Способ определения безвредности пищевых продуктов или техногенных веществ содержащихся в них

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЗВРЕДНОСТИ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ ИЛИ ТЕХНОГЕННЫХ ВЕЩЕСТВ, СОДЕРЖАЩИХСЯ В НИХ, включающий введение в организм подопытных животных различных доз испытуемого водества, приготовление гистологических препаратов из тканей тонкого кишечника животного и микроскопическое исследование последних для выявления патологических изменений , отличающи йс я тем,что, с целью повышен1Гя чувствительности способа и сокращения срока исследования , дозы испытуемых веществ вводят животным в течение 1,5-6 мес,после чего в течение мес скармливают обычный рацион, из гистологических параметров готовят радиоавтографы, микроскопическими иcqлeдoвaниями устанавливают скорость обновления . эпителия тонкого кишечника,а патолоо гические изменения выявляют при срав-tg нении этого показателя у подопытных (Л животных, не получавших испытуемое вещество.

„.SU„„.10 А

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИ4ЕСНИХ

:РЕСПУБЛИН

3(59 Р. 61 В 10 00; Cj,. 33/02

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 2662579/30-15 (22) 28.07.78 (46) 23.12.83. Бюл. М 47 (72) Н.Н.Пятницкий, В.М.Жминченко, Н.П.Сугоняева и Т.Й.Шкляр (71) Институт питания AMH СССР (53) 615. 092 (088. 8) (56) 1. Поздняков Р.. Л. Медико-биологические исследования углеводородных дрожжей. М., Наука, 1972, с . 385- 390.

2. Епифанова О.И °, Терских В.В.и

Захаров A.Ô. Радиоавтография, М., Высшая школа, 1977. (54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЗВРЕДНОСТИ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ ИЛИ ТЕХНО

ГЕННЫХ ВЕЩЕСТВ, СОДЕРЖМЦИХСЯ В НИХ включающий введение в организм подопытных животных различных доз испытуемого вещества, приготовление гистологическйх препаратов из тканей тонкого кишечника животного и микроскопическое исследование последних для выявления патологических изменений, отличающийся тем,что, с целью повышенкя чувствительности способа и сокращения срока исследования, дозы испытуемых веществ вводят животным в течение 1,5-6 мес,после чего в течение 1-1 <5 мес скармливают обычный рацион, из гистологических параметров готовят радиоавтографы, микроскопическими исследованиями устанавливают скорость обновления . эпителия тонкого кишечника,а патологические изменения выявляют при срав-ю ненни этого показателя у подопытных животньи, не получавших испытуемое вещество, С:. 061797 способам в частности, способ определения безИзобре тение относится к спосо а вредности )(-алканов (техногенных приопределения бе р д зв е ности пищевых и и содержащихся в искусственно в еств в эксперименте месе техногенных вещ п именение в гигиене создан анаемых пищевых белках) . ч может найти приме

20 белых крыс в возрасте б ействия продуктов Берут питания на Организм животного или для ус ьно опустиьых концен- группы. Пытно г тановления предельно допус ежедневно в корм нормальные алканы в зе 400 мг на кг массы тела в сутке енных веществ в пищевых продуктах. без- в течение 5 мес, после чего отменЯИзвестен способ определения без- В теч вредности пищевых, техногенных ве- 1 (от дачу -алканов контрольных содержат на виварществ, который включает сл дукщу е ю Как и Лом рационе в тече чение 1 мес. В поспоследовательность приемов и опера- " че ° рм у мыми веществами В течение 30 мес.На новления скорости о нов разных сроках и В конце опыта живот- 15 ных (опытных и контрольных) забивают и берут участки внутренних органов, тела. Через 24 ч после введения тимидиготовят гистологические препараты на крыс забивают под эфирным наркозом и при микроскопическом исследовании и вырезают участок тонкого кишечника

ПРепаРатов внУТРенних ОРганов в Я 20 и ром 1-2см Отступя на 2 3 см ! ляют ту или иную патал згическук картиот окойчания двен лю- ки с помощью шприца в просвет выре.ких изменений в тканях делают заклю- ки, с

10tчение и безвредности действия испы- занной кишк шки вводят 1 мл -ного рас т вора формалина для быс трой а ии во ин и сохранения на

Недостатком данного способа являет- иксад рс фикных них эпителиальных клеток, далее ся невозможность определения вредных

10%-ном растизменений, которые не нарушают морф - ру о- си ют отрезок кишки в -н

4 проворе формалина в течение сут, р логйческие структуры клеток и тканей, мывают в проточно воде, и проводят кишт е. способ обладает малой чувстви° ° ку через бата ю спирт — ртов восходятельностью и является Описательным, а щей концентрации и з аливают отрезок не количественным методсм, Кроме того, тбнкой кишки в пара ин, ФИ при этом плосс ед ван. ерпендикулярно длине кишки.

