Способ получения производных трипептидов

 

СПОСОБ ПО.ЛУЧЕНИЯ ПРОИЗ«Э НЫХ ТРИПЕПТИДОБ общей формулы Н-Д-Х-Фен-Арг-У, где X - Про, Фен; S - ORi, VJMRa; ) - неразветвленный или разветвленный С -С- -алкил или циклогексил; . водород, циклогексил, неразветвлентгый или разветвленный Ci,-.C. -алкил, отличающийся тем-, что С-заадипённые производные аминокислоты или пептиды конденсируют в растворе в любой последовательности с активированными cлoжны ш эфирагш N-защищенных аминокислотили с N-защиценныгда аминокислотш-ш и дициклогексилкарбодиимидом в качестве конденсирунадего агента с последующим удалением защитных групп обработкой фтористоводородной кислотой и выделением конечных соединений с помощью ионообСО менной хроматографии.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК, O9) (И) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАЙ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ГЗАТЕНТУ где X — Про, Фен

ОК1, QHRz, (21) 2961995/23-04 РСТ/SE79 /000157M (22) 21.08.80 (16 ° 07 79) (31) 7807937-3 (32.) 18.07. 78 (33) Швеция (72) Карл иеран Клаесон, Лайф Роджец

Симонссон и Сало Ариелли (Швеция) (71) АБ КАВИ (Швеция) (53) 547.964.4.07(088.8) (56) 1. Э.Шредер, К.Любке "Пейтиды"

М., "Мир", 1967, ч.1, с. 116.

2. Там же, с. 112. (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧКНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ ТРИПЕПТИДОВ общей формулы

Н-Д-Х-Фен-Арг-у, {5П С 07 С 103/52; А 61 К 37/02 неразветвленный или развет1 вленный С+-С7-алкил или цик-. логек сил., водород, циклогексил, неразветвленный или разветвленный С -С - алкил, отличающийся тем, что

C-sm

1034603

Сокращения, применяемые в описании:

Аминокислоты (при отсутствии указаний на обратное, речь идет о Ь"конфигурации):

Арг " аргинин

Фен — фенилаланин

ftpe - пролин

AcOH - уксусная кислота

Бок — трет-бутилоксикарбонил

Кбо - карбобензокси

ДЦКИ- дициклогексилкарбодиииид

ДМФ вЂ” диметилформамид

Я1СΠ— диметилсульфоксид

Эт й- триэтиламин

ЭтОЛс - этилацетат

ЭтОН - этанол

HST - й-гидроксибензотриазол 60

МеОН - метанол

Оп НФ - п- нитрофе нокси и - ПРОН - изопропиловый спирт

ТФА - трифторуксусная кислота

TCx - тонкослойная хроматография 65

Изобретение относится к новому способу получения новых биологически активных соединений — производных трипептидов, которые иогут найти при менение в медицине.

В синтезе пептидов широко используют при конденсации М вЂ защищенн аминокислот и пептидных фрагментов карбодиимидный метод и метод активированных эфиров (.13 с последующим удалением блокирующих групп обработ 10 кой фтористоводородной кислотой в присутствии анизола при 0 С защищен-, ной по аминогруппе пептидной цепи(,2). . Цель изобретения — получение но-, вых производных трипептидов, обладаЮ- )5 щих интересными фармакологическими свойстваии.

Поставленная цель достигается согласно способу получения производных

Трипептидов общей формулы 20

Н-Д-Х-Фен-Арг-У где.

Х - lIpo, Фен;

О ър KHRkв неразветвленный или разветл вленный алкил или циклогексил;

Rz- водород, циклогексил, неразветвленный или разветвленный алкил, эаключакю ийся в том, что С-защищен ные производные аминокислоты или пептица конденсируют s растворе в любой последовательности с активированныии сложныии эфирами Н-защищенных аминокислот или с М-защищенными аминокислотами и дициклогексилкарбодиими- З дом в качестве конденсирундего агента с последующим удалением защитных групп обработкой фтористоводородной кислотой и выделением конечных соеди:нений с помощью ионообменной хромато-4О .;;".Рафии.

