Штамм- @ @ @ -11291 продуцент глюкозоизомеразы

 

Штамм Agrobacterium spec. NRRL В-1,1291 (коллекция Северной Фегиоч нальной исследовательской лаборатории , Пеория, США) - продуцент глюкрзоизомеразы . СУ) с

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН дц С 12 N 9/92

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

И ПАТЕНТ,Ф (21) 3298898/28-13 (62). 2883201/28-13 (22) 26 ° 02-81 (23) 14.02.80 . (31). 20212-A/79 (32) 15..02.79 (38) Италия (46) 30.01.84. Бюл. Р 4 (72) Роберто Оливери, Эудженио Фас-. кетти, Леонелло Анджелини (Италия) и Людвиг Деген (ФРГ). (71) Э.H.И.Энте, Национале Идрокарбури (Италия) .(53) бб 3. 11 (088. 8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР 9 534491, кл. С 12 N 9/92, 1975.

2. Авторское свидетельство СССР. 9 534490, кл. С 12 N 9/92, 1975.

„„SU „„1071 225 А (541 ШТАММ AGROBACTERIUM SPEC.

NRRL B - 1 1 2 9 1 - ПРОДУЦЕНТ ГЛВКОЗОИЗ ОМЕР АЗЫ. (57) Штамм Agrobacterium spec. ИЕИ

В-11291 (коллекция Северной Регио нальной исследовательской лаборатории, Пеория, США) - продуцент глюкозоизомеразы.

1071225

ВНИ 4ПИ Эакаэ 11726/5б Тираж 522 Подписное.Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к новому штамму — продуценту глюкоэоизомераэы, используемой для получения фруктозы.

Известны различные штаммы бактерии микроорганизмов, например, Actinomyces,olivocinereus 154 (1) или

АсгоЬасГет cloacae 334(2), способные продуцировать глюкозоизомеразу.

Цель изобретения - получение но- 10 ного штамма, способного продуцировать глюкоэоизомеразу. изобретение представляет собой штамм Agrobacterium spec.NRRÇ

В-11291 (коллекция Северной Регио- 15 нальной.исследовательской лаборатории, Пеория, CQIA) — продуцент глюкозоизомеразы.

Укаэанный штамм выделен из почвы.

Характеристика штамма,культураль-.,20 но-морфологические признаки.

Единичные, иногда в парах, палочки размером 0,8-2,0 мкм, грамотрицательные, не образуют капсул и спор, подвижные пенитрихи с 4-6 жгутиками.

Колонии на агаризованной питательной среде (DiЮсо), приподнятые с четким краем, кремовые, прозрачные, гладкие от 0,5 до 1 мм в диаметре. Обильный рост наблюдается на кальциево-глицерофосфатном-манито-нитратном arape с образованием коричневого пигмента и .ореола.

Биохимические признаки. Растет при 4-39©С на всех простых средах, не нуждаясь в факторах роста. В ка- . З5 честве источника азота использует

Nik4NO> или аминокислоты.

Оксидаза: положительная.

Каталаза: положительная. 3

Восстанавливает нитраты до нитри- 40 тов .

Не гидролизует: Tween-ÂÎ,.казеин,желатин, целлюлозу, крахмал, агар.

Образует З-кетогликозиды.

Адсорбирует краситель на магнитном агаре с анилиновым синим. . Изменяет цвет молока с Rocella

tenctoria в серо-коричневый.

Потребление углеводов - окисли" . тельное.

Использует в качестве источника углерода D(+)-глюкозу, Ь(+}арабиноэу, D(+) - кеилозу, D(+)-треалозу„ Э(- рибозу, L(+)-рамнозу, лакто3уу, целло.биозу, мальтозу, цитрат, ацетат, лак-,5 тат, пропионат, Ь -аспарагиновую кис-, лоту, Ь-гспарагин, L-гистидин, L-алании, L-аргинин.

Не вызывает новообразованный в дисках корней моркови.

Пример 1. Культивирование ведут на питательной среде следующе-! го состава, г/л:

Глюкоза 5

Ясилоза 5

CHZP04 1 3 (%1 )гзо, i4gS84 "7Н О . 0 4

Ге$04 7Н О 10 мг/л

СаСУ бН О 40 мг/л

NHSO45H O 5 мг/л

ZnSO 7Н О 5 мг/л

CuSO4-5H О 1 мг/л

СоСф бН О 1 мг/л

С помощью NaOH устанавливаютрН 7,2 и питательную среду разливают по 100 мл порциями в 500-миллилитровые колбы Зрленмайера, После сте-, рилизации в течение 30 мин при 110 С колбы засевают культурой Agrobacterium spec. NRRL В-11291 иэ скошенного агара, содержащего ту же самую культурную среду с 2% агаром (Difco) и инкубируют в течение 24 ч при 30 С с вращательным перемешиванием со скоростью 220 об/мин. Клетки собирают центрифугированием и промывают буферным раствором (0,1 М ЛАДО, содержащий 1,1(Г4моль Со++ и !>,14 .моль

Mg++, PH 7,0). Из 100 мл питательной среды получают 1,72 г .влажных клеток.

Эти клетки снова суспендируют в

20 Мл вышеуказанного буферного раствора и подвергают прессованию на френч-прессе. В полученном препарате определяют ферментную активность, icoторая составляет 50,4 МЕ на 1 г влажных клеток.

Пример 2. Выращивание культуры Agrobacterium spec. NRRL В-11291 ведут как в примере 1.

Из 500 мп культуральной жидкости получают 10,2 г влажных клеток, которые суспенднруют в 40 мп буферного раствора (0,1 М Na SO3, рН 7 и добавляют, перемешивая при -10 С, к 200 мл ацетона. После 15 мин обработки клетки собирают на бумажном фильтре, промывают- ацетоном, собирают и сушат в вакууме при комнатной температуре. Таким образом, получают

1,6 r сухих клеток.

Ф

Активность одного грамма ацетонового порошка, полученного таким образом, составляет 180 NE.

Таким образом, штамм Agrobacterium spec. NRRL В-11291 является новым штаммом, способным продуцировать глюкоэоизомераэу.