Патенты автора ВЕНКАТЕСАН Кришнамуртхи (IN)
Изобретение относится к биотехнологии, конкретно, и может быть использовано для получения рекомбинантного инсулина гларгина. Способ включает стадию культивирования дрожжей, трансформированных вектором, содержащим последовательность ДНК, определенную формулой Х-В-Y-А, кодирующей предшественника инсулина гларгина, в которой Х представляет собой последовательность лидерного пептида, содержащую по меньшей мере одну аминокислоту, В представляет собой В1-В30 последовательность аминокислот В-цепи молекулы инсулина гларгина, Y представляет собой линкерный пептид, содержащий по меньшей мере две аминокислоты, А представляет собой А1-А21 последовательность аминокислот А-цепи молекулы инсулина гларгина, стадию выделения экспрессирующегося предшественника инсулина гларгина, стадию кристаллизации выделенного предшественника инсулина гларгина, стадию проведения ферментативной конверсии кристаллов предшественника инсулина гларгина при рН от 8 до 10 в присутствии трипсина или трипсиноподобного фермента и водорастворимых органических растворителей в соотношении от 40% до 60% реакционной смеси с образованием инсулина гларгина, содержащего по меньшей мере одну родственную примесь. Затем проводят стадию очистки ОФ-ВЭЖХ инсулина гларгина на хроматографической матрице, с использованием полярного органического буферного растворителя в водной фазе, содержащей буфер на основе органической кислоты, в которой сначала уравновешивают матрикс 10%-ным ацетонитрилом в 250 мМ уксусной кислоты с последующей элюцией инсулина гларгина в указанном ацетонитриле. Затем повторно уравновешивают матрикс 10%-ным ацетонитрилом в буфере на основе органической кислоты в концентрации от 20 мМ до 200 мМ при рН от 3 до 8,5 с последующей элюцией инсулина гларгина в указанном ацетонитриле и далее повторно уравновешивают матрикс 6%-ным этанолом в буфере на основе органической кислоты в концентрации от 10 мМ до 50 мМ с последующей элюцией указанного инсулина гларгина в указанном этаноле. Далее осаждают очищенный инсулин гларгин посредством добавления буфера на основе лимонной кислоты и хлорида цинка при рН от 6 до 8. Изобретение позволяет получить инсулин гларгин с чистотой по меньшей мере 96% и содержанием гликозилированных примесей по большей мере 1%. 11 з.п.ф-лы, 9 ил., 8 табл., 9 пр.
Изобретение относится к способу очистки циклического или нециклического пептида, выбранного из группы пептидов, включающей эптифибатид, эксенатид, атозибан и незиритид или их комбинацию, из смеси, содержащей по меньшей мере одну примесь, включающему контактирование указанной смеси с матрицей для ОФ-ВЭЖХ и матрицей для ионообменной хроматографии и получение очищенного пептидного продукта с чистотой по меньшей мере 96% и, предпочтительно, составляет, по меньшей мере, около 99%
