Штамм вируса клещевого энцефалита n132 для приготовления гемагглютинирующего инактивированного диагностикума

 

Штамм вируса клещевого энцефалита 132, ГКВ 640 (коллекция Института вирусологии АМН СССР им. Д.И. Ивановского), используемый для приготовления гемагглютинирующего инактивированного диагностикума. (Л

СОЮЗ СОВЕТСНИХ И ДИ

РЕСПУБЛИК (19) СВ

Мя11 С 12:II 7/00//(c 12 II 7/00;

С 12 R 1/91) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПЮ ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OVHPbITHA

Й ASTOPCNOMV СЮЩВТВЪСТВУ (54) IIITANN ВИРУСА КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА В 132 ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ГЕИАГГЛЮТИНИРУЮЩЕГО ИНАКТИВИРОВАННОГО . ДИАГНОСТИКУИА. (57) Штамм вируса клещевого энцефалита Р 132, ГКВ 9 640 (коллекция

Института вирусологии ANH СССР им. Д.И. Ивановского), используевый для приготовления гемагглютинирующе"

ro инактивированного днагностнкчма. (21) 3446663/28-13 (22) 31.05.82 (46) 07.02 ° 84. Бюл. Р 5 (72) О.В. Островская, Л.А. Верета,, Т.В. Ижельская, A.Â. Разгуляева, И.Н. Расщепкина и И.С. Воробьева (71) Хабаровский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии, Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских, биологических препаратов им. Л.A. Тарасевича (53) 576.858.25(088.8) (56) 1. ИРТУ - 42 В 532-73. Культуральный диагностнкум клещевого энцефалита для PTlA.

2. ЮРТУ - 42 В 78-65 - Гемагглютинирующий диагностикум клещевого энцефалита.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

1071633

Изобретение относится к вирусологии, а именно к лабораторной диагностике заболеваний, вызываежх вирусом клещевого энцефалита.

Известен штамм вируса клешевого энцефалите "Софьин" для приготовления гемагглютинируиицего инактивированного диагностикума. Однако, известный штамм не обладает достаточно выраженной антигенной и биологической активностью f1)»323 ° 1

Целью изобретения является новый штамм вируса клеевого энцефалита

9 132 обладаюШий повышенной антигенной и биологической .активностью.

Штамм клещевого энцефалита 9 132 выделен из клещей Тхойев persulcatus в классическом очаге клещевого энцефалита в июне 1979 года в Комсомольском районе Хабаровского края и хранится в коллекции Института вирусологии им. Д.И. Ивановского АИН СССР (депозит ГКВ 9 640), Штамм вируса клещевого энцефалита 9 132 характеризуется следуюцими признаками. Штамм высокопатогенен для беспородных .взрослых и новорожденных белых мышей. При заражении вызывает типичную картину экспериментального энцефалита с инкубационным периодом при внутримозговом заражении 4-5 дней (max титр в log LD 50/мл — 9,72-8,82), при подкожном и внутрибрюшном - 5-6 дней (max титр в log LD 50/мл 8,1-7,8 и

8,3-8,0 соответственно . Индекс инваэивности 1,6-1,12.

Гемагглютинирующая активность штамма при репродукции в мозге мышей 1:2560 - 1:10240 в зонах р б,07,0. Индекс ннактивации штамма эфиром - 2,5 (в log LD 50/О 03)риндекс .инактивации дезоксихолатом натрия1,6, индекс терморезистентности - 2,6

Штамм 9 132 хорошо размножается в перевиваемой культуре ткани СПЭВ, вызывая четкую деструкцию клеток на

4-5-ые сутки. Пик накопления инфекционной и гемагглютинирующей активности отмечается на 5-ые сутки. Титр вируса культуральной жидкости на

5-ые сутки инкубации при 37 С составляет 5,5 (в log LD 50/0,03).

Штамм 9 132 обладает высокой бляшкообразующей активностью, под агаровым покрытием титр по БОЕ на культуре

СПЭВ 8,1-10, 1 log 80E/мл. Титр по

БОЕ коррелирует с показателем интрацеребральной активности на мышах.

Бляшки появляются на 4-ые сутки, гетерогенные, H- - признак 1,0-2,5 им.

Антиген, полученный из данного штамма, имеет максимальный титр в

РГА до 1:10240. Штамм 9 132 в реакции биологической нейтрализации нейтрализуется гомологичными сыворотками и сыворотками к штаммам вируса клещевого энцефалита "Софьин", "Хабаровский-17"., "Абсеттаров". Индек- сы нейтрализации с гомологичными сыворотками 3, 3-3,0 с сыворотками к штамму "Софьин" 4,0-3,1, с сывороткой к штамму "Хабаровск-17" 2,9, с сывороткой к штамму "Абсеттаров"

2,8-2,7. Антигенные свойства штамма изучены в перекрестной РТГА, РСК и в кинетической РТГА. Установлено, что штамм 9 132 обладает более высокой

О антигенной активностью по сравнению со штаммом "Софьин"„ быстрее связывается с антителами и в 2-3 раза превышает по титру коммерческий антиген.