Тонкослойная хроматография

Для проведения анализов методом тонкослойной хроматографии используются готовые к употреблению стеклянные пластинки с нанесенным на них силикагелеи Ф . (фирма "Мерк "} . В качестве растворителя используются следующие смеси (соотношения даны в объемных единицах):

A — н-бутанол : AOÎH : soph (3:2ф1}

Рл — хлороформ : Me0H (9:1)

Ра - хлороформ : МеОН: АсОН (17:2:2}, Ра 6 . - хлороформ: МеОН: АсОН: Й, О (34:4:9:2}

М . — н-бутанол : АсОН Н 0 : пиРИдин (30:6!24з20}

После окончания хроматографическо- . го раэделения стеклянную пластинку исследуют в УФ-области (254 нм), после чего обрабатывают ее хлор/О-TOлуидиновым реагентом согласно известнъзл способам. Конечным результатом проведения хроматографического разделения являются значения .

Пример 1 . Н-Д-Про-Фен Арг

-О-гептил 2НС1, мол.вес 589,6.

1а. Кбо-Феи-Арг(МО } -ONe, мол.вес.

514,5

27 Г (0,10 моль} Н-Apr(8 )-ОИе HÑ1 растворяют в 4 мл ди летилформамида и нейтрализуют..при охлаждении

18 мл триэтиламина. Получающийся при втопил Зт и НС1 отделяют фильтрованием H добавляют к. РеакционнОй смеси

42 r (0,105 моль} Кбо-Фен-Опт. Ре акционную смесь оставляют на ночь при перемешивании, после чего из нее оТгоняют в вакууме растворитель с по лучением мачлообразного остатка, который растворяют в 500 мл этилацетата. Фазу в этилацетате промывают последовательно 2%-ным раствором NoHCOg . в воде, водой разбавленным раствором соляной кислоты в воде и водой.

После сушки над сульфатом натрия из смеси отгоняют этилацетат до объема около 200 мл и осаждают продукт введениеи эфира. кристаллический осадок промывают эфиром и сушат. В соответствии с данныгл TCX получается чистое вещество.

Выход: 37,6 г (73В } вещества 1а.

TCX: R.ß = О, 52 Р1 )

1Ь. Кбо-фе Арг(НО }-ОН, мол. вес 500,5.

3,1 г .(6,0 ммоль) вещества 1а растворяют в прииерно 150 мл мета- нола и добавляют к полученному раствору 7,3 ммоль (7,3 мл/л 1 М МаОН в воде). СПустя примерно 4 ч из реакционной смеси отгоняют в вакууме растворитель, растворяют остаток в небольшо л количестве воды и дважды промывают этилацетатом. Водную фазу подкисляют НС1 до рН = 2 и экстрагируют образующийся при этом Кбо-Феь

-Apr (K0z}-0Н тремя порциями этил1034603

10 ацетата. Фазу в зтилацетате прогыва— ют 10%-ным раствором хлористого натрия в воде, сушат над сульфатом натрия и отгоняют растворитель досуха.

Образующиеся при этом кристаллы сушат после выщелачивания эфиром. Полученный продукт в соответствии с данными ТСХ не содержит примесей.

Выход 2,86 (954 ) продукта lb.

ТСХ: Ry =О, 14 (F 0 )

1с. I".бо-Фен-Apr (ЙС ) -О-гептил, мол.sec 98,7.

0,60.мл перегнанного ОС1 до" бавляют к 10 мл 1:-гептанола в условиях, исключающих проникновение влаги и при охлаждении смеси на,бане со льдом..После перемешивания реакцион- ной.смеси в течение 1 ч при комнатной температуре добавляют к ней

1,00 r (2,0 ммоль) вещества 1б. Реакцию продолжают еще в течение 1 ч,, поще чего реакционная смесь загус- тевает в,виде белой массы. Эту глассу разбавляют эфиром и образующиеся при этом кристаллы отфильтровывают.

Кристаллическув массу растворяют в метаноле и осаждают водой (удаляя образующуюся НС1) . Полученные после осаждения кристаллы отфильтровывают.

В соответствии с данными ТСХ получают чистый гептиловый эфир.