Целью изобретения является повыше-35 Рер ние чувствительности способа и сокраПри забое животных для выявления щение сроков исследования. патогистологических изменений во внутПоставленнаЯ цель достигаетсЯ тем, ренних органах берут участки дуючто дозы испытуемых ве»еств вводят щих органов: печени, пОчки g надпочеч» животным в течение 1,5-6 меся после 4р ника, тимуса, легкого, селезенки. чего в течение 1-1 5 мес скар""ив т Гистор,дивтогжфы готовят из обычный рацион, из гистологических поперечных срезов тонкой кишки по препаратов готовят радиоавтог аф, стандартной методике(21. Для этого микроскопическими и ccледов ани ями срезы заливают в темноте фотоэмульсией

Устанавливают скоРость обнонлениЯ тила МР и о тавляют их в темноте и в эпителия тонкого кишечника, а пато- 45 холодильнике на 7 дн.Pocëå экбпонирологические изменения выявляют при вания фотоэмульсии проявляют в метолсравнении этого показателя у подопыт- - gpoxHHOHoBGM проявителе и закрепНЫХ ЖИВОТНЫХ И ЖИВ ОТНЫХ НЕ ПОЛУЧИВ л т В Фикс аже а пОсле прсмывки ших испытуемое вещество. препарата, гисторадиоавтограф подСущность способа заключается в

50 крашивают гематоксилинсм р линсм Майера. том,что скорость обновления эпителия На полученных гисторадйоавтографах кишки при микроскопическом исратимо с возрастом по экспоненциаль- следованни определяют скорость обновВеличина скорости обнов- ления эпителия тонкого кишечника для

55 чая. ".я этого зависит также от интенсивности каждого отдельного случая. ления зав едшестМующего функционирования ор- на гисторадиоавтографах ре р р ах гист и упредшест гана и последняя находится в обратной ют количество, клеток (меченых и ем и немезависимости от интенсивности клеточ- ченых) в эпителиальнсм пласте комп ° ного обновления, поэтому по данному лекса крипта- ворсина. Учет ведут критерию можно количественно оценить 60 начиная от первой клетки (энтеростепень врйдного воздействия или ци т а) дн а крип ты, котора я делит оп елить безвредность действия последнюю на две симметричные полоиспытуемых доз веществ. ви ины а подсчет ведут Вдоль по крип) . Определение без- те, переходя затем на ворсину и

Пример и клетвредности пищевых, тех но-енних веществ,65 заканчивают последней мечено

3 1061797 ко на в и орсине Учитывают только про- эфирным наркозом и вырезают участок дольно срезанные комплексы крйпта- тонкого кишечника размером ворсина, Массив наблюдений, необхо- отступя на 2-3 см oL окончания дведимый для получения достоверной сред- надцатиперстной кишки, с помощью

> ней величины скорости обновления шприца в просвет вырезанной кишки эпителия тонкого кишечника, у одного 5 вводят 1 мл 10%-ного раствора формаживотйого составляет не менее 132 лина для быстрой фиксации ворсин и комплексов крипта"ворсина. сохранения на них эпителиальных клеДля выявления безвредности дей- ток, далее фиксируют отрезок кишки в ствия и -алканов микроскопируют приве- 10%-ном растворе формалина в течение товленные гистологические препараты 10 4 сут, затем промывают в проточной внутренних органов: печени, почки, воде, проводят кишку через батарею надпочечника, легких, тимуса, селе- спиртов восходящей концентрации и зенки на предмет обнаружения патоло- заливают ее в парафин, при этом гических изменений. В исследованных плоскость парафинового среза ориенорганах опытных и контрольных крыс 15 тируют перпендикулярно длине кишки. патологических изменений не было При забое животных для выявления обнаружено. патогистологических изменений во далее сравнивают значения cKQpoc» внутренних органах берут участки тей обновления эпителия тонкого кишеч следующих органов: печени, почки, ника опыта и контроля, которые со- 20 надпочечника, тимуса, легкого, селеответственно равны: 52 клетки/сут зенки ° и 65 клеток/сут.Статистически разница Гисторадиоавтографы готовят из жду ними достоверна при1 3,37 и поперечных срезов тонкой кишки по между а 0,01. Ус-.ановлено, что скорость стандартной методике, пример 1) .Д о бновления эпителия тонкого кишечни- 25 этого срезы заливают в темноте фотока у жив отных опытной группы замедли- эмульсией типа МР и оставляют х лась и соответствует скорости, харак- в темноте и в холодильнике на дне те ной для крыс в возрасте 10,5 мес, После экспонирования фотоэмульсию а в контрольной группе животных сред- проявляют в метол-гидрохиноновом няя величина скорости обновления эпи- проявителе и закрепляют в фиксаже, телия соответствует скорости паспорт . а после промывки препарата гистораного возраста, т.е. мес. о т е 7 мес Можно диоавтограф подкрашивают гематоксили. сделать вывод, что под действием ном Майера. На полученных гисторадиоальных алканов в дозе 400 мг . автографах кишки при микроскопичесна кг массы тела в сутки при вскарм- ком исследовании определ т . р ливании ими крыс в течение мес, и 5 мес обновлени эпителия тонкого кишечника кишка постарела на 150% по сравнению для каждого отдельного случая, для

