Способ получения гонадотропного препарата "гравотадж

 

COOS СОВЕТСКИХ

NUHIIHOI

РЕСПУБЛИК уд) А 61,К 37/38 ° .

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

: К АВТОРСКОМУ СЮЩЕТЕЛЬСТВ3

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

fO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОЧНРЫТИЙ (21) 2931465/30 15 (22) 27. ° 02. 80 (46) 23 ° 04 ° 83 е Ввле 9 15 (72) 9.Л. Горев и А. Ниятбеков (71) Таджикский научно-,исследова:тельский ветеринарный институт .:(53) 615,361(088.8) (56) 1;Авторское свидетельство СССР.

В: 619188, кл. А 61.К 37/38 1975, - :

R. Авторское свидет льййэо СССР

В 296573 кл. A 61 K 35/14, 1970.,SU„„! А (54 ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНКЙ ГОНАДОТРОПНОГО, ПРЕПАРАТА "ГРИЗОТАДЖ"

-(57) Способ получения гонадотропного препарата, вклвчавщий фракционное .осаждение гормонального вещества из сыворотки крови жеребных кобыл эти« ловим спиртом и отделение балластных белков, о т л и ч а в шийся тем, что, с целью упрощения и позы», щения эффективности способа, гормо;.нальное вещество.:.после его осажде:ния смаававт с 0,28-0,323-ным ра-. створом агара и затем денатурирувт этиловым спиртом.

1012913

Изобретение относится к ветерина рии, в частности к способам получения концентрата гонадотропных гормо.нов, обладающих фолликулостимулирующим действием.

Известен способ получения препарата гонадотропинов из сыворотки жеребных кобыл (СЖК), включающий последовательное осаждение балластных

:белков растворэм риванола и охлажденным ацетоном, выделение препарата ацетоном, выдерживание смеси в тече» ние 30-60 мин при комнатной температуре, промывку и лиофилизацию (1 ).

Недостаток этого способа - загрязнение препарата риванолом.

Известен способ получения,гонадотропного препарата, который преду" сматривает фракционное,осаждение с помощью 96 -ного спирта в кислой среде. Сначала осаждают балластные белки при концентрации растворителей 20-50% с последующей промывкой, затем из насадочной.жидкости осаждают активное вещество при концентрации спирта 70-80%. Полученный осадок лиофилизируют, а затем-подвергают очистке, экстрагируя его водой, обессоливая фильтрацией через молекулярные сита и повторно обрабатывая первую фракцию. органическими "раство" ритйлями. Фильтрацию производят пропусканием раствора через колонку наполненную сефадексом Г-25 и уравновешенную водой (2).

Этот способ является сложным и недостаточно эффективным. Сложность способа обусловлена ступенчатостью очистки и применением на одной из ступеней молекулярных сит. Это требует постоянного контроля за свойствами сефадекса при уравновешивании водой. Усложненность схемы очистки приводит к; )удорожанию препарата и ограничивает воэможность его массового производства для применения в сельскохозяйственной практике. К тому же высокая степень очистки не только нерентабельна, но и нецелесообразна, так как эффективность препарата не зависит от степени очистки.

Недостаточно высокая эффективность известного способа связана с потерей активности препарата при промывке осадка балластных белков за

° счет их растворения и при лиофилиза. ции, хранении и растворении в воде осадка активного вещества за счет

:его деструкции.

Цель изобретения - упрощение и повышение эФфективности способа.

Поставленная цель достигается. тем,,что гормональное вещество после его осаждения смешивают с 0,28-8,32% ным раствором агара и затей денатурирузтиловым спиртом.

П ри м е р 1. 1 л СЖК с актив

1О костью 280. мыш.ед./мл подкисляют др дяной уксусной или карболовой кис лЬтой до рН 4,0-4,5 и добавляют к нему при помешивании 1 л 96 -ного э И" лового спирта, охлажденного до 4оС °

15 Полученную суспеизию оставляют при этой температуре на 12-14 ч, затем осадок балластных белков отделяют центрифугированием и отбрасывают.

Незначительным содержанием активного

2О вещества в осадке можно пренебречь.. .К холодному центрифугату (фильтрату) добавляют 4 л охлажденного до 4 С

96o„ного этилового спирта и снова выдерживают при этой температуре

25 12-14 ч. При этом в осадок выпадает искомое гормональное вещество, Ко торое отделяют, а надосадок отбрасывают. Осадок немедленно растворяют при помешивании 0,30%-ным водным раствором агара, имеющим температу ру 35-36ОСУ и доводят общий Объем до 58 мл. Полученный раствор доводят до 100 мл холодным 96 -ным спиртом при быстром перемешивании и последующем встряхивании. Полученный препарат выдерживают при 4 С в течение 24 ч. несколько раз взбалтывают, после чего он может храниться беэ дополнительной консервации при 15-20оC длительное .время - около года, не теряя

4О активности.

Проверка активности препаратов, полученных известным и предлагаемым способами, проводится на белых ьишах. При этом 1 мл чистого гормо45 напьного вещества растворяют в первом случае в дистиллированной стерильной воде, во втором - в смеси

58 мл 0,3%-ного водного раствора агара и 42 мл 96о-ного спирта.

5О i

В таблице приведены результаты проверки известного и предлагаемого препаратов. Знак (+) означает поло.жительную реакцию, знак (-) - отри55 цательную, э.нак (+) - сомнительную реакцию жпаи.

1012913

100

1-:19

83,0

5 106,5 5-3+

5 90,8 5-ЗТ

120

1:23

60,6

45,4 2-2+

70)5 4-3+

1"2+

140

1:27

3-1+

160

1:31

2-1+

2-+

27,5

2-2+

2-1+ 1-g

43,6

29,9

1:35

180.

1-2+1-1+

1-

Составитель A. Филиппова

Техред И. Гайду Корректор B.Макаренко

Редактор A. Коэориз

Заказ 2835/6 Тираж 711 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

1Л3035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул.Проектная, 4

Активность известного препарата составляет 140-145 mm.ед/мл,предлагаемого - 170-175 ьыш.ед/мл.

Таким образом, препарат, полученный предложенным способом, имеет активность на 12% большую, чем известный.

5-3+

4-2+

1-3+!

Применение предлагаемого способа позволяет снизить эффективную дозу с 9 миа.ед.) как в известном способе) до 6 ьыа.ед/кг массы тела животного.

Препарат не проявляет анафилактическнх признаков.