Выходг 962 мг (80%) вещества 1с. ЗО

TCX:ß =U 60 (Р1)

1 д . Бок-Д-Про-,фен-Арг(МО ) -0-с —.гептил мол.Âåñ 661,8.

600 мг (1,0 ммоль) вещества 1с растворяют в 2 мл уксусной кислоты и добавляют к раствору 1,4 мл 5,6 М HBr в уксусной кислоте. Реакционную

; смесь выливают в около 100 мл сухо1о эфира и сушат в вакууме над аОН.

Полученную соль бромистоводородной 40 кислоты и Н-фен-Apr(Ю0 ) -u-гептила

: растворяют в 2 мл диметилформамида и нейтрализуют при пониженной температуре (-10 С) триэтиламином до появления основной реакции. полученный 45 при этом Эт Й Вг отфильтровывают. К реакционной смеси добавляют 215 мг (1,0 ммоль) Бок-Д-Про-OH И 135 мл (1,0 мглоль) НБТ, а затем при пониженной температуре — 250 мг.(около 5Q

1,g ммоль) дициклогексилкарбодиимида. .Реакция заканчивается в течение ночи, после чего отфильтровывают обра-. зующийся ДЦУ (после охлаждения реакционной сглеси), и из указанной реак- 55 ционной смеси отгоняют в вакууме рас творитель с образованием маслообраз ноrd остатка. Маслообразный остаток сглешивают с небольшим количествогл

2а-ного раствора ИаНСО в воде и растворяют полученную массу в неболь-6О

: шом количестве метанола, после чего хроматографируют ее на колонке, заполненной "Сефадексом дН-20" в метаноле с использованием метанола в качестве элвента. Фракцию, содержащую 65 чистое вещество 1О, растворяют в воде и метаноле и отгоняют растворители в вакууме. 1Д осаждается в виде тяжелого порошка, который собирают И сушат в вакууме.

Выход: 570 мг (86 ) вещества ld.

ТСХ: Rf =0,65 Ра, 0,52 Р1

1. Н-Д-IIpo-Фен-Apr-О-гептил. » 2НС1, мол.вес 589,6.

Осуществляют снятие защитных групп у 400 мг (0,6 ммоль) вещества 1d в результате воздействия 30 мл фторис-. товодородной кислоты при ОпС в тече-. ,ние часа в присутствии 0,4 мл анизо - ла. После отгонки растворителя в ва-; кууме продукт растворяют в 20 мл

23-ной уксусной кислоты в воде и .промг,гвавт несколько раз небольшими количествами эфира; Водную фазу хроматографирувт на колонке, заполненной "Сефадексом Г-15" в 2 - ной уксуСной кислоте с использованием той же среды в качестве элюента. При этом получавт фракцив, содержащую абсолютно чистое вещество 1.,-Выход." 318 мг (89а) продукта 1 (; Д 1 +10;4 (c 0,7, 50а-ая уксусная кислота).

TCX: R =0,27 (A), только одно пятно»

Анализ на аминокислоты: Арг 1,00

Фен 1,02> Прб 0,93.

П р и и е р 2. Н-Д-Про-Фен-Арг-гептил .2НС1, мол..вес 588,6.

2а. Кбо-Фен-Арг(Мц )-НН-гептил, мол.вес 597,7.

1,0 r (2,0 ммоль) Кбо-Фен-Арг(М0 )-ОН (1б) и 0,27 мг (2,0-ммоль) HRT . растворявт в ° 5,0 мп диметилформамида, после чего добавлявт к полученному раствору при охлаждении на бане со льдом 0 50 г (около 2,4 ммоль) дицик логексйлкарбодиимида. Спустя 1ч к реакционной смеси добавляют 0,33.мл (2,2 ммоль) гептиламина, после чего реакционную смесь оставляют при переглешивании на ночь и отфильтровывают образующийся ДСУ, а затем отгоняют растворители до образования маслообразного остатка. Указанный маслооб- разный остаток обрабатывают водой, 23-ным раствором MаНС03, водой, 2%-ным раствором КН50л., водой, и в конце чистой водой. Полученную массу кристаллизувт из смеси метанола с водой. По данным ТСХ в ней содержится незначительная примесь побочного продукта с Ry =0,54 (Pa) наряду с главным продуктогл, для которого R

=0,58 (Ра,г.

