Способ создания непрерывного градиента концентрации раствора

 

1. СПОСОБ СОЗДАНИЙ НЕПРЕ РЫВНОГО ГРАДИЕНТА КОНЦЕНТРАЦИИ PACTВОРА; включдющий предварительное создаииё ступенматого градиента, отС% 5z IS Объем pocmSopQ 1035495 А JtSU G 01 N 27/| rr-fr. Л/08 личающийся тем, что, с целью ускореиия и упрощений процесса, ступенчатый градиент создают е капилляре и вытеснением раствора из капилляра в приемник создают в нем непрерывный градиент концентрации. 2. Способ поп. 1,отличающий с я тем, что для создания линейного градиента концентрации, в капилляре создают по крайней мере, трехступенчатый градиент из равных по длине столбцов растворов, промежуточный из которых имеет среднюю для заданного диапазона градиентов концентрацию: (Л J -4W 80мм fPut.

СВОЗ СОВЕТСНИХ

РЕСГ6%ЛИН

ЦЕ (И) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЙ-- ..

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Озеи рпстЙж

Ффа1

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

МЛЕЮ Ю.(21) 3413506/18-25 (22) 26.03.82 (46) 15.08.83, Бюл. Ю 30. (72) Г.Ю. Ажицкий, О.В. Иитичкин и Г.S. Троицкий.

{53) 543. 253(088.8) (56) 1. Иммунохймические методы.

Под ред. Х. Фримеля. Пер. с нем. И., нйир", 1979, с. 241™242.

2. Там ае, с. 240 (прототип). (54){57) 1. СПОСОБ СОЗДАНИЯ НЕПРЕРЫВНОГО"ГРАДИЕНТА КОНЦЕНТРАЦИИ PACT

ВОРА; включающий предварительное создание ступенчатого градиента, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью ускорения и упрощения процесса, ступенчатый градиент создают в капилляре и вытеснением раствора из капилляра в приемник создают в нем непрерывный градиент концентрации.

2. Способ re и. 1, о т л и ч à ешийся тем, что для создания ли« нейного градиента концентрации, в капилляре создают по крайнем мере, трехступенчатый градиент из равных по длине столбцов растворов, промежуточный из которых имеет среднюю для

:заданного диапазона градиентов концентрацию;

1035495 р р д

При этом для создания линейного градиента концентрации, в капилляре создают по крайней мере „ трехступенчатый градиент из равных по длине столбцов растворов, промежуточный иэ 55 которых имеет среднюю. для задан- . ного диапазона градиентов концентрацию.

Изобретение относится к физико" химическому анализу, точнее к способам создания градиента концентрации раствора, и может быть использовано в различных областях химии, биологии, медицины, например, для получения сверхчистых биопрепаратов методом электрофореза..

Известен способ создания непрерывного градиента концентрации раство- 1О ра путем смешения потоков растворов высокой и низкой концентрации (1).

Недостатком способа является нали. чие газожидкостной границы в сосудах с исходными растворами, что исключа- 1 ет получение градиента в условиях микрогравитации. Использование же прямого давления, например поршнем на жидкость, с целью регулирования скорости потоков усложняет и утяже" 20 ляет устройство, которое потребуется для реализации указанного способа, Наиболее близким к предлагаемому является способ создания непрерывного градиента концентрации раствора, вклю-g чающий предварительное создание ступенчатого градиента. 1.23.

По известному способу готовят несколько растворов возрастающей концентрации и осторожно наслаивают их друг на друга в приемнике, начиная с самого тяжелого. Получается ступенчатый градиент, который через 1-2 дня за счет термической диффузии превращается в непрерывный. Способ может быть использован в условиях

35 микрогравитации; Однако он длителен и трудоемок при выполнении в указанных условиях.

Цель изобретения " ускорение и упрощение процесса создания непрерывного градиента концентрации, Цель. достигается тем, что согласно способу создания непрерывного градиента концентрации, включающему предварительное создание ступенчатого градиента, последний создают в капил«. ляре и вытеснением раствора из капилляра в приемник создают в нем непреывный г а кент концентрации.

Непрерывное изменение концентрации создается под действием капиллярwx сил и сил трения в жидкости в процессе ее вытеснения из капилляра, На фиг, 1 и 2 изображены S-образный и линейный градиенты концентрации, полученные предлагаемым способом.

Изобретение поясняется на примерах создания непрерывного градиента концентрации боратного буфера в глицерине в диапазоне 0-503 боратного буфера.

Пример. 1....Bo фторопластовую капиллярную трубку длиной 35 м с внутренним диаметром 1,5 мм, объем которой (60 мм) равен объему электрофоретической колонки (приемник), вводится 30 мл 0,01 М раствора боратного буфера (рН = 7, низкоплотный раствор) и непосредственно эа ним

30 мл 504""ного раствора указанного боратного буфера в глицерине (высокоплотный раствор) со скоростью.

4 мл/мин.

Капилляр со сформированными в нем последовательными и равными по длине столбцами из упомянутых растворов .в заданном для электрофоретической колонки диапазоне градиента концентраций присоединяется к нижнему концу колонки. При вытеснении раствора из капилляра (со скоростью 4 мл/мин) в колонке образуется непрерывный градиент концентрации буферного раствора S-образной формы (сплошная кривая на фиг..1; пунктирная - предварительно созданный в капилляре двухступенчатый градиент). При этом для формирования четкой горизонтальной границы раствора в электрофоретической колонке поступают обычным образом. предварительно вводят в колонку

"пробку" из воды.

Пример 2. В аналогичную капиллярную трубку последовательно вводят по 20 мл 0,01 М раствора боратного буфера, его 253,-ного и 50 -ного раствора в глицерине со скоростью

4 мл/мин. При вытеснении раствора из капилляра (со скоростью 4 мл/мин) в колонке образуется линейный градиент концентрации боратного буфера (фиг. 2, обозначения те же, что и на фиг. 1).

Вариациями длин столбцов и их концентраций в электрофоретической колонке может быть создан градиент концентрации буферного раствора, а сле 3 1035495 а довательно, и градиент рН по любому . и d 0,5-2,0 мм соответственно) не плаано изменяющемуся закону в задан- влияют на воспроиэводимость и форму ном диапазоне. создаваемого градиента.

Как показывает эксперимент, использование капилляра позволяет вос- 5 Способ может быть использован для производимо создавать нужный градиент получения градиента как в обычных концентрации любой. формы в зависи" условиях, так и в условиях микрогра-. мости от длин, числа и концентраций витации. При этом для получения в растворов, формируемых в капилляре приемнике непрерывного градиента трестолбцов (ступеней). Величине сК0- 10 буется не более 30-40 мин, что повы-. рости прокачки растворов и внутренних шает производительность труда обслудиаметров капилляров (Ч = .4-120 мл/мин живающего персонала.

Сfa

Я М

Ойем расвбсро, ми

Фиг. Г

Составитель И. Клевнина

Редактор В. Ковтун ТехредM. Гергель .

° В

Корректор Г. Решетник

Тираж 873 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 5822/44 филиал Illlll "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная,