Способ консервирования изолированных клеток печени

 

СИОСОБ КОНСЕРВИРОВАНИЯ ИЗОЛИРОВАЙНЫХ КЛЕТОК ПЕЧЕНИ путем Помещения их в консервирующие растворы , охлажденные до , о т л и ч :Д ю щ и и с я тем, что, .0 целью уветтче ня срока храиениА и увеличения жизнеспособных клеток , взвесь изолированных клеток сначала помещают в отдельные емкости объемом 1,0-1,5 см из полупроницаемой мембран ы, смену среды проводят трижды через каждые 10

.СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТ ИЧЕСНИХ

РЕСПУ БЛИН (19) (10

Зац A 01 N 1 02.

ОПИСАНИЕ. ИЗОБРЕТЕНИЯ I

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТИРЬПЪ9

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3347806/28-13 (22) 05. 11. 8 1 (46) 15. 11. 83 ° .Бюл. В 42 (72) Г Е-. Островерхов -и В.Г.Бруслик (71) 2-й Московский ордена Ленина государственный медицинский инсти; тут им. Н.И. Пирогова (53) б б. 314-089 (088 ° 8) (56) 1. Патогенид и методы лечения печеночной недостаточности, Сб. работ 2 МОЛГМИ им. Н.И. Пирогова.

М., 1978, т. ХХП, вып. 25, с. 37. (54) (57) -СНОСОВ КОНСЕРВИРОВАНИЯ

ИЗОЛИРОВАННЫХ КЛЕТОК ПЕЧЕНИ путем .помещения их в консервирующие растворы, охлажденные до 2-4 С, о тл и ч а ю шийся тем, что, .с целью увеличения срока хранений и увеличения жизнеспособных клеток, взвесь изолированных клеток сначала помещают в отдельные емкости объемом 1,0-1,5 см из полупроницаемой мембраной, смену среды проводят трижды через каждые 10 12 дней, 1053803

Составитель И. Белянин

Техред й. Гергель Корректор А. Ильин-

Редак ор С. лисина

Эаказ 8957/3 Тираж 721 Подписное

ВНИИП Государственного комнтета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Иос..ква, Ж-35., Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение, относится к медицине и может быть использовано

Ф прн консервировании изолированных клеток печени.

Известе способ консервирования изолированных клеток печени путем помещения в консервирующие растворы Тироде, Эрка, Хенса, Игла, среды 199 с последующим .выставле.нием их в холодильник при + 2-4 С

О и сменой среды через.определенные интервалы (1j .

Однако известный способ характеризуется тем, что клеточная вэвес; при хранении в среде консервирования в нижних отделах флакона образует осадок — многослой клеточной взвеси толщиной 1 0-1,.5 см и поэтому поверхностный слой клеток имеет хороший контакт оо средой, а нижние слои клеток — плохой, что и определяет значительное разрушение клеток и особенно в нижних слоях осадка, что подтверждается проведенными морфологическими исследованиями. В результате этого способ позволяет сохранить к 30 дню только 47% клеток, которые при окрашиванни 0,2%-ным раствором трипановой сини остаются светлыми, то есть жизнеспособными

Цель изобретения — увеличение срока сохранения и увеличение количества жизнеспособных клеток печени.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу консервирования изолированных клеток печени путем помещения их в консервирующие .растворы, охлажденные до 2-4ОС, взвесь изолированных клеток помещают в отдельные емкости объемом

1,0-1,5 см иэ полупроницаемой меьФбраны, смену среды проводят трижды через каждые 10-12 дней.

Способ осуществляют следующим образом.

В стерильных условиях проводят заготовку изолированных клеток печени путем использования ферментно- механического способа. Полученную клеточную взвесь разводят в среде

199 до концентрации 20 млн/мл и заполняют ими стерильный шприц с точной градуировкой и стерильной системой гибких силиконовых .трубок.

Одновременно проводят подготовку полупроницаемой целлофановой плен-5 ки (30, 100), которую помещают . в физиологический раствор, затем переносят в раствор диоцида

1 : .2000 для стерилизации, а затем промывают целлофан дистиллированной

10 водой.

В условиях операционной участок . пленки надевают на конец снликоново .ro шланга и, отсупив на 1,0 см от

его конца, накладывают лигатуру, 15 после чего в эту полость вводят 1.мл клеточной взвеси и, затягивая лигатуру, удаляют. силиконовый шланг..

Таким образом, образуется замкнутая полость, в которой находится клеточная взвесь. В стерильный флакон (500 мл) помещают 350-400 гранул, которые дополнительно заливают сре; дой 199, и флакон вновь герметично закрывают в холодильник с температурой + 4 С. Гранулы во флаконе находятся как бы во. взвешенном состоянии. За флаконом с гранулами проводят динамическое наблюдение (10-12, 20-24, 30-36 дн), следят за окраской среды, изменяют рН среды, через определенные временные, интервалы проводят забор rpaayn, вскрытие йх, приготовление мазка клеток с последующим подсчетом клеток в поле зрения

Э после обработки их витальными красителями. Через каждые 10-12 дн проводят смену среды путем удаления старой и заливки флакона нойой средой 199. Гранулы сохраняют в течение

30-Хб дн.

40 Ис поль зо ван ие предлагаемого способа консервирования изолированных клеток печени позволяет увеличить срок сохранения и количество жизнеспособных клеток .с 47 до 76%, прб. 45 водить просто и быстро смену среды, ,сохранять гранулы, а соответственно и изолированные клетки во взешенном состоянии и, обеспечивая хороший контакт клеток со средой, упрощает

5О .их использование