Выход: 1,13 r (94В) вещества 2а.

2Ь. Бок-Д-Про-Фен-Арг40 -МН-гептил, глол.вес 660,8.

Проводят удаление защитных групп у 1,0 r (1,67 ммоль) вещества 2а в результате обработки 4 мп уксусной кислоты и 2,8 мл НВ1 согласно примеру 1с. По данным ТСХ следует, что

1034603

6 соль брокистонодородной кислоты и

П-Фен-Грг-(Гф )-NH-гептила содержит наряду с основным продуктам, иг|еищим

Rz †-0рб1 (Ра ), также небольшое количество побочного продукта с К

=О,/2 (Ра ). Соль брокистоводородной кислоты подвергается ионообглену на колонке, заполненной " E-25" н хло- ридной форгле н смеси 90% этанола и

10% нодн, с использованием той же среди в качестве элюента. Фракция, )О содержащая н основном главный. продукт н форме хлорида «отделяется в количестве 496 мг (;1,0 миоль) „ после чего получении продукт растворяют н

2 мл диметилформамида и нейтрализуют )5

0,15 мл тризтилакина. Затем,к полученному .таким способом растнору. добавляют 215 глг (1,0 ммоль) Бок-Д-Про.

-0Hр 135 мг (1,0 ммоль) HHT и при

)xJIаждении — 250 мг (около 1р2 мглоль) 20 дициклогексилкарбодиимида. Реакции продолжают в течение 20 ч, после чего реакционную .смесь фильтруют и отгоняют растноритель в вакууме с образонаниегл маслообразнай массы, которуи обрабатывают 23.-HIIH раствором

ЯаНСО н воде и чистой водой. Полу.ченную массу растворяют-в метаноле и,хроматографируит на колонке, запоргненной "Сефадексом ЛН-20" в метаноле с использованием метанола в качестве элиента. Из фракции, содержа- . щей чи".òîå вещество 23, отгоняют рас. творитель н вакууМе и выцелачивают остаток водой. Полученную кристаллическу",о массу сушат в вакууме.

Выход: 457 мг. {693) вещества 2Ъ.

ТСХ: Р =U 35 (г 1).

2. П-Д-TIpo--Фен-Apr-МН-гептил ° 2НС1, мо.<. вес 588, б.

Для 300 кг соединения 2b проводят 40 удаление .за .:.;итных групп и очистку согласно приглеру 1.

Выход: 263 глг (98%) продукта 2.

Р3 +11,6 (C,0,6, 50о-ная уксусная кислота) . 45

ТсХ р =-0,25 {р ), .только одно пятно . рлнализ на аминокислоты: Apl 1,00, Фен О, 97; Про 0, 98.

П р и к е р 2. Н-Д-Про-Фен-Apr-HH - 2HC1, мол. вес. 490,5.

За. Бок-Д-Про-Фен-ОМе, мол.вес

37á,4.

4,2 г (19„5 ммоль) Бок-Д-Про-ОН и 2р! г (2u,0 ммоль) HHT растворяют н 50 глл дииетилсульфоксида и доб гвляют к полученному раствору .при перемешинании и охлаждении 4,4 г (около

21 кколь) дицикйогексилкарбодиимида, K реакционной смеси добавляют раствор

4,3 r (20,0 ммоль) Н-Фен-ОМе-НС1 в

50 кл диметилформамида, предваритель-60 но нейтрализованного при охлаждении добавлением 2,8 мл (20 0 ммаль ) три- этиламина с последующим фильтрованием. Реакционную смесь останляют йа ночь и отфильтровынают образующийся 65

ДЦУ. Растворитель отгоняют досуха с получением из реакционной смеси маслообразного остатка, который растворя.— ит н 300 мл.этилацетата. Раствор в этилацетате последонательно прогювают 2 -ным водным раствором Й.аНС03, водой, 2%-ным водным раствором КНЩ и наконец водой, после чего сушат над сульфатом кальция..Раствор в этилацетате подвергают. вакуумной разгонке досуха с получением кристаллической массы, которую обрабатывают петролейным эфиром; Фильтруют и промывают петролейным эфиром.. Полученную кристаллическую массу. сушат в вакууме. .Выход: 5,5 г (75%) вещества За.

