Штамм allescperia теrrеsтris 62447-продуцент целлюлаз

 

Штамм Allescheria terrestfis 62,447 (Всесоюзная коллекция Микроорганизмов при ИБФМ АН СССР, коллекционный номер i ВКМр-217ЗД-) - продуцент целлкхпаэ.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

COLIHAЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

k aSTOPCNOMV TRY

ГОСУДМ СТВЕННЫЙ HOMHTET CCCP

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И Щ НРЦТИЙ (21) 3268092/28-13 (22) 30.03.81 (46) 23.03.83. Бюл. 9 11 (72) О.H. Окунев, Е.Г. Мусич и Т.И. Билай (71) Институт биохимии и физиологии микроорганизмов AH СССР и Ииститут микробиологии и вирусологии им. акад. Д.К. Заболотного АН Украинской CCP (53) 577 ° 15(088.8) (56). 1. Авторское свидетельство СССР

Р 255890, кл. С 12 и 15/00, 1969.

2. Патент CËÀ Ф 4081328, кл. С 12 N 9/42, опублик. 1978 (прототип).

„.SU„„1006485 (54 ) ШТАММ A L i. E S C H E R I А T E R R E S T R i S 6 24 47"

ПРОДУЦЕНТ ЦЕЛЛЮЛАЗ (57) (тамм Al 1escher i a terrestr i s

62447 (Всесоюзная коллекция Микроорганизмов при ИБФМ AH СССР, коллекционный номер jBKMp-2173Д.) продуцент целлюлаз.

1006485

Изобретение относится к получению ферментов, имеющих прикладное значение, и может быть использовано либо для осахаривания кормов, либо для получения глюкозы и олигосахаридон из целлюлозосодержащих субстратон.

Известен штамм грибов Aspergillus terreus 17P-продуцент целлюлаз при культивировании при 40ОС (1 ).

Наиболее близкими к предлагаемому являются штаммы Thiеlачia

terrestris u Allescherià terrestr i s (2).

Однако известные штаммы имеют недостаток, который заключается в том, что для получения препаратов целлюлаз используется гриб с интенсивным спорообраэованием, что вызывает загрязнение окружающей среды спорами целлюлазообразующего гриба.

Целью изобретения является получение нового штамма — продуцента целлюлаэ с меньшей опасностью загрязнения окружающей среды спорами гриба.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве продуцента целлюлаз используется облигатно термофильный гриб Яllescheгià teг—

restris 62447, обладающий слабым спороношением.

Штамм Allescherià terrestris 62447 депонировали во Всесоюзной коллекции микроорганизмов под номером

BKMF-2173Л)

Вид Яllescherià terrestгis описан

Арinis н 1963 году (Noda Неди)gia

5,68) .

Выделенный иэ почв юга УССР штамм гриба Allescheriа серегestris 62447 имеет следующие культуральные и мор— фологические признаки.

Культуральные признаки Allescheris terrestrIs 62447.

Гриб имеет сумчатую (Eurotiаlеs) и конициальную типа "Acremonium" (Cepha1osporium) стадии.

Данный штамм представляет кони— диальную стадию, является облигатным термофилом, не растущим при темперао туре ниже 25 С.

Исследовался рост гриба на 5 средах следующего состава:

Среда 1. Сусло-агар (нейтральный).

Рост очень хороший. Llâåò колонии белый в молодом возрасте, зрелая колония приобретает кремовато-белый цнет, обратная сторона колонии бурого цвета.

Среда 2. Среда Чапека, г/л:

KNO3 2,0; М9504 7 Н о 0,5; KCI 0,;;

КН1Р04 1, 0; Fe 504 7 Н20 О, 01; глюко-. за 20.

Рост очень скудный, погруженныи.

Среда 3. Модифицированная среда

Чапека, гд» KN03 заменен NH4NO3 и вместо глюкозы добавлена сахароза в количестне 20 г/л.

Рост погруженный, воздушный мицелий слабо развит. Колония бесцветная, растет концентрическими круга5 ми, растущие края колонии погружены н субстрат, обратная сторона колонии неокрашенная.

Среда 4. Модифицированная среда

Чапека, где глюкоза заменена вытяж10 кой отрубей в количестве 10%.

Рост скудный, в основном погруженный (субстратный), воздушный мицелий отсутствует. Обратная сторона колонии неокрашенная, более утол- .

Среда 5 . .Сыворотка молочная. Культуральные признаки такие же как и на среде 3.

Морфологические признаки Яllescheria terrestris 62447.

Среда 1. Гифы двух типов: тонкие — мелко густо гранулированные (1,5-2,0 мкм) и более толстые — редко септированные, полные или вакуолизированные (до 4-5,0 мкм). Конидиеносцы простые (удлиненно-цилиндрические, одиночные) и типа фиалид (одиночные или густо расположены муточками). Конидии овально-яйцевидные с заостренным кончиком, размером

30 3,5-5,0 — 1,5-2,5 мкм.

Среда 2. Гифы двух типов как и на среде 1, однако более толстые гифы густо гранулированы. Спороношение

Э более интенсивное, по сравнению с

35 ростом на сусло-агаре. Конидии уд40

55 б0 линенно-цилиндрические и овальнояйцевидные. Конидиеносцы удлиненноцилиндрические по типу "Acremonium".

Среда 3. Гифы довольно однородные., сильно ветвящиеся, образующие бугорчатые вздутия, условатые на отдельных клетках. Конидиеносцы типа фиалид. Несмотря на скудный рост мицелия, наблюдается интенсивное, обильное спороношение путем образования обильного количества фиалид.

Конидии удлиненно-цилиндрические до

10 — 12 мкм длиной и свально-яйцевидные, как на среде 1. Наблюдаются почкующиеся конидии.

Среда 4. Гифы однородные, узловато-бугорчатые довольно гомогенные, наблюдаются отдельные фрагменты обрывов гиф, типа почкующихся, тоже уэловато-бугорчатые (удлиняются путем выпячивания крайних клеток). Конидиеносцы слабо развиты (по типу фиалид), короткие, встречаются отдельные бластоспоровые клетки. Конидии мелкие, редкие,ональнояйценидной формы, более сужены, с вытянутым усеченным кончиком, по сравнению с ростом на среде 1, размеры 4-6-2-3 мкм.

Среда 5. Гифы довольно однородные, сильно вакуолизированные. Сно1006485

25

Составитель О. Окунев

Редактор Г. fio " ueðfuåíêo Техред С.Мигунова Корректор Е. Рошко

Заказ 2052/41 Тираж 521 Подписное

if!I f f fiff If Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

11 10 3 i, Москва„Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Фили tu !Ill! I "!1атент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 роношение слабое, конидии овальнояйцевидные, такие же как на среде 1.

Конициеносцы типа фиалид и удлиненноцилиндрические (по типу "Acremonfum").

Пример 1. Посевной материал выращивают при 42оС в колбах емкостью в 750 мл на качалке, имеющей

-180 об/мин, в течение 3 сут на среде, содержащей, r/Ë: мальтозу 25;

NH4N03 2; KWZPOq 1 5 г; MgSOyx

x7Hrg0 1,5; СаСОЗ 0,5, в которую добавляют 10% вытяжки отрубей. Посевной материал, составляющий 8-10% от общего объема среды, добавляют в среду, содержащую, г/л: пшеничную 15 солому 20> NH4NOy 2; КН РО+ 1,0;

MgSO 7 Н О 0,5; КСl 0,5; FeS04 х х7 HZ0 0,01, и засеянную среду инкубируют при 42 С в течение 3 сут в колбах емкостью 750 мл, на качалке, имеющей 180 об/мин.

Культуральная жидкость гриба, отделенная от выращенной биомассы и неиспользованного субстрата центрифугированием (16000 об/мин, 15 мин), содержала целлюлолитический фермент, Сх- и С„-активности которого составляли соответственно

11 и 2,0 ед/мл культуральной жид кости.

Пример 2. Культивирование проводят аналогично примеру 1, используя в качестве субстрата березовые опилки .в той же концентрации.

Культуральная жидкость содержала целлюлолитический фермент, Сх- и С„-ак-. тивности которых составляли соответственно 2,4 и 1,1 ед/мл культуральной жидкости. Пример 3. Культивирование проводят аналогично примеру 1, используя в качестве субстрата гузапаю (стебель хлопчатника) в той же концентрации. Культуральная жидкость СЬдержала целлюлолитический фермент, Сх-С1-активности которого составляли соответственно 3,25 0,5 ед/мл культуральной жидкости.

Таким образом, предлагаемый штамм

Allescheria terrestris 62447, образующий в 20 раз меньше спор по сравнению с другими штаммами Aflescheria

terrestris и в 100 раз меньше по сравнению со штаммами Aspergillus

terreus, значительно уменьшает опасность загрязнения окружающей среды спорами целлюлазообразующего гриба.