Способ определения тимола в биологических объектах

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТИМСША в БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ, включающий экстраги| ование тимола из &иологичес кого объекта органическим растворителем , очистку полученного экстракта и хроматографию очищенного экстракта в тонком слое с последующей обработкой хроматографических пластин солью Прочный синий Б и раствором едкого натра, о тл и чаю щи и с я тем, что, с целью повышения точности способа, после очистки экстракта дополнительно проводят экстракцию тимола гексанс 4, хроматографические пластины дополнительно обрабатывают 2--4 н. раствором соляной кислоты, а § очистку проводят путем осаждения тимола уксуснокислым свинцом и/или путем вымораживания экстракта.

С(ЮЗ СОВЕТСКИХ

ИЛ

РЕСПУБЛИК

1

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ а

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3369739/30-15 (22) 23.12.81 (46) 15 ..07. 83. Бюл. 9 26 (72) В.И. Ярошенко, O,À. Малинин, В.Д. Щуляк и С.С. Ярошенко (71) Украинский ордена Трудового

Красного Знамени научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии (53) 547.56(088.8) (56) 1. Мозгов И.Е. фармакология.М., Колос, 1979 с. 159.

2. Березкин В.Г ° Хроматографический анализ окружающей среды. Химия, 1979, с. 477-479.

3. Там же, с. 590 (прототип).

ЗИ) 6 01 Н 33/02 а 01 Я 33/12.- (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТИМОЛА

В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ, включающий экстрагирование тимола из биологического объекта органическим растворителем, очистку полученного экстракта и хроматографию очищенного экстракта в тонком слое с последующей обработкой хроматографических пластин солью Прочный синий Б и раствором едкого натра, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, после очистки экстракта дополнительно проводят экстракцию тимола гексаном, хроматографические пластины дополнительно обрабатывают

2-4 н. раствором соляной кислоты, а очистку проводят путем осаждения ти- Е

O мола уксуснокислым свинцом и/или пу- тем вымораживания экстракта.

1029076

Изобретение относится к санитарии и может быть использовано при сенЫ" тарно-гигиенической оценке продуктов животноводства после применения тимола в качестве лечебного препарата 1) .

Известны способы определения фе- нолов (тимол представляет собой изопропилметилфенол) на хроматографической пластине с помощью реактива

Гиббса (2,б-дибромхинонхлоримида), диазотирующей смеси, состоящей из 10 нитроанилина в соляной кислоте и нитрита натрия, 4-аминоантипирина, родамина Б, нитробенздиазонийфторбората (соль Прочный синий Б ) (2 Ji

Наиболее близким к изобретению по технической" .сущности является способ определения фенолов в воде, заключающийся в экстракции фенолов из подкисленой воды хлороформом,отделении хлороформа едким натрием и 2 повторном извлечении препарата из вновь подкисленной водной фазы эфиром с конечным определением на хроматографической пластине с силикагелем путем обработки ее диазотирующей смесью (3 j, Недостатками этого способа являются низкая чувствительность (10 мг/л) и непригодность для определения фенолов в биологических объек(тах, содержащих коэкстрактивные ве-: ЗО щества, мешающие выявлению фенолов методом тенкослойной хроматографии.

Цель изобретения — повышение точности способа. 35

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения тимола в биологических Объектах, включающему экстрагирование тимола из биологического объекта органичес- 40 ким растворителем, очистку полученного экстракта и хроматографию очищенного экстракта в тонком слое с последующей обработкой хроматографи« ческих пластин солью Прочный синий 45

Б и раствором едкого натра, после очистки экстракта дополнительно прож водят экстракцию тимола гексаном, хроматографические пластины дополнительно обрабатывают 2-4 н.раствором соляной кислоты, а очистку проводят путем осаждения тимола уксуснокислым свинцом и/или путем вымораживания экстракта.

Пример 1. Навеаку 10 r мяса, 2,5 г ткани легких измельчают и экстрагируют мясо 30 мл, а легкие

15 мл ацетона на аппарате для встряхивания в течение 60 мин. Ацетоновый экстракт фильтруют через воронку с ватным фильтром в чистую колбу, @ промывая фильтр 5-10 мл ацетона. К экстракту добавляют дистиллированную воду в соотношении 1:1,20В-ный водный раствор уксуснокислого свинца из расчета 1 мл на 60-70 мл водноацето- 65 нового экстракта и помещают в морозилвную камеру бытового холодильника (температура «5-О С) на 60-120 мин (из мяса 60 мин,ткани легких 120 мин)

Затем экстракты центрифугируют 35 мин при частоте вращения 3000 мин,1.

