Штамм вируса клещевого энцефалита n139 для приготовления гемагглютинирующего инактивированного диагностикума

 

Италад вируса клещевого энцефалита 139, ГКВ 639 коллекция Института вирусологии АМН СССР им. Д.И. Ивановского, используемый для приготовления гемагглютинирующего инактивированного диагностикума. (Л

(!е (ю

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ . Н ILSTOPCHOMV ЕЕИДатвЪствУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblYHA (21 ):34 4666 3/28-1 3 (22) 31 05.82 (46) 07.02.84. Вюл. Р 5 (72) О.В. Островская, Л.А. Верета, Т.В. Мжельская, A.Â. Разгуляева, М.Н. Расщепкина и М.С. Воробьеэа (71) Хабаровский научно-исследовательский институт эпидемиологни и микробиологии, Государственный научно-исследовательский институт стандартизации, и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А, Тарасевича (53) 576.858 ° 25(088.8) (56) 1. МРТУ-42 М 532-73. Еультуральный диагностикум клейевого. энцеФалита для РТГА (прототип), 2. МРТУ-42 Р 78-65. Гемагглюти нируюцнй диагностикум клещевого энцефалита (прототип), щр С 12 и 7/00//(С 12 и 7/ОО; С 12 R 1/91) (54) ШТАММ ВИРУСА КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА Р 139 ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ГЕМАГГЛЮТИНИРУКЩЕГО ИНАКТИВИРОВАННОГО

ДИАГНОСТИКУМА". .(57) Штамм вируса клещевого энцеФалита 9 139, ГКВ 9 639 (коллекция

Института вирусологии АМН СССР им. Д.И. Ивановского), используемый для приготовления гемагглютинируклце го инактивированного диагностикума.

1071634

Изобретение относится к вирусологии, а точнее к лабораторной диаг ностике заболеваний, вызываемых вирусом клещевого эйцефалита.

Известен штамм вируса клещевого энцефалита "Софьин" для приготовления гемагглютинирующего инактивированного диагностикума 311 и (21

Однако известный штамм не,обладает достаточно выраженной антигенной и биологической активностью. 10

Целью изобретения является новый штамм вируса клещевого энцефалита М 139, обладающий повышенной антигенной и биологической активностью.

Штамм клещевого энцефалита М 139 )5 выделен из клещей Yxodea persulcatus в классическом очаге клещевого энцефалита в июне 1979 года в Комсомольс ком районе Хабаровского края и хранится в коллекции Института вирусологии им. Д.И. Ивановского ANH СССР (депозит ГКВ М 639).

Штамм вируса клещевого энцефалита

М 139 характеризуется следующими признаками. Штамм високопатогенен дпя беспородных взрослых и новорожденных белых мишей. При заряжении вызывает типичную картину экспериментального энцефалита с инкубационным периодом при внутримозговом заражении 4-5 дней (max титр в Зор; 1Л

50/мл 10,52-10,12), при подкожном и . внутрибркшинном 5-6 дней (max титр в lop LD 50/мл 90,70-9,72 и 8,7-8,5 ,соответственно). Йндекс инвазивнос1ти 0,82-0,42 ° 35

Гемагглютинирующая активность штамма при репродукции в мозге мы,шей 1:2560 — 1:10240 в зонах ph б, 0-7,0.

Индекс инактивации штамма М 139 40 эфиром (B log I D 50/0, 03) — 5,0; индекс инактивации дезоксихолатом натрия 2,1; индекс терморезистентности 2, 8.

Штамм М 139 хорошо размножается в 45 перевиваемой культуре ткани СПЭВ, вы,зывая четкую деструкцию клеток на

4-5 сут. Пик накопления инфекционной и гемагглютинирукщей активности отмечается на 5-ые сутки. Титр вируса культуральной жидкости на 5-ые сутки инкубации при 37 С составил 5,2 (в log LD 50/0,03). Штамм М 139 обладает высокой бляшкообразующей активностью, под агаровым .покрытием титр по БОЕ на культуре СПЭВ: 8,99 5 log БОЕ/мл. Титр по БОЕ коррелирует с показателем интрацеребральной активности на мышах. Бляшки появляются на 4-ые сутки, гетерогенные

S - признак 1,0-2,5 мм. 60

Антиген, полученный из данного штамма, имеет максимальный титр

s РГА до 1:10240.

Штамм М 139 в реакции биологической нейтрализации нейтрализуется 65 гомологичными сыворотками и сыворотками к штаммам вируса клещевого энцефалита "Софьин", "Хабаровский-17", "Абсеттаров". Индексы нейтрализации штамма М 139 с гомологичными сыворотками 3,3-3,0, с сыворотками к штамму "Софьин" 4,0-3,1 с сывороткой к штамму "Хабаровск-17" 2,9-2,9; с сывороткой к штамму "Абсеттаров"

2 8-2,7, Антигенные свойства штамма изуче- . ны в перекрестной РТГА, PCK и в кинетической РТГА. Штамм М 139 обладает более высокой антигенной активностью по сравнению со штаммом "Софьин", быстрее связывается с антителами и в 2-8 раз превышает по титру коммерческий антиген.