5 В перекрестной РТГА с использованием гипериммунных сывороток выявлено тесное антигенное родство с западными и восточными штаммами вируса клещевого энцефалита и более высокая активность штамма 9 132, который выявил антитела в сыворотках в 2-8 раза в более высоких титрах.

Кроме того, выявлена хорошая актив зость антигена из штамма 9 132 в

РСК. В перекрестной РСК исследовали

25 по б гиперимунных крысиных сывороток к штаммам 9 132 и софьин". Средняя геометрическая титров антител в сыворотках при использовании штамма

9 132 5,6, штамма "Софьин" 4i3

30 (средняя геометрическая логарифмов с основанием 2) °

В PCK с гипериммунной сывороткой кроликов к штамму "Софьин" титр при использовании антигена из штамма

35 9 132 1".16,из штамма "Софьин" - 1:16.

Пример 1. Пассирование вирусов. Беспородных белых мышей весом

6-7 кг заражают в мозг по 0,03 мя вирусной суспензии штамма 9 132. При

40 появлении выраженных параличей на

4-5-ые сутки мышей забивают, извле« кают асептично,мозг и готовят 10%-ную суспензию мозговой ткани путем растирания мозга в ступке с добавлением

45 физиологического раствора. Полученные мозговые взвеси центрифугируют при

1000-1500 об/мин в течение 10 мин.

Надосадочную взвесь отсасывают и используют для заражения партии мышей,. инфицированный мозг которых используется для приготовления антигена.

Приготовление антигенов.

Из полученных инфицированных мозгов готовят 10%-ную взвесь на боратном буферном растворе с ph 9,0 и экстрагируют 24 ч при +4 Ñ, затем взвесь центрифугируют на холоде при

9000 об/мин в течение 30 мин. Надосадочную жидкость обрабатывают протаминсульфатом из расчета 6-9 мг су60 хого препарата на 10 мп вирусной суспензии. Полученную взвесь помещают в холодильник при +4 С на

30 мин и затем центрифугируют 15 мин при 2000 об/мин также на холоде. По65 лученную надосадочную жидкость-ан1071633 тиген инактивируют бетапропиолактоном 1:1000 в течение 30 мин при «омнатной температуре (помешивая взвесь через 5-10 мин). Действие бетапропиолактона (через 30 мин) гасят

14%-ным гипосульфитом натрия (на 5

10 мп антигена 1,2-мл 14%-ного гипосульфита) . Полученные таким образом антигены из мозга мышей методом обратноеолевой экстракции, обработанные протаминсульфатом, инакти вированные бета- 0 пропиолактоном, прошедшие контроль без.вредности на беспородных белых мышах, былн использованы В pTFA в сравнительном титровании 4-х групп сывороток.

Гыли исследованы сыворотки доноров из Хабаровска, используемые для.

Сыворотки

Сравнение ко критерию

Стьюдента

Антигены

Средние титры. Доверительные границы

1:32+1:i 1 1:30-1:35

Р 132/"Софьин"t

6,35 М 132

Доноров

Коммерческий

1г4,6-1:9,6

1: 7т1: 1,2

Р 132.

М 132/"Софьин"t=

4,41

Привитых 1г55+1:1,2 1:38-1:81

Коммерческий

1 16+1:1,24 1:10-1 :24

1:557+1:14 1:299-1:1040 9.132/"Софьин"t=

3,85

Р 132

Имму нные

Коммерческий

1:100+1.14 . 1:55-1:184 вороток в РТГА показывают, что процент положительных результатов при титровании сывороток с антигеном

4 9 132 достоверно выше," чем с коммерческим антигеном (Р С 9,01).

Использование штамма Р 132 вируса клещевого энцефалита для . .приготовления диагностикума позволя

S0 ет повысить антигенную и биологическую активность диагностикума и тем самым повысить точность диагностики., СостаВитель М. Бондарева

Редактор М. Товтин Техред М.Тенер Корректор A. Ильин с

3 аказ 45/20 Тираж 522 Подписное

ВНИИПИ Государственногб комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Результаты распределения сывороток по титрам антител в РТГА с антигена штамма 9 132 и коммерческого

"Софьин" говорят о том, что процент сывороток с более высокими титрами (1:40 и выше) отмечается .с антигеном М 132.

Результаты антигенной активности диагностикума штамма 9 132 в сравнении с коммерческим диагностикумом ,штамма ."Софьин" при титровании аыприготовления иммуноглобулинов,. сыворотки людей, привитых очищенной, концентрированной вакциной против клещевого энцефалита, сыворотки больных с диагнозом клещевой энцефалит и типоспецифические иммунные сыворотки ° В опыте, кроме экспериментальных серий антигенов из штамма

Р 132, использован диагностикум клещевого энцефалита, штамм "Софьин" сер. 59, выпускаемый Томским

ИВС.

Полученные результаты представлены в таблице (средние титры антител при испытании различных диагнос" тикумов).