Штамм рс/ленинград/285/76 респираторно-синцитиального вируса,используемый для приготовления респираторно- синцитиального диагностикума

 

РС/Ленинград/285/76 респй-: раторно-синцитиального вируса ГКВ № 1771 (Институт вирусологии ИМ. Д.И. Ивановского АМН СССР), используемый для приготовления респираторнр-синцитиального диагностикума . :

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

15 00 А 61 К 39 12

Э(59

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ASTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

re ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPbrrHA (21) 2993107/28-13 (22) 21.08.80 (46) 23.07.83. Бюл. 9 27 (72) T.È. Юрлова, Э.П. Корнеева, Д.А. Гвоздилова, Н.Я. Зощенкова и Е.П. Зверева (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт.гриппа (53) 576.858(088.8) (56).,1. Денер Л. и др. Разработка метода получения высокоактивного

PC-вирусного диагностикума для. непрямой Pl .- Вопросы вирусологии,.

1976, 9 6, с. 739.,.Su„„i 030408 A (54). IOTAMM PC/ËEÍÈHÃÐÀÄ/285/76 РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНОГО ВИРУСАМИ

ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНОГО ДИАГНОСТИКУМА, (57) Штама РС/Ленинград/285/76 респи-, раторно-синцитиального вируоа ГКВ

В 1771 (Институт вирусологии нм. Д.И. Ивановского ANH СССР), используемый для приготовления респираторно-синцитиального днагностикума..

1030408 гомологичного титра, что свидетель. ствует о широком антигенном спектре предлагаемого штамма.

Авидность к спцифическим антителам сывороток человека.

Предлагаемый штамм характеризуется высокой чувствительностью к различному спектру антител человеческих сывороток. Средние геометрические титры антител, а также процент серопозитивных сывороток при использовании штамма PC/Ëåÿèíãðàä/285/76 значительно выше, чем с остальными изученными штаммами, включая эталон.

Пример. Маточный материал

PC вируса, прошедший контроль на стерильность, специфичность, биологическую активность, резистентность к неспецифическим ингибиторам сывороток различного вида животных, разводят в 1000 раэ на поддерживающей среде Игла (рН 7,2), содержащей антибиотики (пенициллин 200 ед/мл, стрептомицин 100 мкг/мл). Объем разведенного вируса - 100 мл.

Вируснейтрализующий и комплементсвязывающий антигены готовят в диплоидной культуре клеток легочной ткани плода человека. Для этого матрасы с клеточной культурой (пробы 5-8) заражают полученным разведением вируса. Доза заражения составляет

10 8% ИД О/мл. После 1,5-2-часового б контакта вируса с клетками культуру несколько раэ промывают фосфатносолевым буферным раствором (рн 7,2), Зараженные клетки инкубируют в термостате при 36 С в течение 3-4 сут. до наступления характерных деструктивных изменений клеток. Вируссодержащий материал подвергают .3кратному пипетированию. Собранную жидкость центрифугируют 20 мин,при

2000 об/мин для удаления клеточного детрита. Поддерживающая среда при выращивании вируса состоит из среды

Игла, бычьего альбумина (1%) и антибиотиков.

Полученный материал (пробы 5-8) проверяют на присутствие инфекцион.ного вируса путем определения его концентрации в диплоидной культуре клеток легочной ткани плода человека о при 36 С. В:пробах иэ материалов

5-8 инфекционный титр вируса равняет- ся 8,0; 8,5; 8,0; 8,5Ь ИД О/мл

Все пробы 5-8 специфичны, так как нейтрализуются гомологичной сывороткой до титра 1:128. Вируссодержащий материал контролируют на чувствитель. .ность к неспецифическим ингибиторам сывороток различного вида животных с помощью реакции. нейтрализации в диплоидной культуре клеток легочной ткани плода человека. Ингибирующую активность сывороток выражают в индексах ингибиции (в антилогарифмах

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано для приготовления .респираторно-синцитиального диагностикума.

Известен этаЛонный штамм Long используемый для приготовления PC вирусного диагностикума (1 1.

