Способ определения действия антибиотика на микроорганизмы

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДЕЙСТВИЯ АНТИБИОТИКА НА МИКРООРГАНИЗМЫ путем инкубирования исследуемых микроорганизмов в питательной среде с различными концентрациями антибиотика и выявлением минимальной бактериостатической концентрации антибиотика, отличаю щи йс я тем, что, с целью повышения точности определения действия антибиотика на внутриклеточно паразитирзтощие патогенные микроорганизмы, дополнительно определяют суббактериостатическую концентрацию антибиотика , параллельно высевают исследуемый материал из проб с суббактериостатической концентрацией антибиотика и контрольной на питательную среду, содержащую 1-25 мкг/мл лизос В цима, инкубируют посевы и определяют действие антибиотика по величине снижения концентрации лизоцима в среде с суббактериостатической концентрацией антибиотика по сравнению с контролем. О СО О) 00

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (191 (Ш

С 12 Q 1/04

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3567658/28-13 (22) 22.03.83 (46) 15.06.84. Бюл. ((22 (72) О.В. Бухарин, Б.Я. Усвяцов, Е.И. Лосин, A.Ï. Малышкин, H.Â. Немцева, В.В. Сидоров, Л.А. Первушина и К.Е. Федосеева (71) Оренбургский государственный медицинский институт (53) 576.8.093.1(088.8) (56) 1. Справочник по микробиологическому и вирусологическим методам исследования. Под ред. M.Î. Биргера.

M. "Медицина", 1982, с. 180-181

2. Навашин С.N., Фомина И.П.

Справочник по антибиотикам. M., "Медицина", 1974, с. 39 ° (54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДЕЙСТВИЯ АНТИБИОТИКА НА МИКРООРГАНИЗМЫ путем инкубирования исследуемых микроорганизмов в питательной среде с различными концентрациями антибиотика и выявлением минимальной бактериостатической концентрации антибиотика, о т л и ч а ю щ и й— с я тем, что, с целью повышения точности определения действия антибиотика на внутриклеточно паразитирую- щие патогенные микроорганизмы, дополнительно определяют суббактериостатическую концентрацию антибиотика, параллельно высевают исследуемый материал из проб с суббактериостатической концентрацией антибиотика и контрольной на питательную. среду, содержащую 1-25 мкг/мл лизоцима, инкубируют посевы и определяют действие антибиотика по величине снижения концентрации лиэоцима в среде с суббактериостатической концентрацией антибиотика по сравнению с контролем.

1097678

Пример 1. У больного И., 2 мес..иэ клеток слущенного эпителия был выделен внутриклеточно паразитирующий возбудитель (салмонелла).

Методом серийных разведений опреде.лили чувствительность к антибиотику — гентамицину в концентрации

10 мкг/мл. После этого определили суббактериостатическую концентрацию гентамицина — 5 мкг/мл. Подготовили два ряда чашек с агаровой средой, в которую ввели лизоцим в концентрациях 1-25 мкг/мл., причем каждая чашка отличалась от последующей на

1 мкг/мл. На чашки первого ряда посеяли салмонеллы из контрольной порции, на чашки второго ряда - салмонеллы из порций е суббактериостатической концентрацией антибиотика .(5 мкг/мл). Чашки инкубировали в термостате 24 ч, выросшие из них колонии возбудителя убили парами хлороформа, затем залили питательной средой с индикаторным штаммом Micrococcus lysodeikticus. Инкубировали повторно в течение 24 ч, после чего определили наибольшие концентрации лизоцима, инактивированного салмонеллами в контроле и опыте. В контСпособ осуществляют следующим образом, Определяют минимальную бактериостатическую концентрацию антибиотика для исследуемого возбудителя, для чего готовят в пробирках методом серийных разведений антибиотик в концентрациях 100-0,01 мкг/мл. Го55 товят контрольную пробирку с бульоном без антибиотика. В ряд опытных пробирок и контрольную засевают исследуемый возбудитель. Инкубируют

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается определения чувствительности патогенных микроорганизмов к антибиотикам.

Известен способ определения дей- 5 ствия антибиотика на микроорганизмы с помощью дисков, пропитанных раствором антибиотика (1 1.

Известен также способ определения действия антибиотика на микроорганизмы путем инкубироваиия исследуемых микроорганизмов в питательной среде с различными концентрациями антибиотика и выявлением минимальной бактериостатической концентрации

15 антибиотика 2 3.

Однако известные способы не обеспечивают высокой точности определения действия антибиотика на внутриклеточно паразитирующие патогенные микроорганизмы.

Целью изобретения является повышение точности определения действия антибиотика на внутриклеточно паразитирующие патогенные микроорганизмы.

