Способ определения окисления-ферментации микроорганизмами углеводов
1. СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОКИСЛЕНИЯ-ФЕРМЕНТАЦИИ МИКРООРГАНИЗМАМИ УГЛЕВОДОВ путем посева чистой культуры исследуемых микроорганизмов параллельно в две пробирки с питательной средой, содержащей источник азота, углевод, хлористый натрий, фосфорнокислый двузамещенный 1 калий, бромтимоловый голубой и дистиллированную воду, с последукяцим созданием в одной, из пробирок анаэробных условий, I инкубированием посевов и определением окисления-ферментации по изменению окраски среды, о т л и ч а ю m и йс я тем, что, с целью ускорения и повышения точности способа, исследуемую культуру высевают в питательную среду, дополнительно содержащую хлористый кальций, сернокислый магний и сернокислое железо, а в, качестве источника азота она содержит никотиновую кислоту при следующем количественном соотношении ингредиентов, мае.%: 0,001-0,0015 Хлористый кальций 0,0001-0,0005 Никотиновая кислота 0,01-0,015 .Сернокислый магний 0,001-0,002 Сернокислое железо (Л Фосфорнокислый 0,05-0,055 двузамещенный калий 0,55-0,65Хлористый натрий Углерод 0,5-1,0 0,008-0,01 Бромтимоловый голубой Дистиллированная Остальное вода :о 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для создания анаэробных условий используют 1,2-1,5%SI ный водный агар-агар.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИК
3(59 С 1201 04
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ИОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3260768/28-13 (22) 10 ° 03.81 (46) 07.05,84. Бюл. Р 17 (72) П,П.Литовченко, В.А.Знаменский и Н.П.Чернобровый (71) Киевский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови и Киевский государственный институт усовершенствования врачей (53) 576.8.093.1(088.8) (56) 1. Лабинская A.Ñ. Микробиология с техникой микробиологических иссле-дований.. N., "Медицина", 1978, с.352.
2, Hugh R., Leifson Е. The taxonomic signification of fermentative
vorsus oxidat,ive metabolism of carbo"
hydrates by vari ons gram negative
bacteria. -"Ваcteriology". 1953, ч. 66, М 1, р. 24-26 (прототип). (54)(57) 1. СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОКИСЛЕНИЯ-ФЕРМЕНТАЦИИ МИКРООРГАНИЗМАМИ
УГЛЕВОДОВ путем посева чистой культуры исследуемых микроорганизмов параллельно в две пробирки с питательной средой, содержащей источник азота, углевод, хлористый натрий, фосфорнокислый двузамещенный калий, бромтимоловый голубой и дистиллированную воду, с последующим созданием в одной, ! из пробирок анаэробных условий,,инкубированием посевов и определением окисления-ферментации по изменению окраски среды, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью ускорения и повышения точности способа, исследуемую культуру высевают в питательную среду, дополнительно содержащую хлористый кальций, сернокислый магний и сернокислое железо, а в качестве источника азота она содержит никотиновую кислоту при следующем количественном соотношении ингредиентов, мас.%:
Хлористый кальций 0,001-0,0015
Никотиновая кисло- 0,0001-0,0005 та .Сернокислый магний 0,01-0,015
Сернокислое железо 0,001-0,002
Фосфорнокислый двузамещенный 0,05-0,055 калий
Хлористый натрий 0,55 0,65Углерод 0,5-1,0
Бромтимоловый 0,008 0,01 голубой
Дистиллированная вода Остальное
2. Способ по п. 1, о т л и ч а юшийся тем, что для создания анаэробных условий используют 1,2-1,5%ный водный агар-агар.
1090717
Изобретение относится к микробиологии и касается определения окисления-ферментации микроорганизмами углеводов.
Известен способ определения фер" ментации микроорганизмами углеводов путем посева чистой культуры на цветные среды Гисса с углеводамиГ .
Однако этот способ не позволяет .одновременно определять окислениеферментацию углеводов. 10
Известен также способ определения окисления-ферментации .микроорганиз-. мами углеводов путем посева чистой культуры исследуемых микроорганизмов параллельно в двепробирки с питатель- 15 ной средой, содержащей источник азо-. та, углевод, хлористый натрий, фосфорнокислый двузамещенный калий, бромтимоловый голубой и дистиллированную воду, с последующим созданием 20 в одной иэ пробирок :анаэробных условий, инкубированием носевов и определением окисления-ферментации по изменению окраски среды (2) .
Однако известный способ длителен и не обеспечивает высокой точности.
Целью изобретения является ускорение и повышение точности способа.
Цель достигается тем, что согласно способу определения окисленияферментации микроорганизмами углеводов путем посева чистой культуры исследуемых микроорганизмов параллел но в две пробирки с питательной средой, содержащей источник азота, углевод, хлористый натрий, фосфорно- 35 кислый двуэамещенный калий, бромтимоловый голубой и дистиллированную воду, с последующим созданием в одной иэ пробирок анаэробных условий, инкубированием посевов и определением 40 окисления-ферментации по изменению окраски среды, исследуемую культуру высевают в питательную среду, дополнительно содержащую хлористый кальций, сернокислый магний и сернокис- 45 лое железо, а в качестве источника азота она содержит никотиновую кислоту при следующем количественном соотношении ингредиентов, мас..В:
Хлористый кальций 0,001-0,0015
Никотиновая кисло 50 та 0,0001-0,0005
Сернокислый магний 0,01-0,015
Сернокислое железо 0,001-0,002 55
Фосфорнокислый двуэамещенный 0,05-0,055 калий
Хлористый нат- 0,055-0,65 рий 60
Углевод 0,5-1,0
Бромтимоловый голубой 0,008-0,01
Дистиллированная вод а Остальное
ПРичем для создания аназробных условий используют 1,2-1,5%-ный водный агар-агар. .Способ осществляется следующим образом.
