Патенты автора Волосникова Екатерина Александровна (RU)
Изобретение относится к биотехнологии. Описана рекомбинантная плазмида pET-GST-3CL, обеспечивающая синтез и транспорт химерной протеазы 3CL SARS-CoV-2 в периплазматическое пространство клеток E. coli в растворимой форме, имеющая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 2 размером 6981 п.н., и содержащая в соответствии с физической и генетической картой, представленной на фиг. 1, следующие элементы: - AmpR promoter, имеющий координаты с 494 п.н. по 598 п.н.; - генетический маркер, определяющий устойчивость к ампициллину клеток бактерии E. coli, трансформированных рекомбинантной плазмидой AmpR, и имеющий координаты с 599 п.н. по 1459 п.н.; - участок начала репликации ori, имеющий координаты с 1630 по 2218 п.н.; - lacI - ДНК-связывающий белок, который ингибирует экспрессию генов E. coli, обеспечивает экспрессию целевого рекомбинантного белка 3CL после добавления индуктора изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозида (IPTG) и имеет координаты с 3648 по 4730 п.н.; - lacI promoter, имеющий координаты с 4731 по 4808 п.н.; - промотор фага Т7, имеющий координаты с 5117 по 5135 п.н. и обеспечивающий экспрессию последовательности гена GST-3CL в клетках E. coli; - lac operator, имеющий координаты с 5136 по 5160 п.н.; - RBS - сайт связывания рибосомы, имеющий координаты с 5191 по 5196 п.н.; - ген GST - глутатион-S-трансфераза из Schistosoma japonicum, имеющий координаты с 5205 по 5857 п.н.; - Pep - участок, кодирующий пептид GSTSAVLQ, и имеющий координаты с 5859 по 5882 п.н.; - химерный ген 3CL SARS-CoV-2 с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 1, имеющий координаты с 5883 по 6806 п.н. и кодирующий синтез белка протеазы 3CL с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 3; - Т7 terminator, имеющий координаты с 6909 по 6956 п.н. Изобретение расширяет арсенал получения белка 3CL. 3 ил., 1 табл., 5 пр.
Изобретение относится к биотехнологии. Описан конъюгат белка рецепторсвязывающего домена (RBD) поверхностного гликопротеина S вируса SARS-CoV-2, 308V-542N для получения вакцинного комплекса против коронавирусной инфекции COVID-19, наработанного в клетках CHO, имеющего длину 244 а.о., молекулярный вес 35 кДа, аминокислотную последовательность SEQ ID N 2, связанного с полимером полиглюкин-спермидин (PGS) при расчетном соотношении молекул белка RBD и молекул PGS - 1:1. Также описан вакцинный комплекс против коронавирусной инфекции COVID-19 в виде наночастиц, индуцирующих формирование Т-клеточного иммунитета и SARS-CoV-специфические антитела, обладающие вируснейтрализующей активностью, и состоящих из молекул конъюгата полиглюкин-спермидин-белок RBD по п.1 и молекул плазмидной ДНК pVAX-RBD, причем каждая наночастица имеет размер не менее 50 нанометров, содержит ядро, состоящее из молекул плазмидной ДНК pVAX-RBD и расположенного вокруг ядра слоя конъюгата полиглюкин-спермидин-белок RBD, удерживаемого за счет ионного взаимодействия между отрицательно заряженным ядром и положительно заряженным спермидином. Техническим результатом заявляемого изобретения является создание более простой иммуногенной конструкции, которая при внутримышечном введении способна индуцировать высокий уровень антител, обладающих вируснейтрализующей активностью, а также обеспечивать вирус-специфический Т-клеточный ответ. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 16 ил.,1 табл., 6 пр.
