Способ хранения культур тионовых ацидофобных бактерий

 

СПОСОБ ХРАНЕНИЯ КУЛЬТУР ТИОНОВЫХ АЦИДОФОБНЫХ БАКТЕРИЙ, предусматривающий посев суспензии бактерий в пробирку с -питательной средой, содержащей тиосульфат натрия в качестве источника энергии, источник азота, минеральные соли, дрожжевой экстракт, о т л и ч а ющ и и с я тем, что, с целью увеличения длительности хранения, а также упрощения способа, в питательную среду вводят 1,0-1,3% выщелоченного агара, а посев осуществляют путем помещения суспензии бактерий на дно пробирки с последующим заполнением ее питательной средой на с высоту 8-10 см, после чего перемешивают питательную среду с суспен (Л зией бактерий.

„„su„„1074900 А

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

3Ш С 12 Х 1 04

Н ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3426799/28-13 (22) 23.04.82 (46) 23.02.84. Бюл. Р 7 (72) Э.В. Коваленко, В.И.. Семенова и П.Т. Иалахова. (71) Институт микробиологии

AH Узбекской CCP (53) 576.01 (088.8) (56) 1 ° Авторское свидетельство СССР

Р 591507, кл.С 12 N 1/04, 1976.

2. Каравайко Г.И., Кузнецов С.И., Голомзик A.È. Роль микроорганизмов в выщелачивании металлов из руд.

М., "Наука", 1972, с. 247. (54) (57) СПОСОБ ХРАНЕНИЯ КУЛЬТУР

ТИОНОВЫХ АЦИДОФОБНЫХ БАКТЕРИЙ, предусматривающий посев суспензии бактерий в пробирку с питательной средой, содержащей тиосульфат натрия в качестве источника энергии, источник азота, минеральные соли, дрожжевой экстракт, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью увеличения длительности хранения, а также упрощения способа, в питательную среду вводят 1,0-1,3% выщелоченного агара, а посев осуществляют путем помещения суспензии бактерий на дно пробирки с последующим заполнением ее питательной средой на высоту 8-10 см, после чего перемешивают питательную среду с суспензией бактерий.

1074900

Изобретение относится к микробиологии, в частности к способам хранения культу> бактерий.

Известен способ хранения микроорганизмов, включающий помещение их в столбик питательной среды, содержащей 0,2Ъ агара„ на глубине

2,5-3 см от поверхности столбика (1"

Однако данный способ не пригоден для хранения культур тионовых ацидофобных бактерий, так как элементарна.я сера, образуемая при окислении энергетического субстрата,быстро окисляется, что отрицательно сказывается на выживаемости бактерий;

Кроме того, посев культурь: проводят уколом микробиологической иглой в столбик питательной средь>,что совершенно не подходит для хранения тионовых бактерий, так как укол способствует разрыву агара и быстрому соприкосновению воздуха с молекулярной Я (продукт метаболизма), что приводит к затвердеванию и высыханию серных колоний, покрытых элементарной серой, а также не обеспечивает образование одиночных колоний необходимых для сохранения и последующего выделения чистых культур.

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущ-,:ости и достигаемом> эффекту является способ .хранени,. культур тионовых ацидофобных бактерий, предусматривающий посев суспен":,ии бактерий в .-.робирку с ггитательной средой, содержашей тиосульфат натрия в качестве источника энергии, источник азота, минеральные соли, дрожжевой экстракт.

Сохранение чистых культур r-èñtoвых бактерий осуществля>вт в жидкой питате>льной среде„ причем нужно делать пересевы не позднее как через

7-10 дн. 2).

К недостаткам способа непродолжительность хр"-нени =. и сложно:."ть осуществления.

Целью изобре",.ения является увели чение длитель -ости хранения, а. также упрощение сг:особа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу хранения культур тионовь>х ацидофобных бактерий, предусматривающему посев суспензии бактерий в пробирку с гитательнoI средой, содержащей тиосульфат натрия в качестве источника энергии, источник азота, минеральные соли, дрожжевой экстракт, в питательную среду вводят 1,0-1,3Ъ выщелоченного агара, а посев осуществляют гутем помещения суспензии бактерий на дна пробирки с последующим заполнением ее питательной средой на. высоту,8,-10 см, после

I . чего перемешив ают питат ель ную среду с суспензией бактерий.