i с контролем. -алканы в указанно этого на гисторадиоавтографах регистдозе оказали вредное действие на рируют количество клетдк (меченых И организм опы анизм опытных крыс, тогда как йемеченых) в эпителиальном пласте

40 комплекса крипта-ворсина. Учет ведут наниная от первой клетки (энтероцита) дна крипты, которая делит крипту ками известного сПособа выявить вредействи я не удалось . и м е р 2. Определение без- на две симметричные половины, под. счет -. вдоль по крипте, переходя завреднс>сти щ нс>сти пищевого рациона, содержа45 тем на ворсину и заканчивают подсчет щего белково-витаминный концентрат последней меченой клеткой на ворсине. (Б ВК) °

Массив наблюдений, необходимый для

Испытуемый пищевой рацион пред- получения достоверной средней скоросставляет собой виварный рацион, в ти обновления эпителия тонкого кишечкотоРом 25% белка сУточного Р циона 50 ника, у одного животного составляет з.аменено белком БВК ° - -- . . яе менее 132 комплексов крипта-ворсиБерут крыс одномесячного возраста 2 группы по 10 животных в каждо ° пытн и О ых крыс кормят испы- Для выявления безвредности дейстие а иона мик.туемой диетой в течение и ие 6 мес посл вия испытуемого пищевого р ц чего опытных животных переводят срореводят сро- 5 роскопируют приготовленные гистологина вива ный рацион. ческие препараты внутренних органов: ком на l мес на виварны рацион ° и н почечника, легких, К онтроль ная группа животных находит- печени, почки, над мет обнася на виварном рац ционе постоянно, тимуса, селезенки, на пред изменений. в последний день этого периода для ружения патологических изменени

В исследованных органах опытных и у т с ановления скорости обновления ителия тонкого кишечника опытным - контрольн х р

ы к ыс патологических изэпит ели я менений не было обнаружено. Далее и контрольным животным вводят -внутрибрюшинно Н-тимидин в дозе, к

Ъ 0 5 М Ки сравнивают значения скоростей обновна 1 r массы тела. ерез

Ч 24 ч после ления эпителия тонкого кишечника в введения тимидина крыс забивают под 65 опыте и контроле.

106 1797

Составитель М.Белоусова

Редак ор O,Черниченко Техред A.Áàáèíåö

Корректор Р.. Повх

Заказ 10093/5 Тираж 713

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж--35, Раушская наб., д.4/5

Подписное

Филиал ПП11 Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 установлено, что величина средней скорости обновления эпителия тонкого кишечника в контрольной группе животных составила 61 0,9 клеток/сут, в, опыте соответственно 63+1,4клеток/сут.

Разница между средними значениями скоростей в опыте и контроле недосто верна при11,2 и рр 0,05. Значения средних скоростей в опыте и контроле равны и соответствуют величине ско рости обновления эпителия тонкого ки- 10 шечника их паспортного возраста, т е. 8 мес.

Таким образом, испытуемый пищевой рацион, содержащий 25%-ного белка

БВК от .общего количества Ьелка суточ» ного рациона крыс, обладает безвредным действием .

Экономический эффект достигается за счет сокращения в 2-3 раза сроков исследования. Положительный эффект, не создающий экономии, возникает в связЬ.р изменением технолбгии, т.е. эа счет использования нового теста - скорости обновления эпителия тонкого кишечника для оценки безвредности и выражается в возможности дать количественнуЮ оценку и повысить чувствительность способа.