Способ получения производных пептидов

 

Cnncofi получения производных пептидов общей формулы I : ,CN CH-NH-C-CH-NH-C-CFj ОСНг СН, (Л где R- ОН, NHj,, отлич-ающийся тем, что пептид общей формулы И R-C-CH-NH-C-CH-NH-C-CH-NH2X М « М Н « I а I ОСНг О СН CHj CHj где П а) R - ни 2 , X - Н и 81 R- осн, X - cocfj или II а в виде ацетата подвергают взаимодействию с нитри- , лом фумаровой кислоты в присутствии ел дегидратирующего агента при темперасл туре 60-80 С, в слечае, когда в i о со реакцию вводится пептид формулы Па процесс проводят в присутствии анО ) гидоида трифторуксусной кислоты.

„„Я0„„1055

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTOPCHOIVIY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

R сн сн-сн O сн-нн-с-сн-нн-с-сг, 2 3

СНЗ

CN (21) 3316989/23-.04 (22) 14.07.81 (46) 23.01.85. Бюл. 1Н 3 (72) Л.Н).Скляров .(71) Всесоюзный кардиологический . научный центр ANH СССР (53) 547.964.4.07(088.8) (56) 1. E.Harum, К.J.Chang, I. Shechter, S. И 3cinson, P. ChatreCN где 11 — ОН, ЙН, о т л и ч.а ю шийся тем, что

I пептид общей формулы П

И-С-СН-NH-С-CH-NH-С-СН ЯН Х

И I И 1 Л I

-0CH> О СН, О СН, сн, сн, 4Р11С 07 К 5/04 // А 61 К 37/02

casas "Fluorescent and protoaffinity, enkephalin derivatives: preparation

and interaction with apiate recep?ors Вiochem. Biophys. Res. Com.

1979, 88 (3), 841) . (54) спОсОБ пОлучениЯ >1IPOH3B0gHhE

ПЕПТИДОВ. (57) Способ получения производных пептидов общей формулы I где Пa) R- HH, Х вЂ” Н и 3) к — Осн... х — cocp нли 11 а1 в виде ацетата подвергают взаимодействию с нитрилом фумаровой кислоты в присутствии дегидратир лощего агента при температуре 60-80 С, в слечае, когда в д реакцию вводится пептид формулы Иа процесс проводят в присутствии ангидоида трифторуксусной кислоты.

1055096

Цель изобретения — новый способ получения новых производных пептиДОВ, Поставленная цель достигается

1О описываемым способом получения, производных пептидов общей формулы 1 CH3 CH-СН

CH- NH-С-CH-МН вЂ” С вЂ” СР

N l и 1 II

СИ О CHg О где R-0H,NH2, заключающемся в том, что пептиц общей формулы П: и-С- CH-NH C-СН-ЮН-С-СН вЂ” NH2X

П t . II I -: II 1

СН2 О СНЗ . СН2

Сн сн сн, Q где Па1 R — Нг, Х - Н1 и 3) g — ОСИ, Х-COCK или П а в вине ацетата 35 подвергают взаимодействию с нитрилом фумаровой кислоты в присутствии дегидратизующего.агента при температуре 60-80 С, в случае, когда в ре0 акцию вводится пептид формулы П о процесс проводят в присутствии ангидрида трифторуксусной кислоты.

Пример 1. Смешивают 2,2 г (5 ммоль) амида фенилаланил-аланил-лейцина (ацетата), 0,6 г (8 ммоль) 45 фумаронитрила, 8 мл (400 ммоль) ангидрида трифторуксусной кислоты,, к смеси добавляют 0,6 r (4 ммоль) пятиокиси фосфора м полученную суспензию перемешивают в течение

172 ч при 60 С. Избыток реагентов удаляют в вакууме, остаток нейтрализуют насьпценным раствором соды и экстрагируют хлороформом, раствор высушивают над сульфатом натрия, хлороформ удаляют в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате, отбирают аликвотную часть и наносят на колон-

Изобретение относится к новому способу получения новых производных пептидов — соединений, содержащих хромофорную группу, которые могут найти применение в биологии, биохимии и медицине.