В перекрестной РТГА с использованием гипериммунных сывороток выявлено тесное антигенное родство с западными и восточными штаммами вируса клещевого энцефалита и более высокая активность штамма М 139, который выявил антитела в сыворотках в 2-8 раза в более высоких титрах.

Кроме того, выявлена хорошая активность антигена из штамма М 139 в РСК. В перекрестной РСК исследовали по б гипериммунных крысиных сывороток к штаммам М 139 и "Софьин"

Средняя геометрическая титров антител в сыворотках при использовании штамма М 139 4 4; штамма "Софьин"

4,3 <средняя геометрическая логарифмов с основанием 2) В РСК с гипериммунной сывороткой кроликов к штамму "Софьин" титр при использовании антигена из штамма М 139 1:32, штамма "Софьин" — 1:16.

Пример 1. Пассирование вирусов. Беспородных белых мышей весом

6-7 r заражают в мозг по 0,03 мл вирусной суспензни штамма М 139. При появлении выраженных параличей на

4-5 сут мишей забивают, извлекают асептично мозг и готовят 10%-ную суспензию мозговой ткани путем растирания мозга в ступке с добавлением физиологического раствора. Полученные мозговые взвеси центрифугируют при 1000-1500 o6/Mèí в течение

10 мин. Надосадочную взвесь отсасывают и используют для заражения партии мышей, инфицированный мозг которых используется для приготовления антигена.

Приготовление антигенов.

Из полученных инфицированных мозгов готовят 10%-ную взвесь на ббратном буферном растворе с рН

9,0 и экстрагируют 24 ч при +4 C, затем взвесь центрифугируют на холоде при 9000,об/мин в течение

30 мин. Надосадочную жидкость обрабатывают протаминсульфатом из расчета 6-9 мг сухого препарата на 10 мл вирусной суспензии. Полу1071634 чинную взвесь помещают в холодильник при +4 С на 30 мин и затем центрифугируют 15 мин при 2000 об/мин также на холоде. Полученную надосадочную жидкость — антиген инактивируют бетапропиолактоном 1:1000 в течение 30 мин при комнатной температуре (помешивая взвесь через

5-10 мин). Действие бетапропиолактона (через 30 мин ) гасят 14%-ным гипосульфитом натрия (на 10 мл ° 10 антигена — 1,2 мл 14%-ного гипосульфита). Полученные таким образом антигены из мозга мышей методом боратносолевой экстрации, обработанные протаминсульфатом, инактивированные бетапропиолактоном, прошедшие контроль безвредности на беспородных белых мышах, были испольСыворотки

Средние титры

Сравнение по критерию

Стьн дента

Доверительные границы

Антигены

Р 139

Р 139/ Софьин"t

6,52

1:37+1:1,2 1:25-1:52

Доноров

1:7 1:1,2

1:4,6-1:9,6

Коммерческий

Привитых 1:57+1:1,07 1:50-1:64

Р 139

Р 139/"Софьин"t=

5 8

1:16+1:24 1:10-1:24

Коммерческий

Р 139

Иммунные 1:406+1:14 1:198-1:833 Р 139/"Софьин"t"

2,91

1:100 1:14 1:55-1:184

Коммерческий вороток — в РТГА показывают, что процент положительных результатов при титровании сывороток с антигеном Р 139 достоверно выше, чем с коммерческим антигеном (р < 0, 01 ) .

Использование штамма Р 139 виру- са клещевого энцефалита для приготовления диагностикума позволяет повысить антигенную и биологическую активность диагностикума и тем саьнм повысить точность диагностики.

Составитель М. Бондарева

Редактор И. Товтин Техред М.Тепер Корректор A ° Ильин.

Заказ 45/20 Тираж 522 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Результаты распределения сыворо- 45 ток по титрам антител в РТГА с антигенами штаммов Р 139 и коммерческого "Софьин" говорят о том, что процент сывороток с более высокими титрами (1:40 и выше) отмечается с антигеном Р 139.

Результаты антигенной активности диагностикума штамма Р 139 в сравнении с коммерческим диагностикумом штамма "Софьин" при титровании сы55 зованы в РТГА в сравнительном титровании четырех групп сывороток. Были исследованы сыворотки доноров из

Хабаровска, используете для приготовления иммуноглобулинов, сыворотки людей, привитых очищенной, концентрированной вакциной против клещевого энцефалита/ снворотки больных с диагнозом клещевой энцефалит и типоспецифические иммунные сыворотки. В опыте, кроме экспериментальных серий антигена из штамма Р 139, был использован диагностикум клещевого энцефалита, штамм "Софьин" сер. 59.

Полученные результаты представлены в таблице (средние титры антител при испытании различных диагностикумов).