Изобретение относится к биотехнологии. Описана рекомбинантная плазмида pET-GST-3CL-GPG, обеспечивающая синтез протеазы 3CL SARS-CoV-2 в клетках Е.coli в растворимой форме, имеющая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 2. Плазмида имеет карту, представленную на фиг. 1, и содержит следующие элементы: AmpR promoter; генетический маркер, определяющий устойчивость к ампициллину клеток бактерии Е.coli, трансформированных рекомбинантной плазмидой AmpR; участок начала репликации ori; лактозный репрессор lacI; ДНК-связывающий белок, который ингибирует экспрессию генов E.coli и обеспечивает экспрессию целевого рекомбинантного белка 3CL-GPG-6His после добавления индуктора изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозида (IPTG); lacI promoter; промотор фага Т7, обеспечивающий экспрессию последовательности гена GST-3CL-GPG в клетках E.coli; lac operator; RBS; ген GST-глутатион-S-трансфераза из Scihistosoma japonicum; Pep - участок, кодирующий пептид GSTSAVLQ; химерный ген 3CL SARS-CoV-2 включающий также последовательность GPG и 6His, имеющий нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1, и кодирующий синтез протеазы 3CL-GPG-6His с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 3; Т7 terminator. Изобретение может быть использовано в биотехнологии для получения фермента 3CL, являющегося основной протеазой SARS-CoV-2. При этом обеспечивается синтез и транспорт химерного варианта белка 3CL в периплазматическое пространство E.coli в растворимой форме. 3 ил., 1 табл., 5 пр.
Изобретение относится к биотехнологии и генетической инженерии. Создана плазмидная ДНК-матрица pVAX-RBD, имеющая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1 размером 3710 п.н., молекулярную массу 2.6×103 кДа, содержащая целевой ген, кодирующий химерный белок 176-RBD, перед которым находится промотор РНК-полимеразы фага Т7, обеспечивающий синтез in vitro мРНК-RBD с помощью РНК-полимеразы Т7. Молекула мРНК-RBD, имеющая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 2, получена с использованием ДНК-матрицы pVAX-RBD, содержит открытую рамку считывания, кодирующую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, обеспечивающую синтез и секрецию белка-иммуногена RBD SARS-CoV 2 в организме млекопитающих, и содержащую гибридную сигнальную последовательность 176, консенсусную последовательность Козак, 7-метилгуанозиновый кэп на 5'-конце мРНК, полиаденозиновый (поли А) хвост на 3'-конце мРНК, длиной 150-200 нуклеотидов, и 5'- и 3'-нетранслируемые области (UTR) перед и после открытой рамки считывания. Комплекс в виде наночастиц, индуцирующих SARS-CoV-специфические антитела, обладающие вируснейтрализующей активностью, состоящих из молекул конъюгата полиглюкинхпермидин и молекул мРНК-RBD, взятых в разных зарядовых соотношениях от 1:1 до 1:30, соответствующих весовому соотношению от 1:3 до 1:90, имеющих размер в диапазоне 50-900 нанометров, причем каждая наночастица содержит ядро, состоящее из молекул мРНК-RBD и покрытое слоем конъюгата полиглюкинхпермидин, удерживаемого за счет ионного взаимодействия между отрицательно заряженным ядром и положительно заряженным спермидином. Техническим результатом является создание более эффективного средства доставки мРНК-RBD в клетки организма для синтеза в них белка RBD SARS-Cov-2 и повышение уровня секреции указанного белка из клеток для обеспечения презентации белка RBD иммунной системе организма. 3 н.п. ф-лы, 7 ил., 1 табл., 5 пр.