Чистую культуру микроорганизмов засевают параллельно в две пробирки с питательной средой, полученной путем растворения в дистиллированной воде исходных компонентов, и устанавливают РН 7,2. Среду трехкратно дробно стерилизуют текучим паром при 100 С по 10 мин или автоклавируют разово при 0,5 атм в течение
15 мин, после чего разливают по 0,5
1,0 мл в пробирки размерами 0,81,0r10,0 см и хранят под ватномарлевыми пробками при 20 С не более чем 15 дн. После засева среды исследуемым микроорганизмом чистой культурой в две пробирки, в одной из них создают анаэробные условия наслоением расплавленного 1,2-1,5Ъного водного агар-агар (РН 7,2) до высоты агарового столбика не более
1,5 см,. причем температура агара, наслаиваемого на среду, не должна превышать 45 — 55 С. Посевы инкубируют в течение 5 ч и определяют окисление субстрата по изменению травянистой окраски среды в пробирке без слоя агар-агар на светлозеленую (лимонную), при отсутствии изменения окраски среды в пробирке с изолирующим слоем из агар-arapa..
Ферментацию определяют по аналогичному изменению окраски и в пробирке, содержащей изолирующий слой иэ агар-агара.
1I р и м е р 1. Использование способа для определения окисления глюкозы неферментирующими грамотрицательными бактериями. Чистую культуру микроорганизма Р.аеги81пояа засевают параллельно в две пробирки размерами 0,8-1,0к10,0 см с питательной средой, разлитой по 0,5 мл, простерилизованной паром при 100 С трехкрато но по 10 мин..
Среда имеет состав, мг/л: хлористый кальций 10,0; никотиновая кислота
1.,0;. сернокислый магний 100,0; сернокислое железо 10,0; фосфорнокислый двузамешенный калий 500,0; хлористый натрий 5500,0; глюкоза 900,0; бромтимоловый голубой 100,0; дистиллированная вода остальное.
После засева в одну из пробирок наслаивают расплавленный 1,2%-ный агар-агар (рН 7,21 с температурой
45ОС в виде столбика высотой 1,0 см, инкубируют при 37 С в течение 5 ч, в пробирке беэ изолирующего слоя иэ агар-arapa травянистая окраска среды к этому времени изменилась на лимонную, а в пробирке с изолирующим слоем изменения окраски не произошло
1090717
Составитель Г.Смирнова
Редактор Н.Джуган Техред T.éàòo÷êà Корректор g. Билак
Заказ 3015/23 Тираж 522 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5
Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная,4
Заключение: P. aeruginosa окисляет и не ферментирует глюкозу.
Пример 2. Выявление окисления-ферментации маннита культурой
Staphylococcus aureus. Для обнаружейия данных свойств используют. среду, содержащую следующие .вещества, мг/л: хлористый кальций 10,0; никотиновая кислота 5,0; сернокислый магний
120,0; сернокислое железо 12,0; фосфорнокислый двузамещенный калий 10
550,0; хлористый натрий á500,0; маннит 1500,0; бромтимоловый голубой
100,0;вода дистиллированная остальное (рН 7,2).
ПОСЕВ ЧИСтсй КуЛЬтурОй Staph. aure-(5
us и режим учета осуществляют в соответствии с примером 1. В пробирке с изолирующим слоем через 3 ч, а в пробирке без изолирующего слоя через 4 ч окраска среды приобрела лимонный цвет, что расценено как спо собность микроорганизма ферментировать и окислять маннит.
Пример 3. Сравнение способов определения окисления-ферментации углеводов чистой культуры P. aerugi—
noаа при условии создания анаэробных
УФловий с помощью агар-arapa (предлагаемый способ) и вазелина (известный) .
Чистую культуру микроорганизма засевают параллельно в три пробирки, содержащие 0,8 мл питательной среды с количественным составом ингредиентов,приведенным в примере 1, простерилизованной при 0,5 атм в течение 15 мин. После посева первую пробирку инкубируют без изолирующего слоя, вторую с изолирующим слоем из агар-агара, третью с изолирующим слоем из стерильного вазелина в течение 5 ч. В пробирке без изолирую-, щего слоя через 4 ч .травянистая окраска среды изменилась на лимонную, а через 5 ч аналогичное изменение окраски среды наступило в пробирке под слоем вазелина. В пробирке, где изолирующим слоем был агар-агар окраска:среды не изменилась ° Таким образом, изменение окраски среды под слоем вазелина возникло в реэуль. тате его расщепления с накоплением кислых. продуктов, что привело бы к ошибочному заключению о ферментации глюкозы, если бы не принимать во внимание данные, полученные в пробирке под слоем агарагара.
Применение предлагаемого способа позволяет в 100% случаев дифференцировать и идентифицировать: бактерии по тесту "окисление-ферментация углевода" уже через 5 ч с момента посева.