Надосадочную жидкость сливают в чистую делительную воронку . Если s экстракте имеются взвешенные частицы его дополнительно фильтруют через воронку с ватным фильтром. После этого проводят реэкстракцию тимола в гексан, Для этого к отцентрифугированному водно-ацетоновому экстракту в делительную воронку добавляют дистиллированную воду в количестве, равном объему ацетона, взятого для экстракции, а также 10 мл гексана и воронку встряхивают в течение

2 мин, Реэкстракцию в гексан проводят дважды (порциями по 10 мл), Гексановые экстракты объединяют, сушат. безводным сернокислым натрием и отгоняют до объема 0,2-0,3 мл, который наносят на хроматографическую пластину силуфол или со слоем окись, алюминия-гипс.

Рядом с пробой на пластине наносят известные количества тимола в гексане (стандарты), При необходимости проводят дополнительную очистку экстракта. Для этого хроматографическую пластину помещают вначале в камеру с гексаном, После прохождения растворителя через всю пластину ее вынимают из камеры, оставляют на воздухе до испарения гексана и затем помещают в камеру со смесью подвижных растворителей гексан-ацетон в соотношении 24:б.

Пластину силуфол последовательно обрабатывают 0,1%-ным раствором соли Прочный синий Б в 70Ъ-ном этаноле, 0,1 н. расэвором едкого натра,и 3 н, раствором соляной кислоты.

После обработки пластины 0,1Ъ-ным растВором соли Прочный синий Б, а затем 0,1 н. раствором едкого натра остатки тимола проявляются в виде пятен оранжевого цвета. После нанесения 3 н. раствора соляной кис .лоты цвет пятен изменяется до синего иногда в пробе до сиреневого.

Пластину со слоем окись алюминиягипс обрабатывают 0,1Ъ-ным растворомсоли Прочный синий Б в 70%"НОМ этаноле и 3 н. раствором соляной кислоты.

После обработки пластины солью тимол проявляется в виде пятен оранжевого цвета, которые через несколько секунд превращаются в темно-серые, После нанесения 1-2 капель 3 н.раствора соляной кислоты цвет пятен тимола изменяется до синего.

1029076

Средние количества тимола, определенные в объектах после внесения, мкг

Навеска, Количество г анализов

Наименование объекта исследования

1 ) 0,5 1,0 2 0 5,0

0g44 0,80 1 76 4,4

Мясо

041 089 l 65 4 3

Ор45 0,79 1 74 4,2

2,5

Легкие

Составитель А. Макаров

Редактор A. Химчук Техред Л.Пекарь КорректорА. Ференц

Заказ 4968/42 Тираж 873 Подписное

ВНИИПИ Гвсударственного комитета СССР по делам изобретений и .открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул, Проектная, 4

Общее количество тимола в иссле-;. дуемом объекте определяют по формуле

А х

5 где Х - общее количество тимола, в мг/кгпв

A « «количество тимола, обнаруженное в пробе, мкг;

Р— масса исследуемой пробы г.

Количество тимола в пробе определяют путем сравнения интенсивности .окраски и площади пятна стандарта и пятна исследуемого образца.

° Пример 2 ° Навеску 10 r ме-; 5

;да растворяют в-10 мл дистиллирован-

Среднее значение 85 -1,07.

Чувствительность предлагаемого

;способа составляет 0,5 мкг тимола в нанесенной на пластину пробе или для мяса и меда 0,05 мг/кг, .а для ткани легких 0,20 мг/кг.

Предлагаемый способ дает вазМожность осуществлять контроль за чис тотой продуктов животного происхожде-40

1ния после применения тимола с лечебной профилактической целью. Способ ной воды и .экстрагируют ЗО мл ацето" на в течение 15 мин на аппарате для встряхивания. Водно-ацетоновый экстракт (верхний слой) отделяют с помощью,делительной воронки, добавляют дистиллированную воду в соотношении

1:1 и помещают в морозильную камеру бытового холодильника на 45-60 мин.

Затем экстракт фильтруют через ватный фильтр в делительную воронку,, добавляют 30 мл дистиллированнбй во. ды и тимол реэкстрагируют гексаном дважды порциями по 10 мл и далее поступают, как в примере 1.

В таблице представлены результаты определения количества тимола при добавлении к исследуемим объектам.

I требует для проведения анализа небольшое количество реактивов (2040 мл ацетона, 20"30 мл гексана, 1 мл 20%-ного уксуснокислого свинца на анализ одной пробы).

Максимум времени на проведение анализа 3,5-4 ч.

Анализу могут быть подвергнуты мясо, ткани легких и мед, что отличает предлагаемый способ от известных и делает его перспективным для широкого использования.