Таргетное колониестимулирующее средство // 2749509
Изобретение относится к биотехнологии и фармакологии и представляет собой конъюгат рекомбинантного человеческого гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (GM-CSF) с алендроновой кислотой, представителем бифосфонатов, имеющий повышенное сродство к клеткам-мишеням костного мозга. Техническим результатом заявляемого изобретения является создание гемостимулирующего таргетного средства на основе конъюгата GM-CSF и алендроновой кислоты со свойствами векторной молекулы, направленной к клеткам-мишеням костного мозга. Таргетное колониестимулирующее средство характеризуется тем, что оно представляет собой конъюгат белка гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора GM-CSF с алендроновой кислотой, связанных между собой по карбоксигруппе белка в виде моноаддукта, имеющего высокое сродство к гидроксилапатиту, полученного реакцией в присутствии водорастворимого сшивающего агента 1-этил-3-[3-диметиламинопропил] карбодиимида (EDC) и имеющего следующую структуру:
где ALN - алендроновая кислота; GM-CSF - гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор. Конъюгат гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора с алендроновой кислотой получен при их стехиометрическом соотношении на 1 моль GM-CSF - 1 моль алендроновой кислоты. 1 з.п. ф-лы, 5 ил., 1 табл.
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к генетической инженерии, и представляет собой сконструированную in vitro рекомбинантную плазмидную ДНК, содержащую две копии синтетического гена гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ) человека, штамм Escherichia coli SG20050/p280_2GM - продуцент указанного полипептида и способ получения полипептида со свойствами ГМ-КСФ. Рекомбинантная плазмидная ДНК p280_2GM кодирует полипептид со свойствами гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ) человека, характеризующаяся следующими признаками: кодирует аминокислотную последовательность зрелого ГМ-КСФ человека; имеет молекулярную массу 2.95 МДа (4422 п.о.); состоит из: PsTI/BamHI(pol)-фрагмента ДНК плазмиды p280GM (1484 п.о.), содержащего C-концевую часть гена бета-лактамазы, тандема промоторов триптофанового оперона Е. coli и синтетического гена GM-CSF человека, а также EcoRI(pol)/PstI (2938 п.о.) - фрагмента той же плазмиды, содержащего синтетический ген GM-CSF человека и N-концевую часть гена бета-лактамазы; содержит:- тандем промоторов триптофанового оперона Е. coli; две копии синтетического гена ГМ-КСФ человека; терминатор транскрипции t0 фага лямбда; в качестве генетического маркера ген бета-лактамазы, детерминирующий устойчивость трансформированных плазмидой p280_2GM клеток E. coli к ампициллиновым антибиотикам; уникальные сайты узнавания рестрикционными эндонуклеазами, расположенными на следующих расстояниях вправо от сайта EcoRI (279 п.о.) - BamHI - 912 нуклеотидов; PstI - 3396 нуклеотидов. Изобретение позволяет увеличить выход полипептида со свойствами гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора. 3 н.п. ф-лы, 8 ил., 4 табл., 15 пр.
Изобретение относится к области медицины и фармацевтики, а именно к противоопухолевому средству на основе биодеградируемых наночастиц, несущих рекомбинантный фактор некроза опухоли альфа человека, содержащему сферические наночастицы, имеющие размер порядка 50-70 нм, имеющие ядро, состоящее из полинуклеотидного комплекса, представляющего собой двуспиральную РНК из дрожжей Saccharomyces cerevisiae - индуктор интерфероногенеза, и покрытое слоем конъюгата спермидина с полиглюкином, удерживаемого за счет ионного взаимодействия между отрицательно заряженным полинуклеотидным комплексом и положительно заряженным спермидином, и рекомбинантный фактор некроза опухоли альфа человека, ковалентно связанный с активированным периодатом натрия полиглюкином, причем на одну молекулу двуспиральной РНК из дрожжей Saccharomyces cerevisiae приходится 60-80 молекул рекомбинантного человеческого ФНО-альфа с цитолитической активностью не ниже 106 МЕ/мг белка, 60-80 молекул полиглюкина и 1000-1300 молекул спермидина, отличающемуся тем, что средство содержит полисахарид