ТСХ: kg =0,53 (Р1) .

ЗЬ. Бок-Д-Про- Фен()Н мал. вес

362, 4.

4,5 г (12,0 ммоль) . вещества За растворяют в 50 мл NeOH и добавляют к полученному раствору 15 мл 1 í. NaOH {15 ммоль). После переглешивания реакционной смеси при комнатной .температуре в течение 2-3 ч растноритель отгоняют досуха, а -полученный остаток растворяют в 100 мл воды и дважды промывают 50 мл эфира, после чего падкисляит водную Фазу KHS0y да рН 3 .

После перемешивания при 0 (в течение 30 мин реакционной сглеси образующийся в ней осадок отфильтровывают и промывают небольшим количествам холодной воды, после чего сушат указанный осадок в вакууме.

Выход! 3,3 г (74Ъ) соединения 36, ТСХ: Ry =О,О1 { Раб).

Зс. Бок-Д-Про-Фен-Apl { N Q), -ИН мол.вес 562 6.

0,65 г (1,8 ммоль) соединения Зб и 0,26 г (1,9 ммоль) НБТ растворяют н 10 мл диметилформамида и добавляют к полученному раствору при перемешивании и охлаждении 0,38 г (около

1,8 ммоль) дициклогексилкарбодиимида.

К реакционной смеси goeавляют раствор

U, б г (2 мглоль ) Н-Арг (М0 ) -М Н HBt н 10 ил дикетилформамида (который следует нагреть и вновь охладить перед нейтрализацией), который предварительно нейтрализуют при охлаждении и,3 мл {2,2 ммоль) триэтиламина, и которнй затеи фильтруют. Реакционную смесь оставляют на ночь и отфильтровывают затем образующийся ДЦУ. Из реакционной смеси отгоняют растворитель с образованием маслообразного остатка, которнй растворяют в кипящем " этилацетате (1 00 мл). При охлаждении образуется осадок, каторчй промывают этилацетатом и эфиром. Затем укаэанный осадок (около U,5 r ) растворяют. в большогл количестве этилацетата и промывают последовательно 23-ныгл водным раствором NaHCA y, надой, вод-, ным 2%-ным раствором КН 0р и снова водой. Раствор в этилацетате сушат

1034603

Выход: 440 мг (40%) соединения 4б.

ТСХ: Rg =0,41 Р1

4. Н-Д-Про-фен-Арг-О-и-пропил, мол..вес 533,5.

65.над сульфатом натрия и затеи отгоня-: ют растворитель в вакуугле досуха.

Выход: 480 мг (48%) вещества 3с.

TCXt Йу =0,73 (Ра ) ..

3. Н-Д-Про-.Фен-Apr-йН 2НС1, мол. вес 490,5. в 160,0 ил (0,28 ммоль) соединения

3с производят снятие защитных групп

s результате взаиглодействия с 10 мл

HF при ООС в течение 50 мин в присутствии 0,3 мл анизола. После отгонки 10 растворителя в вакууме остаток растворяют в примерно 5 мл смеси 50% этанола и 50% воды.и проводят ионный обмен на колонке, содержащей "OAR;25" в форме хлорида в смеси 50% этанола )5 и 50% воды с использованием той же смеси для элюировайия. Из фракции,содержащей соединение 3, отгоняют в вакууме растворитель, растворяют ос таток в около 5 мл метанола и хрома 20 .тографируют раствор на колонке наполненной "Сафадексом ЛН-20" в -.метаноле с использованием метанола в качест ве среды для элюирования., Фракцию,.

:содержащую соединение 3, сушат при замораживании.

