более раз, по отношению к нижней границе физиологической нормы для детей. При наличии в крови НДМА оценивают процесс апоптоза у ребенка под влиянием нитрозаминов как замедленный. Изобретение обеспечивает точность оценки влияния нитрозаминов на апоптоз с возможностью в последующем судить о развитии иммунодефицитных и иммунопролиферативных состояний населения уже на ранних стадиях. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области медицины и биологии и может быть использовано для диагностики и прогнозирования токсического действия стронция на процесс апоптоза. Технический результат заключается в обеспечении точности оценки влияния стронция на апоптоз. Сущность: производят отбор пробы крови у ребенка и определяют в пробе содержание стронция, также из указанной пробы крови производят выделение мононуклеарных клеток, на которых определяют уровень лимфоцитов, содержащих на мембране рецептор CD95+. Также отбирают пробу буккального эпителия, выделяют ДНК и проводят генотипирование полиморфизма, используя в качестве праймера участок ДНК гена FAS 14405С/Т путем исследования его аллельного состояния и при одновременном наличии патологического гомозиготного или гетерозиготного генотипов гена FAS 14405С/Т, снижения в крови уровня лимфоцитов, содержащих на мембране рецептор CD95+, в 1,5 и более раз по отношению к нижней границе физиологической нормы указанных лимфоцитов с CD95+ для детей и при превышении концентрации стронция в крови более чем в 1,5 раза по отношению к референтному уровню оценивают процесс апоптоза у ребенка под влиянием стронция как замедленный, а при отсутствии хотя бы одного из вышеуказанных условий - нормальный. 1 табл., 4 пр.

Изобретение относится к области биохимии и медицины, в частности к способу выявления кандидатных генов для проведения популяционных исследований генетического полиморфизма у детей, проживающих в условиях стронциевой геохимической провинции. Для осуществления указанного способа производят отбор пробы крови у детей, проживающих в стронциевой геохимической провинции не менее 3 лет. Из этой пробы выделяют ДНК и создают библиотеку коротких отрезков ДНК. Проводят их гибридизацию с набором заданных праймеров, представляющих в совокупности жидкий ДНК-биочип. Затем гибридизованные участки подвергают секвенированию, устанавливая фактическую последовательность нуклеотидов, составляющих гены, и сравнивают эту последовательность с референтной последовательностью нуклеотидов в генах. Устанавливают отклонения в последовательности, принимая такие отклонения, как ассоциированные с возможными нарушениями здоровья ребенка под действием стронция. В качестве указанных генов используют: CYP1A2, TLR4, TERT, FAS, FOXP3, ТР53, MTHFR, SULT1A1, VEGF, ZMPSTE, SOD, SIRT3, NOS3, PPARD и СРОХ. В последовательности нуклеотидов каждого из указанных генов идентифицируют количество однонуклеотидных полиморфизмов, и в случае наличия таких полиморфизмов в гене в количестве 6 и более прогнозируют связь такого измененного гена с воздействующей на ребенка стронциевой экспозицией в условиях стронциевой геохимической провинции. Этот ген принимают в качестве кандидатного гена для проведения последующих популяционных исследований генетического полиморфизма у детей, проживающих в условиях стронциевой геохимической провинции. Настоящее изобретение позволяет обеспечить возможность выявления через генетический полиморфизм кандидатных генов у детей, ассоциированных с воздействием стронция, и использования в дальнейшем полученной информации для популяционных исследований с целью установлении на ранней стадии определенных заболеваний, обусловленных нарушенным геном. 3 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной биологии, экологии, токсикологии, и касается диагностики клеточного иммунодефицита у экспериментальных животных в условиях экспозиции стронцием. Для этого создают экспериментальную модель стронциевого иммунодефицита путем внутрижелудочного введения в течение 45 суток экспериментальному животному водного раствора хлорида стронция преимущественно концентрацией 10 мг/л, из расчета 1 мг/кг веса животного. Затем производят забор у этого животного пробы крови и последующее извлечение селезенки, извлекают иммунокомпетентные клетки из крови и клетки-спленоциты из гомогенизированного материала селезенки и определяют на мембранах указанных клеток уровень экспрессии CD62L+. Рассчитывают критериальный коэффициент экспрессии, равный отношению CD62L+ кровь/CD62L+ селезенка, и при его значении, равном 8 и менее, диагностируют клеточный иммунодефицит у экспериментальных животных в условиях экспозиции стронцием. Способ обеспечивает возможность изучения патогенетических механизмов токсического действия стронция на иммунную систему. 1 з.п. ф-лы, 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к определению воздействия метанола, поступающего из производственной среды, на иммунный статус работников, занятых в химическом производстве. Для этого производят отбор пробы венозной крови у работников, установление в ней фактического содержания метанола и лабораторных иммунологических показателей, внутриклеточных маркеров апоптоза: белка bax и белка bcl2. Причем после установления в пробе крови фактического содержания метанола производят его сравнение с величиной фоновой концентрации путем определения коэффициента, равного их соотношению: С1/С2, где С1 - фактическое содержание метанола в крови; С2 - фоновая концентрация метанола, затем рассчитывают критериальный коэффициент, равный соотношению указанных bax/bcl2, далее рассчитывают информационный индекс клеточной гибели по формуле: E ⌢ = b a x b c l 2 × C 1 C 2 . При значении указанного индекса клеточной гибели более 6, при одновременном содержании метанола в крови выше его фоновой концентрации, оценивают состояние иммунного статуса работника химического производства от воздействия метанола как иммунодефицитное. Использование данного индекса клеточной гибели позволяет определить величину эффекта неблагоприятного воздействия метанола на апоптоз как на индивидуальном, так и на популяционном уровнях, а также позволяет на ранних этапах процесса принимать решения о иммунокоррекции. 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования популяционных нарушений биотрансформации чужеродных веществ, обусловленных воздействием техногенных химических факторов среды обитания. Производят отбор группы одной этнической популяции, проживающей на территории воздействия вредных химических факторов, отбирают пробы буккального эпителия, осуществляют выделение ДНК, проводят генотипирование полиморфного варианта 9893A/G гена CYP1A1, 921А/С гена CPOX и G308A гена TNF-альфа, устанавливают одно из следующих состояний гена: гетерозиготное, нормальное гомозиготное или минорное гомозиготное, рассчитывают коэффициент распространенности минорных аллелей для изучаемых генов по формуле и прогнозируют популяционные нарушения. Изобретение позволяет точно и достоверно прогнозировать популяционные нарушения биотрансформации чужеродных веществ, обусловленных воздействием техногенных химических факторов среды обитания, и может быть использовано для профилактического обеспечения путей защиты и стабилизации генома этнической популяции в условиях возрастающего загрязнения окружающей среды. 2 табл., 1 пр.
Изобретение относится к технике лабораторных исследований, в частности к способам проведения иммунологического анализа