маннитол, молекулы которого расположены в лиофилизате между биодеградируемыми наночастицами, несущими ФНО-альфа с цитолитической активностью не менее 106 ME, при следующем количественном содержании компонентов в 1 дозе сухого противоопухолевого средства: маннитол 30,0-50,0 мг, лиофилизат, содержащий наночастицы, несущие ФНО-альфа с цитолитической активностьюне менее 106 МЕ, 37,5-61,5 мг. Изобретение обеспечивает создание биодеградируемой противоопухолевой наноконструкции, содержащей ФНО-альфа человека, которая сохраняет свою структуру без агломерации наночастиц и сохраняет специфическую цитолитическую активность фактора некроза опухоли альфа в ее составе при введении в организм. 8 ил., 9 пр.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для получения противоопухолевого средства против метастазов костей в виде конъюгата белка-цитокина и аминобисфосфоната. Для этого проводят реакцию конъюгации аминобисфосфоната и противоопухолевого компонента с использованием сшивающего агента. Затем отделяют продукт конъюгации от несвязавшихся компонентов реакционной смеси. При этом в качестве противоопухолевого компонента используют белок ФНО-альфа человека, в качестве аминобисфосфоната алендроновую кислоту, в качестве сшивающего агента используют глутаровый альдегид, или водорастворимый N-(3-диметиламинопропил)-N'-этилкарбодиимид, или сульфосукцинимидил-4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат (Sulfo-SCMM). Перед проведением реакции конъюгации алендроновую кислоту или белок ФНО-альфа предварительно адсорбируют на нерастворимом носителе гидроксилапатите. Компонент, адсорбированный на носителе, активируют сшивающим агентом с последующей отмывкой указанного агента. После образования конъюгата на носителе вначале элюируют несвязавшийся белок ФНО-альфа, а затем полученный конъюгат алендроновой кислоты с белком ФНО-альфа. Полученный конъюгат белка ФНО-альфа с алендроновой кислотой имеет стехиометрическое соотношение 1:1. Изобретение позволяет синтезировать конъюгат белка ФНО-альфа человека с алендроновой кислотой с контролируемой стехиометрией, который сохраняет противоопухолевую активность ФНО-альфа и направлен против опухолевых метастазов костной ткани. 3 з.п. ф-лы, 11 ил.,10 пр., 1 табл.
Изобретения относятся к медицине, в частности к фармацевтической промышленности. Предложены субстанция протеолитического фермента на основе Протосубтилина ГЗХ и композиция для лечения гнойно-некротических ран. Субстанция протеолитического фермента, иммобилизованного на хитозане, активированном глутаровым альдегидом, имеет ферментативную активность 17-19 единиц активности нейтральной протеазы/г влажной массы. Композиция для лечения гнойно-некротических ран содержит в качестве основного компонента субстанцию протеолитического фермента на основе Протосубтилина ГЗХ, в качестве целевых добавок - эмульгатор Т-2, твин 20 и 0,05%-ный раствор хлоргексидина биглюконат, в качестве основы – масло вазелиновое. Изобретения обеспечивают повышение чистоты протеолитического фермента и повышение ранозаживляющих свойств композиции. 2 н.п. ф-лы, 1 ил., 4 табл., 10 пр.
Противоопухолевое средство // 2609871
Группа изобретений относится к соединениям, представляющим собой моноаддукты фактора некроза опухолей-альфа (ФНО-альфа) человека и аминобисфосфоната, имеющим повышенное сродство к костной ткани, и может быть использована в биотехнологии, фармакологии и медицине. Противоопухолевые средства включают алендроновую кислоту и фактор некроза опухолей-альфа (ФНО-альфа) человека, связанные между собой в виде моноаддукта, имеющего высокое сродство к гидроксилапатиту. Техническим результатом заявляемой группы изобретений является создание средств на основе ФНО-альфа и бисфосфоната со свойствами векторной молекулы, направленного против опухолевых метастазов костной ткани. 2 н. и 3 з.п. ф-лы, 4 ил., 4 пр.
Изобретение относится к препаративным формам для хранения посевного бактериального материала, питательным средам и способам получения биомасс рекомбинантных штаммов бактерий E.coli, содержащих плазмидные ДНК, кодирующие биосинтез белка TBI, и может быть использовано в биотехнологии и микробиологии