Виходг 100 мг {71%) соединения 3. Э +12,1 (C 0",5,метанол j . 26

К =0,34 (И), только одно,пятио. 30

Анализ на аминокислоты: Apr 100, Фен 1,01; ПРо Ог 98;

П р и: м е р 4. Н-Д-Про-Фен-АргО-и-пропил 2НС1, мол. вес 533,5. 4а. Н- Apr.(% )-O-и-пропил 2НС1, мол.вес 297,8.

5: 5 г. (25 глмоль) Арг(цО„) растворяют .в 250 мл изопропанола и про- -, .водят этерификацию повторной обработ кой сухим газообразным НС1 согласно,, известным способам. Когда реакция заканчивается, из реакционной смеси. отгоняют досуха в вакууме все летучие компоненты. Полученный сложный эфир (4а) кристаллизуют в результате. растворения массы, полученной после 45 отгонки растворителя; в небольшом количестве горячего изопропилового спирта и осаждают при добавлении сухого эфира при охлаждении растворителя. Отделенные кристаллы трижды

npowaanr сухим эфиром..

Выход: 5,8 r (78%) соединения 4а.

Т.пл.: 1 19 - 181 С. . 4b., Бок-Д-Про-Фен-Арг(ЙО ) -О--и-пропил, глол.вес 605,7. 55

Способ, реагенты и количества их полностью аналогичны тегл, которые используются в приглере 3с, однако вместе Н-Apr(80 ) -HII НВг используют

0,60 г (2,0 иглоль).соединения 4а. 60

В 3и0 мг (0,50 мколь соединения

4 осуществляют удаление защитных( групп в результате воздействий HF в., присутствии анизола согласно способу

1. Продукт подвергается очистке и взаимодействию с ионообгленной смолой аналогично способу 1.

Виход: 180 мг (68%) соединения 4.

,Я +19,9 (С 0,5 50%-ая уксусная кислота). тсх: Rg =0,21 (A), только одно пятно.

Анализ на аминокислоты. Apr 1 00

Фен 1,00; Про 0,98.

П р. и и е р 5. Н-Д-Фен-Фен-Арг-ЙН 2НС1г мол.вес 540,5.

5а. Кбо-Д-Фен-фен-ОМе, мол. вес 460,5.

Способ, реагенты и их количестваполностью аналогичны тем, которые используются в примете,За;.однако вместо Бок-Д-Про-ОН используют 6,0 г (20 ммоль) Кба-Д-Фен-Он.

Выход: 6,2 (67%) соединения .5а.

ТСХ: R g =О, 60:(Р1) . ,5t). Кбо-Д-Фен-фен-ОН,мол. вес 446,5.

6,0 г (13,0 ммоль) соединения 5а гидролизуют: ЙаОН coraaggo способу Зб.

Выход: 4,9..г (84%) соединения 5Ь.

ТСХ: kg =0,85 (Ра ).

5с. Кбо-Д-Фен-Фен-Лрг (М0 )-ЙН, мол.вес 646, 7.

Способ, реагенты и их количестваполностью аналогичны тем, которые используются в примере 3с, за исключением того, что вместо соединения

39 используют соединение 5Ъ в количестве 0,98 г (2,0 мглоль) .

Выход: 505 мг (39%) соединения 5c .

ТСХ: Q.y =0,80 (Раб).

5. Н-.Д-Фен-фен-Лрг-йЦ. 2НС1, мол.вес 540,5.

Дла 400 мг (0 62 ммоль) соединения 5с проводят снятие защитных групп очистку и обработку .ионообмеиной смолой согласно приглеру 1..

Выход: 296 г (88%) соединения 1.

Г и - 4, 4 (С 0, 5, глетаиол ) .

ТСХ: g, =0,37 (Г4), только одно пя.тно

Анализ на аминокислотыг Apr 1,00, Фен 1,97.

Пример б. Н-Д-Фен-Фен-Арг-MH-гептил-2ЙС1, мол.вес 638,7. ба. Кбо-Д-Фен-Фен-Apr(Ч02) -NH-гептил, мол.вес 744,9.

Способ, реагенты и их колйчества полностью аналогичны тем, которые. использованы в примере 2Ь,, за исключением того, что вместо Бок-Д-Про-.ОН используют Кбо-Д-Фен-ОН.

Выход: 470 мг (63%) соединения ба.