Однако штамм Бопеш обладает доволь но низкой инфекциозностью и недостаточной диагностической ценностью, поскольку, .отличаясь по антигенному профилю от диких штаммов, не в полной мере выявляет антитела к современным циркулирующим вирусам.

Целью изобретения является штамм

РС/Ленинград/285/76 респираторно- i5 синцитиального вируса, обладающий повышенной диагностической ценностью и более высокой инфекциозностью. . Поставленная цель достигается путем, использования для приготов- 20 ления РС-диагностикума штамма РС/Ленинград/285/76. Штамм .РС/Ленин -. град/285/76 изолирован в декабре

1976 г. от ребенка с острым респираторным заболеванием.

Штамм характеризуется следующими признаками.

Морфология. Чрезвычайно полиморф- ные частицы, типичные для респираторно-синцитиального вируса.

Репродукционная активность. Иэ числа изученных вирусов (118 штаммов) предлагаемый штамм относится к категории высокоурожайных вирусов, которые составляют только 16,1В общего количества изолированных нами штаммов.

Инфекционные титры вирусов при культивировании их в клетках различного происхождения — ЛЭЧ, ПЭЧ, ОК

)(динлоидная культура клеток легоч- 40 йой ткани плода человека1 первичная культура клеток почечной ткани плода человека и клетки органного эпителия человека) - достигают 6,03,5 lg ИД 0/мл.

Резистентность к ингибиторам. . Предлагаемый штамм относится к категории малочувствительиых штаммов, поскольку он в числе других ва- . риантов этой группы, составившей только 12,6%, Очень плохо взаимодей-: ,50 ствует с сыворотками различного вида животных (морской свинки, .лошади, телят и хомяков). Индексы ингибиции соответствуют низким значениям.

По антигенной характеристике предлагаемый штамм отличается достаточной антигенной новизной, перспективностью и Фиротой антигенного спектра. Степень родства у штамма

РС/Ленинград/285/76 с эталоннъм ва- .60 риантом и с другими циркулировавшими штампами наибольшая и составляет

71,0%. Вольшинсто изолятов современ ных штаммов реагируйт с сывороткой

PC/Ëeíèíãðàä/285/76 до 1:2 или до ; 65 !

1030408 разности титров вируса в контроле окончании лиофилизации, продолжии в присутствии сывороток). Все про тельность которой 36 ч, флаконы пере-. бы 5-8 оказались достаточно резко-, крывают резиновымИ пробками. тентными к действию ингнбиторов раз- Полученные диагностикумы (серин личных сывороток. 9 1,2,,3,4) повторно контролируют на

Антигены 5 и б (осветленная вир 5 стерильность, специфичность, биоло .руссодержащая культуральная жид- гическую активность. Инфекционный кость), проверенные на стерильность, титр в готовых диагностикумах серий . специфичность, биологическую актив- 9 1 и 2 составляет 8,0-8 5 Peg ИД /мл, ность и ингибиторорезистентность, комплементсвяэывающая активность используют в качестве комплементсвя- 10 l:þ40. зывающего ачтигена. Подготовленные Диагностикумы по всем укаэанные и проконтролированные- на стериль-, контрольньвю исследованиям отвечают ность, специфичность, биологичесхую, редъявляемьм к ним требованиям. активность и ингибиторорезистентноств Использование штамма в качестве антигены подвергают лиофилизации. 35 аитигенов для серологических реакций

Для этого в каждую бутыль, содержа- значительно повысит эффективность щую 100 мл вирусного антигена, до- диагностики PC-инфекций, и, кромебавляют равный объем 13В пептона. того, штамм может быть. использован

Бутыли 5«8 обозначают как серии в различных видах серологических ис диагностикума 9 1,2,3,4. Затем каж 2О.,следований, например, для выявления дую серию разливают (по 10 мд) во . вируснейтрализующих и комплемент@законы емкостью 50 мл. Сразу по . связывающих антител.

Составитель A. Маныкин,Редактор О. Половка Техред 0.Неце, .Еорректор А. Знмокосов

Заказ 5134/29 Тираж 523, . Подписное

ВНИИПИ Государственйого:комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35 Раушская иаб., д. 4/5.

Ью

Филиал ППП Патент, r Ужгород, ул. Проектная, 4