Известный способ получения пептидных производных с хромофорной группой состоит во взаимодействии пептидов с соединениями, содержащими хромофорную группу Г1) .

Однако известный способ не позволяет модифицировать сразу два аминокислотных остатка пептида. ку (3 х 40 см), заполненную сили-, кагелем, для элюирования используют этилацетат. Отбирают первые флюоресцирующие фракции (< 20 мл), упаривают их в вакууме. Получают 190 мг (7X) трифторацетил-фенилаланил — P †этил3,4-дициан -5-амино-6-изобутил-пири; диламцца.

Rf 0,9 (этилацетат) на пластинке силикагель "Иерк" Масс-спектр: И—

486; 374; 242; 228; 227; 131; 91.

ПИР-спектр содержит сигналы (О .м.д.)

0,9 (С4Н ); 1,7 (СН1); 2,9 (СН );

7,3 (С Н ); 9,1 (Н); 9,7 (Н) . Спектр возбуждейия 360 нм. Спектр испускания 430 нм. Гидролиз 2,3 мг пептидил пиридина (24 ч; 6 í HCf; 105 С) дал

4,6 мкмоль фенилаланина, расчитанное количество 4,9 мкмоль.

Пример 2. Смешивают 2,29 r (5 ммоль) метилового эфира трифторацетилфенилаланил-аланил-лейцина,,0,6 r (8 ммоль) фумаронитрила, 5 г

1 силикагеля в 20 мл хлороформа, к смеси добавляют 1 г (7 ммоль) пятиокиси

10550

Редактор П. Горькова Техред М. Гергель

Корректор В. Сирохман

Заказ 133/3

Хираж 354

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4 фосфора и полученную суспензию размешивают 172 ч при 40-60 С. Суспензию нейтрализуют насыщенным раствором бикарбоната натрия, силикагель отфильтровывают, хлороформенный слой высушивают над сульфатом натрия и упаривают в вакууме. Остаток раство- ряют в этилацетате, отбирают аликвот- ную часть, наносят ее на колонку (Зх40 см), заполненную силикагелем и элюируют этипацетатом, Собирают флюоресцентную фракцию(50 мл) и упаривают в вакууме, Получают 120 мг (5X) трифторацетил-фенилаланил Р -этил3,4 дициан-5-окси-6-изобутил-пиридил- 1 . амида Р 0,5 (этилацетат) на пластинке силикагель "Иерк", Масс-спектр:

М -487; 375; 243; 229; 131; 91.

Спектр возбуждения 360 нм, спектр испускания 462 нм. Гидролиз 2,4 мг щ ,пептидил-пиридина (24 ч, 6 н ЙС, 105 C) дал 4,89 мкмоль фенилаланина (расчетное количество 5 мкмоль).

Пример 3. Конденсацию пептида амида лейцил-аланил- фенилаланина с фумаронитрилом в присутствии ангидрида трифторуксусной кислоты проводят как описано в примере 1.

96 4

При этом с колонки с силикагелем элюируют флуоресцирующий продукт

I трифторацетилированное по пиридиновому ядру производное, отличающееся по " от целевого продукта формулы 1.

5,7 мг трифторацетилированного по пиридиновому ядру производного растворяют в 5 мл метанола, к полученному раствору добавляют 1 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия.

Смесь перемешивают 6 ч при комнатной температуре. Получают трифторацетилфенилаланил (3 -этил-3,4-дициан-5-окси-б

-б-изобутил-пиридиламид, 8 g О, 5 (этилацетат, силикагель "Иерк"), масс-спектр: М : 486; 375; 243;

229; 131; 91. Суммарный выход целе.вого продукта 17Х.

Предлагаемый способ позволяет получать новые производные пептидов с пространственно закрепленной конформацией элементов пептидной цепи вслед ствие жесткости ароматической системы пиридина, что может позволить получить аналоги пептидов с сохранением функции, но устойчивых к действию протеаз.