TCX: К =0,42 (Р1) . б. Н-Д-Фен- ен-Apr-ИН гептил 2НС1, мол,вес 638, /.

Для 300 r (0,40 ммоль) соединения ба проводят снятие защитных групп, 1034603 очистКу и обработку ионообменной смолой согласно примеру 1 ..

Выход: 1 /6 мг (59а) соединения 6, Я -1/ „9 (С 0,5, 50Ú-ая уксусная кислота) .

ТСХ: k =0,28 (А ), только одно пятно.

Анализ на аминокислоты: Арг 1,00,"

Фен 1,98.

Пример 7. Н-Д-Про-Фен-Арг"ЙН-лаурил ° 2НС1, мол.вес 658,7. 10

7. Кбо-Фен-Арг (ЯО ) -Ы Н-лаурил, мол.вес 667,8.

Способ, реагенты и их количество полностью аналогичны тем, которые использованы в примере 2а, за исклю- 15 чением того, что вместо гептиламина в качестве аиина используют 0,41 г (2,2 имоль) лауриламина.

Выход: 1,17 r (88%) соединения 7а.

ТСХ: Р, =0,60 (Pa) / гомогенная хро- 20 матограмма. (7b . Бок-Д-Про-Фен-Арг(Й О ) -й П-лаурил,"мол.вес. 730,9.

Способ, реагенты и их количество аналогичны тем, которые использованы

; в примере 2b, за- исключением того, что вместо 1,67 ммоль вещества 2Ь и вместо 1,67 ммоля вещества 2а, использованного в примере 2б, употреблено 0,67 r (1,0 ммоль) вещества 7а в качестве исходного пептида. f:ðoìå того, соль HBr и Н-Фен-Арг(НОр) -ИН-лаурила может быть использована без дополнительной очистки с использова" нием ионообменной смолн.

Выход". 585 мг (80В) вещества 7b.

ТСХ: Р у =0,39 (P1).

7. Н-Д-Прс-Фен-Арг Н-лаурил.2НС1, мол.вес 658,7.

Для 30и мг (0,41 ммоль) вещества 7Ь проводят удаление защитных 40 групп, очистку и обработку ионообменной смолой согласно способу, описанному в примере.1.

Выход: 230 мг (854) соединения 7

"(;Д +10,4 (C u,5„ 50ú-ная уксусная кислота) .

ТСХ: Р, =0,27 (А ), только одно пятно.

Анализ на аминокислоты: Арг 1,00, Фен 0,98, Про 0,99.

5О

Пример 8. Н-Д-Фен-Фен-AprН-и-пропил, мол.вес 541,6.

Способ, реагенты и их количества аналогичны примеру 2а, эа исключением того, что в качестве амина вместо петиламина используют 130 мг (2,2 ммоль) иэопропиламина.

Выход: 0,95 r (88%) соединения Яа.

ТСХ: 9, =0,51 (Ра), только одно пятно.

Bб. Кбо-Д-Фен-Фен-Арг(ЫО ) -ЫН-и- 6О

-пропил, мол,вес 688,8.

Способ, реагенты и их количества, аналогичны примеру ба, эа исклйчением тото, что в качестве защищенного дипептида используют вместо соедине. 65 ния 2а 0,54 r (1,0 ммоль) соедине" нил 8а.

Выход: 4/О мг (68% ) соединения 8Ь.

ТСХ: К - 0,38 (Р1) .

8. Н-Д-Фен-оен-Арг- Н-и-пропил

2НС1, мол.вес 582,6.

Для 300 мг (0,44 ммоль) соединения !

8b проводят удаление защитных групп, очистку и обработку ионообменной смолой согласно примеру 1.

Выход: 205 r (8ОЪ) соединения 8. (/»Цв -,1 /,7 (С 0,5, метанол/ .. тсх Rë =О 23 (A ), только одно; л пятно.

Анализ на аминокислоты: Арг 1,00, Фен 1,97.

Пример 9. Н-Д-Фен-Фен-Арг-МН-циклогексил "2НС1,, мол..вес 622, /

Способ, реагенты и их количества аналогичны примеру 2а, эа исключением того, что в качестве амина вместо гептилаиина используют 218 мг (2,2 ммоль) цикло1ексиламина.