Зта цель достигается тем, что согласно способу определения действия антибиотика на микроорганизмы путем инкубирования исследуемых микроорганизмов в питательной среде с различными концентрациями антибиотика и выявлением минимальной бактериостатической концентрации антибиотика, дополнительно определяют суббактериостатическую концентрацию антибиотика, параллельно высевают исследуемый материал из проб с суббактериостатической концентрацией антибиотика и контрольной на питательную среду, содержащую I 40

25 мкг/мл лизоцима, инкубируют посевы и определяют действие антибиотика по величине снижения концентрации лизоцима в среде с суббактериостатической концентрацией анти- 45 биотика по сравнению с контролем. в течение 18-24 ч, после чего определяют минимальную бактериостатическую концентрацию антибиотика. Дополнительно определяют суббактериостатическую концентрацию антибиотика, затем производят посев возбудителя .из порции с суббактериостатической концентрацией и из контрольной порции на ряд сред, содержащих лизоцим в концентрациях 125 мкг/мл. На чашки первого ряда высевают исследуемую культуру возбудителя из контрольной пробирки (без антибиотика), На чашки второго ряда высевают исследуемую культуру из опытной пробирки (с антИбиотиком). Все чашки инкубируют в термостате 18-24 ч, после чего выросшие на чашках колонии возбудителя убивают парами хлороформа и заливают питательной средой с индикаторным штаммом Micrococcus lysodeikticus.

После 18-24 ч инкубации определяют наибольшую концентрацию лизоцима, инактивированного возбудителем в контроле и опыте. Сравнивают эти показатели друг с другом и при снижении концентрации на 20-80Х оценивают антибиотик как эффективный.

1097678

Пример 6. У больной Е.выделена шигелла. Проверка по методу серийных разведений (см. пример 1) показала чувствительность возбудителя к ампициллину. Проверка активности предлагаемым способом показала, что концентрация инактивированного лизоцима в контроле составила

18 мкг/мл, в опыте 4 мкг/мл. Снижение составило 80%, .что подтвердило активность ампициллина по отноше ию к возбудителю. Лечение оказалось эффективным.

Всего обследовано 214 больных салмонеллезом, дизентерией, гонореей, при этом выделено 88 штаммов возбудителей устойчивых к антибиотикам ITo методу серийных разведений.

При проверке предлагаемым способом только 60Х этих штаммов оказались устойчивыми, а в 40Х случаев антибиотики оценены как эффективные.

Использование предлагаемого спо- соба повышает точность оценки на 40Х, Г. Смирнова ьма

Корректор А. Тяско

Тираж 522 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 4152/24

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4 роле определили 6 мкг/мл, в опыте

6 мкг/мл. Изменений в концентрации лизоцима не произошло. Антибиотик оценен как неэффективньп».

Клинически подтверждено, что ген- 5 тамицин в этом случае оказался неэффективным. У больного на протяжении длительного времени сохранялся частый жидкий стул с примесью зелени и слизи до 10-11 раз в сутки.

Пример 2. У больного A., 17 лет, из биоптата выделен внутриклеточно паразитирующий возбудитель (шигелла). Проведенная таким же образом, как в примере 1, проверка действия антибиотика — тетрациклина на возбудитель по методу серийных разведений показала его нечувствительность, Параллельно была проведена оценка действия антибиотика предлагаемым способом.

Величина концентрации инактивированного лизоцима в контроле составила 8 мкг/мл, в опыте 5 мкг/мл.

Снижение составило 38Х, что позволило оценить тетрациклин эффективным. Оценка подтверждена клинически.

Больной. выписан здоровым через

18 дней после начала лечения.

Пример 3. У больной К., 30

26 лет, из лейкоцитов гнойного отделяемого уретры был выделен внутриклеточно паразитирующий возбудитель — гонококк, который по методу серийных разведений оказался чувст- З5 вительным к бициллину (методика примера 1). У больной наблюдалось затяжное течение заболевания. Проверка действия бициллина предлагаемым способом показала, что концентрация 40 инактивированного лизоцима в контроле составила 4 мкг/мл, в опыте

6 мкг/мл. Так как наблюдалось увеличение, а не снижение концентрации лизоцима, антибиотик бициллин в этом 45 случае оценен как неэффективный.

Назначен другой антибиотик.

Пример 4. У больного. Н., 25 лет, была выделена шигелла. Проверка по методу серийных разведений 5О

Составитель

Редактор Л. Веселовская Техред N,Êóç (см. пример 1) показала чувствитель" ность возбудителя к левомицетину.

Проверка предлагаемым способом показала, что концентрация инактнвированного лиэоцима в контроле составляла 9 мкг/мл, а опыте 8 мкг/мл.

Снижение составило 11Х. Антибиотик оценен как неэффективный, что подтверждено клинически. Больной находился на лечении около 4 мес °

Пример 5. У больного M., 11 лет была выделена салмонелла.

Согласно прототипу антибиотик гентамицин активен по отношению к салмонелле. Оценка активности антибиотика по предлагаемому способу (см. пример 1) показала концентрацию инактивированного лизоцима в контроле 8 мкг/мл, в опыте 6 мкг/мл. Снижение составило 25Х. Антибиотик оценен как эффективный. После начала лечения гентамицином у больного нормализовался стул на 4 день. Больной выписан здоровым через 16 дней пос; ле начала лечения.