Изобретение относится к области медицины и описывает способ количественной оценки апоптоза, модифицированного органическими низкомолекулярными соединениями, включающий отбор пробы крови у пациента, выделение из пробы мононуклеарных клеток и инкубацию клеток с исследуемым соединением, где выделение из пробы мононуклеарных клеток производят путем введения в пробу этилендиаминтетраацетата, разведения ее водным раствором хлорида натрия, наслоения на 3 мл фиколла-урографина с градиентом плотности 1,077 г/мл, с последующим центрифугированием в течение 30 мин при 1500 об/мин и отбором мононуклеарных клеток, затем производят двукратный отмыв выделенных клеток раствором хлорида натрия и проводят ресуспендирование указанных клеток в рабочем растворе буфера для окрашивания 1X Annexin V Binding Buffer до концентрации 1×106 клеток/мл, при этом рабочий раствор буфера для окрашивания 1X Annexin V Binding Buffer представляет собой смесь концентрированного буфера для окрашивания 10Х Annexin V Binding Buffer с дистиллированной водой в объемном соотношении 1:9 соответственно, затем осуществляют инкубацию полученных клеток с исследуемым органическим низкомолекулярным соединением, получая опытный образец, и осуществляют инкубацию полученных клеток без добавления указанного соединения, получая контрольный образец, при этом инкубацию полученных клеток с исследуемым органическим низкомолекулярным соединением и без него проводят в течение 1 часа при температуре 37°С, после инкубации в опытный и контрольный образцы вводят реагенты аннексии V и йодид пропидия, образцы вновь инкубируют в темноте при комнатной температуре в течение 15 мин, добавляют рабочий раствор буфера для окрашивания 1X Annexin V Binding Buffer и осуществляют цитометрический анализ полученных образцов с определением содержания в них аннексина V, сравнивают численные величины содержания аннексина V в контрольном и опытном образцах и по соотношению большего числа содержания аннексина V к меньшему количественно оценивают апоптоз, модифицированный органическим низкомолекулярным соединением, причем при указанном соотношении, равном 1,5 и более, судят об апоптозе - критическом состоянии запрограммированной клеточной гибели в связи с влиянием указанного органического соединения

 


Наверх