Люминесцентный способ определения содержания аминофлуоресцеина в флуоресцеинизоцианате

 

№ 115805

Класс 42l, Зав

42l, Заа

C С С Г

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Е. А. Божевольнов

ЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЙ СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ

АМИ НОФЛУОРЕСЦЕИНА В ФЛУОРЕСЦЕИНИЗОЦИАНАТЕ

3аивлено 10 Феврали l958 г. Х 592055 в Комитет по лелам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Флуоресцеинизоцианат является важным микробиологическим красителем. О его качестве при синтезе судят по содержанию в нем аминофлуоресцеина. При гидролизе флуоресцеинизоцианат переходил с аминофлуоресцеин, поэтому для получения воспроизводимых результатов при его применении необходимо знать степень его гидролиза.

Описываемый люминесцетный способ позволяет определить содержание аминофлуоресцеина во флуоресцеинизоцианате и степень гидрслиза последнего.

Способ осуществляют следующим образом.

Приготавливают растворы флу оресцеинизоцианата, аминофлуоресцеина и флуоресцеина с концентрациями 1,0 мг/л и два буфетных раствора со значением рН=1,5 и 12,0.

В пять колбочек наливают по

10 мл первого буферного раствора и в пять других по 10 мл второго буферноro раствора.

В колбочки с кислыми растворами дооавляют 0,20, 0,15, 0,10 и 0,05 мл раствора аминофлуоресцеина, в колбочки со щелочными растворами до оавляют такие же количества флуopecцеинизоцианата.

С помощью монохроматора, при длине волны 520 р,, измеряют относитсльные интенсивности флуоресценции всех растворов (принимая отсчет слепого опыта за нуль). Область максимальной интенсивности флуоресцеинизоцианата находится в пределах 9,0 — 12,0 рН, а максимальная интенсивность развивается при р Н = — 1,4 — 1,5.

При концентрациях этих веществ в соответствующих р астворителях, не превышающих пороговых, при которых начинается концентрационнос тушение, интенсивность флуоресценции пропорциональна их концен-" рацияA1. Из полученных экспериментальных данных находят константы, входящие в формулы определения вы-.o:là и процентного содержания аминофлуоресцеина в флуоресцеинизоцианате.

Для определения выхода флуоресценции флуоресцеинизоцианата в две колбочки наливают по 10 мл щелочного буферного раствора, в одну № 115805

Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Редактор E. Г. Гончар

Информационно-издательский отдел.

Объем 0,17 и. л. Зак. 3043

Подп. к печ. 27.VIII-58 г.

Тираж l500 Цена 25 коп.

Типография Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Петровка, 14. из них добавляют 0,1 мл раствора флуоресцеинизоцианата, в другую— такое же количество раствора флуоресцеина. Измеряют относительные интенсивности флуоресценции и по известной формуле вычисляют величину выхода флуоресценции на флуоресцеинизоцианата.

Для определения процентного содержания аминофлуоресцеина в флуоресцеинизоцианате готовят растворы анализируемого изоцианата в ацетоне с концентрациями 1,0 мгlл и 0,1 мг/л. В две колбочки наливают по 10 мл буферного раствора с рН=

1,5 и в две другие по 10 мл буферного раствора с рН=12,0. В одну из колбочек с кислым раствсром добавляют 0,1 мл испытуемого раствора флуоресцеинизоцианата с концентрацией 1,0 мг/л и такое же количество испытуемого раствора флуоресцеинизоцианата с концентрацией

0,1 мг/л добавляют в буферный раствор с рН=12,0.

В колбочку со щелочным раствором добавляют 0,1 мл раствора флуоресцеина с концентрацией

0,1 мг/л.

Принимая отсчет слепого опыта за нуль, измеряют относительные флуоресценции приготсвленных растворов и из полученных данных по известным формулам находят процентное содержание аминсфлуоресцеина в флуоресцеинизоцианате.

Предмет изобретения

Люминесцетный способ определения содержания аминофлуоресцеина в флуоресцеинизсцианате, о т л ич а ю щи йс я тем, что, с целью определения степени гидролиза флуоресцеинизоцианата, содержание аминофлуоресцеина устанавливают по интенсивности флуоресценции испытуемого образца в щелочной и кислой средах.