Способ осуществляют следующим образом.

При хранении тионовых бактерий

5 в столбике агаризованной питательной среды высотой до 5 см происходит значительная гибель бактерий вследствие обезвоживания. В этом случае отмирание клеток может быть также следствием концентрации продуктов метаболизма и солей.

Более высокий слой средь> (1015 CM) не обеспечивает максимальной физиологической активности сох35 раняемой популяции. Активность культуры, определенная по окислению тиосульфата в жидкой среде Баалсруда, через б мес хранения составляет 9,2Ъ за 120 ч.

Максимальная Физиологическая активность бактерий достигается при хранении их в столбике питательной среды высотой 8-10 см.

После хранения культуры в течение б мес. активность окисления тиосульфата за 120 ч составляет 90 o-.

Оптимальное содержание агара в питательной среде составляет 1,01,3Ъ.

Питательная среда с содержанием агара меньше 1; является полу>кидкой, что отрицательнс сказывается на вы:,,иваемости и активности бактерий.

Содержание агара выше „ЗЪ уса коряеf высыхание питательной среды, приводит к растрескиванию агара,что спсссбствует проникновению воздуха, зна =ителвному окислению средь. и сокращенлю сроков хранения культу40 ры. За б мес. хранения при содержании агара в среде 1,4 — 2,0Ъ выживает

12,3Ъ тионсвых бактерий.

П р и м = p 1. Модифицированную питательную среду Баалсруда готовят на дистиллированной воде, содержа> > щей,, Ъ: выщелоче нный агар 1, 0

Ма Я ", 2* 5870 0 25 я14С1 0 01 „" срсды исключается Е (С;. Реакцию среды устанавливают до р*; б,9. дну 5--ти сутс . :ую кслонию

Т) О,>3; 1 luS ". " - О i ruS сОВЕВжащую " 0 клеток с =а ..ки Пет-., перенссят .|а =-. утреннюю стенку стерильгной проб-,рки; тщafeльно растир» от гонкой стеклянной палочкой с сплавлен;ягм концом и заливаю= 1 мч стерил.= нси воды. И3 этой суcïeíзии приготовляют десятикратньe pasÿeäå60 ния,всего семь, и четь>ре последH>.>; 3aливают агаризсванной средой на высоту crîëáêêà S см, которую тщательно перемешивают.

Посевы культивируют в термостате при 30 С в "å÷åíèå 5-7 сут,после

1074900

Сроки хранения, мес

) 1 I I I

Среда

Вид

Способ хранения

Т. thioparus

Баалсруда (ми неральная среда) Не хранится, погибает

Известный (контроль) Т, thioparus To же 100

100 100

100 100 90

Предлагаемый

Известный (контроль) Т. intermedius

Не хранится, погибает

То же 100 100 100 100 100 90

Т. intermed1us

Предлагаемый

Составитель В. Голимбет

Редактор Н. Рогулич Техред Т.фанта корректор И. Эрдейи

Заказ 458/24 Тираж 522 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная,4 чего их просматривают под малым увеличением микроскопа и оставляют о для хранения в холодильнике при 7 С.

Пример 2. Модифицированную среду Баалсруда, аналогичную применяемой для культуры Т. thioparus, используют для культивирования

Т. intermedius, но с добавлением

Баалсруда

+0,2Ъ дрожжевого экстракта

Таким образом, предлагаемый способ по сравнению с известным экономичен, прост, доступен и позволяет сохранить в течение длительного периода времени высокую .ак0,2Ъ дрожжевого экстракта. Хранение культуры и способ его применения аналогичен описанному для

Т. thioparus (пример 1).

Данные по сохранению тионовых бактерий и их физиологической активности представлены в таблице.

Окисление тиосульфата за 120 ч,% тивность и сохранность культур, а также существенно экономит.. рабочее время исследователя и расход химических реактивов.