Патенты автора Долгих Вячеслав Васильевич (RU)
Изобретение относится к области биохимического синтеза и представляет собой способ ферментативного получения пента-N-ацетилхитопентаозы и гекса-N-ацетилхитогексаозы из предшественника N-ацетилглюкозамина в культуре бактерий Escherichia coli DH5α с помощью экспрессируемого в клетках этих бактерий рекомбинантного фермента N-ацетилглюкозаминилтрансферазы Rhizobium sp. GRH2, который отличается тем, что при биосинтезе in vivo получают олигомеры хитина, состоящие из пяти и шести остатков N-ацетилглюкозамина, для осуществления биосинтеза in vivo олигомеров хитина проводят выделение, клонирование и экспрессию в Escherichia coli DH5α гена NodC ризобий Rhizobium sp. GRH2, кодирующего N-ацетилглюкозаминилтрансферазу, амплифицикацию гена NodC осуществляют с помощью специфичных (подходящих для последовательностей генов NodC Rhizobium sp. GRH2) праймеров и Pfu-полимеразы, в качестве матрицы для амплификации гена NodC используют ДНК, выделенную из штамма Rhizobium sp. GRH2, амплифицированный ген NodC Rhizobium sp. GRH2 (NodC) клонируют в векторе pUC19 с сохранением рамки считывания, таким образом, получают плазмиду pUC19-NodC, содержащую полноразмерный ген NodC, кодирующий N-ацетилглюкозаминилтрансферазу, и используют полученную плазмиду для экспрессии гена NodC в бактериях Escherichia coli DH5α, при культивировании бактерий Escherichia coli DH5α, несущих плазмиду pUC19-NodC со встроенным геном NodC Rhizobium sp. GRH2, в присутствии предшественника N-ацетилглюкозамина синтезируют пента-N-ацетилхитопентаозу и гекса-N-ацетилхитогексаозу. Заявленное изобретение позволяет осуществить синтез длинных олигомеров хитина с помощью фермента N-ацетилглюкозаминилтрансферазы, кодируемого геном NodC почвенной бактерии Rhizobium sp. GRH2. 5 ил., 2 пр.
Изобретение относится к области биохимического синтеза
