Способ микроскопического определения риккетсий в препаратах

 

Класс 421, 3в4

421, Збв

М 105799

СССР

ОПИСАНИ ИЗОВРЕТЕНИЯ.

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

А. П. Зотов и П. Н. Блинов

СПОСОБ МИКРОСКОПИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

РИККЕТСИЙ В ПРЕПАРАТАХ

Заявлено 14 августа !956 r. за М 556533 в 1(о>,!итет по лелам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

В практике работы по изучению и диагностике риккетсиозов и, в частности, Ку-лихорадки наибольшее значение имеют методы серологическо"0 и биологического исследоВаний.

0-,1!а(o большую пользу в особенности в случаях необходимости быстрого установления диагноза, 10)I(oт приисс! и таlкн(с микроско?Iи, . кос;;сследоваиис.

Для этой цели обычно используют мазки и препараты-отпечатки из органов и других материалов IIa

1!ред.,!етнь!х стеклах, подвергнутые окраске одним из употреоляемых в практике способов, в основу которых кладется основное трсооваиие: четко и контрастно выявлять и дифференцировать риккетсии от других микробов. г1аиболес распространен. :û.ìè способа!1!! окраски мазков-препаратов

Ii I 1)иккстсии явля!Отся:

Способ Романовского — Гимза.

При этом фиксация мазков и окраска проводится по обычной методике, рекомендуемой для окраски мазков крови, бактерий и кровепаразитов, с той разницей, что срок окрашивания — несколько часов.

Способ Маккиавело. Окраска

0>25 />-ным щелочным раствором Ос-новного фуксина прп рН 7,2 — 7,4 с ди(рфереициацией 0,5%-ным раствором лимонной кислоты и докра(> (СКОЙ 1 iin-ИЫ>! ВОДНЫ.>I pHCTBOpOFI МСтилеиовой сш!ьки.

Способ П. Ф. Здродовского. НазВаииl>!й! !1Вто() !!Pe Z»oжил В с>10соое

Макин!авсло заменить щелочной раствор фуксшга фукси юм Пффф!!фсра, д!Прфсренциаци!о проводить

0,5%-иым раствором лимош!ой кислоты, ", для 0 (рнии!г>аш:я фона испбльзов iT!> вт! cTo 1:и-!!ОГО (>5> I>-!IBI>( растВОр 11стилсиОВОи сины(и.

Два последни:(способ;1 окраск;

ОСНова !!i>i 1 !1 ПОВЫIИ Снпой с(К>IСЛО" тоустой!>!Ивссти» риккетсий и представляют со )GH модификац!Ио метода окраски кислотоупорпых мик )0бов по Ци,.и -ЕЕсльссиу.

Все перечисленные способы явля-!

Отся практичсски цеиг! ыми и пОлi>зуются заслу)кег!пы приз(!аниеъ! В качестве мстолоь, позволяющих выявлять как свободно лежащие, так и внутриклсточиыс фор Il I риккетсий.

В то )ке время перечисленные методы окраски не лишены некоторых недостатков.

Так, в отношении способа Романовского-Гимза в качестве недостатМ 105799

7 ка может быть указана длительность процедуры окраски, а в отношении способов Маккиавсло и Здродовского — большая зависимость результатов окраски от качества фу«сина. При пользовании фуксином с недостаточно хорошей растворимостью эти методы, дя7кс в опыт11ых руках, нс всегда дают удоглстворптельныс результаты.

Уместно отметить, 1ro 11с «оторсс ослабление контрастности о«ряск;! при пользовании методами Мак«и;lвело и Здродовского может оыть, повидимому, обусловлено тем, гго в качестве фоновой краски в эких способах используется раствор мстиленовой синьки. Известно, что этя краска имеет це гное свойство— полихромазию, вследствие чего в некоторых условиях, при пользовании даже одной метилецовой си11ькой, возможно получить окр;шшвяние различных клеточных элементов в целую гамму цветов — î.r фиолетово-синего до красного.

В описываемом способе определения риккетсий в препаратах отмеченные недостатки устранены.

Способ имеет ту особенность, 1то, с целью увеличения точности и сокращения длительности определения, дифференцирование производят раствором муравьиной кислоты, а дополнительную окраску фона — раствором малахитовой зелени.

Предлагаемый способ окраски риккетсий в мазках из тканей и различных выделений животных пригоден в практических условиях и не очень зависит от непостоянства качества бактериологических красителей.

Мазок или препарат-отпечаток из органов делается на пред. летном стекле по возможности тонким и равномерным, высушивастся на воздухе и фиксируется ца пламени горелки.

Окраска производится по известной схеме: фуксин — дифференциация раствором слабой кислоты — дополнительная окраска фона контрастно работающим красителем.

Непосредственно перед окраской готовят раствор фуксина. При этом

Оти. рел11ктор 11. 1О. РЛазуренко на 1 лг карболового фуксина Биля добавляется 1,5 — 2,0 ил дистиллированной воды и одна капля 1 in-Hoго раствора двууглекислой соды.

Г1риготовлснный раствор фукси11а наливается ца мазок. Окраска . !лится 7---8 мин т.

Крас«я смывается водой и мазок быстро (в течение не более двух се«.) ополаскивается О, 25".о-ным раствором муравьиной кислоты, после чего о11о83 хорошо промывается водой.

До«ряс«а проводится в течение

10 сек. О 3/0- ым водным раствором малахитовой зелени.

Л1язо1с и рошо промывается водой, просушивается между ли тами фп.пьтровял1июй бумаги и просматр! в а ется иод и м мер сией.

Риккетсии окрашиваются в красный,.рубиново-красный цветя и на зеленоватом фоне выделяются весьма выпукло. При этом они представляются очень хорошо контурированными, что делает возможным полностью видеть делящиеся формы и полиморфизм их. При описанном способе окраски хорошо видны риккетсии, расположенные внутриклеточно.

Посторонняя микрофлора окрашивается в темно-зеленый и зеленый цвета. Цвет клеточных элементов — зеленый, зеленоватый.

Предлагаемый способ окрашиваиия риккетсий прост, доступен, процедура окраски мазка не продолжительна, непостоянство качества красителей практически на результатах окраски не сказывается.

Предмет изобретения

Способ микроскопического определения риккетсий в препаратах, подвергнутых окрашиванию раствором фуксина с последующим дифференцированием и с применением дополнительной окраски фона, о тл ич ающийся тем, что, с целью увеличения точности и сокращения длительности определения, дифференцирование производят раствором муравьиной кислоты, а дополнительную окраску фона — раствором малахитовой зелени.

Стаид ртгиа. Г!олп. к иеч. 26,ihi-!957 г. Объем О,!25 и. л. Гираж !100. Пена 25 коп.

Гср. Алатырь, типография 3а 2 Министерства культуры Чувашской АССР. Зак. 2415