Выход: 0,90 r (7/И соединения 9а

ТСХ: Q = О,бо (Ра), только одно пятно.

j9b. Кбо-Д-Фен-Фен-Арг (ЙОд)- Н-цик; логексил, мол. вес 728,8 °

Способ, реагенты и их колйчества . аналогичны примеру ба, за исключением того, что в качестве защищенного дипептида используют вместо соеди нения 2а .0,58 r (1,0 ммоль) соединения 9а.

Выход: 520 мг (71 %) соединения 9Ь >

ТСХ: Ry =0,49 (P1) .

9 . Н-Д-Фен-Фен-Apr-Я Н-циклогек сил

« 2НС1,.мол.вес 622,7.

Для 300 мг (0,41 ммоль) соединения 9б проводят удаление защитных групп, очистку и обработку ионообмеиной смолой согласно прииеру .1..

Выход: 1 85 мг (/2%) соединения 9, )Lcl3Д-17,2 (С 0,5, метанол)

ТСХ: R y =0,28 (А ).

Анализ на аминокислоты: Арг 1,00;

Фен 1,96.

Проведены биологические испытания предлагаемых соединений.

Активность соединений по отношению к ингибированию брадикинина изучалась на изолированной матке крыс. За

12-15 ч до проведения эксперимента крысам вводилось подкожно 0,2 мг/кг диэтилстилбэстрола. Мускулы матки, разрезанные в продольном направлении на две части, помещают в баню для гладких мускулов, заполненную буФерным раствором по Де-Жалону, в которую пропускают карбогенизированный газ (5Ъ двуокиси углерода, 953 кислорода) для окисления. Температура поддерживается на уровне 35 С. Затем на мускул накладывается нагрузка для его растяжения, соответствукщая 0,5ã.

Величина напряжения измеряется при1034603 10 В . 10.10

10 . 100 10 . 100

35

15 15

15 20

10-8

100

10

100 45

Н-Д-Про-Фен-Apr-Nki

10

10"

20

100

50

10.

100

Н-Д-Про-,Фен-Арг-0-и-пропил 4 10

1 -6

20

Н-Д-Фен-Фен-Apr- КН

10

10

10 бором для измерения силы фирмы

"Грасс" (ФТ-03C), сопряженным с регистрирующим самописцем той же Фирьы.

Регистрируются сокращения мускулов под воздействием брадикинина при концентрации его от 10-+ до 10 M (моль/л), после чего определяют концентрацию традикинина, вызывающую

70% максимальных сокращений мускулов .(ЕД-/О) . Вслед за этим исследуется ингибируюшая активность по отношению !О к брадикиннну соответствующих трипептидных производных, при их концентрации в бане, равной 10 8, 10 1, 10 и 10 И при концентрации брадикинина, соответствующей ЕД-70, по

Н-Д-Про-Фен -Apr-О- гептил 1

Н-Д-Про-Фен-Арг-МН-гептил 2.. отношению к соответствуке им мускулам.

Для каждой из указанных концентраций соответствуюшие трипептидные производные вводятся в ткань матки за 5 и 10 мнн до введения брадикинина.

Активность по отношению к ингибированив воздействия брадикинина выражается в виде промежутка времени, необ« ходимого для того, чтобы брадикинин вновь вызвал первоначальное сокрашение мускулов. После каждого введения брадикинина производится TIpoh%ilBlcB буферным раствором.

Результаты биологических испытаний, приведены в таблице.

1034603

Продолжение таблицы

Н-Д-Фен-Фен-Арг-ИН-гептил 6 10

-7

25

100

Н-Д-Про-Фен-Apr-NH-лаурил 7 10

10

100

ZO

Н-Д-Фен-Фен-Apr-ЙН-и-пропил

30

H-g-Фен-Фен- рг-Vt< 9

Составитель В.Волкова

Редактор A.Долинич Техред И,Гайду Корректор Г.Огар

Эаказ 5651/61 Ти.раж 4 1 8 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ЛПП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4