Способ очистки галофильных водорослей от сопутствующих им бактерий

 

СПОСОБ ОЧИСТКИ ГАЛОФИЛЬНЫХ ВОДОРОСЛЕЙ ОТ СОПУТСТВУЮЩИХ ИМ БАК- , ТЕРИЙ, включающий посев культуры водорослей на агаризированную среду, о т л и ч Ъ ю щ и йен тем, что, с целью повьойения эффективности способа, посев культуры водорослей проводят последовательно на агаризированную среду, содержащую поочередно 5 и 20% хлористого натрия.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ .РЕСПУБЛИК,SU„„,1076035 А

3(ЯЭ 01 13 00 С 12 N 1/12

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДДЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTMA (21) 3515796/30-15 (22) 20.11.82 (46) 28.02.84. Бюл. Р 8 (72) Л.И.Ленова, N.ß.Ðàòóøíàÿ и Е.В.Борисова (71) Институт ботаники им.Н.Г.Холод. ного (53) 639.64(088.8) (56) 1. Кордюм В.А., Лазуркевич 3.В. и Жарова Л. Г. Проста методика nepeaiрки бактерхолог1чноi чистоти культур однокл1тинних водорослей, а також бактер1альних мутант1в. Микробиология. Т . 24, вып. 4, Киев, 1962, с. 61-63 (прототип) ° (54)(57) СПОСОБ ОЧИСТКИ ГАЛОФИЛЬНЫХ

ВОДОРОСЛЕЙ Ol СОПУТСТВУЮЩИХ ИМ БАК- .

ТЕРИЙ, включающий посев культуры.водорослей на агаризированную среду, отличающийся тем, что, с целью повышения эффективности способа, посев культуры водорослей проводят последовательно на агаризированиую среду,содержащую поочередно 5 и 20% хлористого натрия.

10?6035

Изобретение относится к микробиологии, а именно к получению бактериально чистых культур галофильных водорослей, которые могут быть использованы при биохимических исследованиях водорослей.

Наиболее близок к предлагаемому способ проверки бактериологической чистоты водорослей, который может быть исполЬзован и для очистки водорослевых культур от сопутствующей микрофлоры, заключающийся в проращивании водорослей на двухслой « ной агариэирован ной среде с последующим отбором незагрязненных бактериями колоний водорослей. Сначала водоросли выращивают на минеральной агаровой пластинке, которую затем переносят на пластинку с мясо-пептонным агаром. Это обеспечивает диффузию органических веществ, необходимых для роста бактерий, в минеральную среду и способствует выявлению отдельных колоний водорослей, не ,окруженных проросшими бактериями f1j.

Недостатком этого способа является то, что он не может быть использован для очистки галофильных водорослей рода Dunaliella, так как этим водорослям сопутствуют бактерии, растущие при различных концентрациях хлористого натрия. Они представлены крайне галофильными бактериями рода Halobacterium, растущими при

12-ЗОВ NaC1 и умеренными — родов

Pseudomonas, Micrococcus, растущими при 3-12% NaCl,а также корнеподобными бактериями, растущими при 1-3t NaCl.

Диффузионного выравнивания концентрации элементов питательных сред, содержащегооя в известном способе, недостаточно для освобождения культур галофильных водорослей от перечисленных групп микроорганизмов.

Кроме низкой надежности в получении бактериально чистых культур этот способ относительно трудоемок и требует определенных навыков.

Цель изобретения — повышение эффективности способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу очистки галофильных водорослей от сопутствующих им бактерий, включающему посев культуры водорослей на агаризированную среду, посев культуры водорослей провоцят последовательно на агаризиро ванную среду, содержащую поочередно

5 и 20% хлористого натрия.

Пример. Исходную популяцию водорослей, подлежащих очистке, рассевают в чашки Петри с 30-40 мп приготовленной на дистиллированной воде агаризованной среды следующего состава, г/л: NaC1 116,0, MgSOp 7 Н О

ВНИИПИ Заказ 559 2 или an атент

35

30

45

S0

50,0; KNO 2,5," К НРО4, 0,2, FeSOyi

О, 01; Трилон В О, 016, глюкоза 2, О, дрожжевой экстракт 0,1, пептон 0,2; агар-агар 15,0, микроэлементы мг/л:

Co(N0@ ) ° 6Н О 0,06 CuSO< 7 Н О 0,03

ZnSO4 7 НуО 0,12) MnSOq 7 Н О вЂ” 3,00;

H BOg 4,20, (NHy)s Мо 024 4 Н О 1,50, при РН среды 6-7.

Чашки Петри инкубируют в люминостате при 20-30 С и круглосуточном освещении (5-6 тыс.лк) до появления четко сформированных, видимых визуально колоний водорослей.

В дальнейшем полученный водорослевый материал рассеивают на агаризированную среду токо же состава, но чередуя концентрацию Nacl в питательной среде 50 г/л, что составляет

5В, и 200 г/л, т.е. 20%. Сначала водоросли рассевают на среду, содержащую 20% NaC1, и инкубируют в люминостате в течение 10-15 сут, затем отобранные с помощью лупы выросшие водорослевые колонии пересеивают на ту же среду, но с 5В NaCl и продолжают,инкубировать в люминостате до появления сформированных колоний водорослей. Такой рассев с чередованием концентраций NaC1 в среде продолжают до получения бактериально частых культур. Галофильные водоросли устойчивы к резким перепадам солености и растут в широком диапазоне концентрации ИаС1 в среде (5-20%), в то время как сопутствующие бактерии, представленные крайними умеренными и слабыми галофилами, растут в более узких интервалах концентрации хлористого натрия в среде (соответственно 12-30, 3-12 и 1-3%) и не выживают при их резкой смене.

В исходной культуре Dunaliella

viridis 42 количество бактерий составляло 3,2млн.кл,/мл или 0,9 млн.кл. на 1 млн.водорослевых клеток, а среди бактерий-спутников обнаружено три вида, тогда как в исходной культуре D. asymmetri ca 146 - соответственно

30 О, О млн . кл. /мл, 75, О мпн . кл. в пере счете на 1 млн. кл. в пересчете на 1 млн. водорослевых клеток и один вид бактерий.

В результате проведенной очистки по предлагаемому способу бактериальное загрязнение не было обнаружено у D.asymmetrica 146 после 5 пересевов, а у D.viridis 42 — после 7.

Таким образом, последовательно перенося водоросли со среды, содержащей 20% NaC1, на среду с 5% NaC1 и наоборот, получают культуры водорослей D.viridis 42 и D.asymmetrica

146, освобожденные от сопутствующих бактерий. Количество пересевов определяется не столько общим количеством сопутствующих бактерий, сколько их видовым разнообразием.

Тираж 722 Подписное жгород,ул. роектная, .