Питательная среда для выращивания @ @

 

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ PASTEUHELLA MULTOCIDA, Включающая бульон на основе перевара Хоттингера , отличающаяся тем, что, с целью восстановления вирулентности , она дополнительно содержит моннозу, галактозу, рамнозу и глюкозу при следующем соотношении компонентов, мас.%$ Манноза 0,1-1,2 Галактоза 0,1-1,2 Рамноза 0,1-1,2 Глюкоза 0,1-1,2 Бульон на основе перевара ХоттингераОстальное 9

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТ ИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

МИ) С 12 Н 1 00 1 20

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

llO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИИ И (_#_HPbITHA

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ВХчв г";i w$r ° П

Щр,п,, (р .А (21) 3469799/30-15 (22) 08.07.82 (46) 30.06 ° 84. Бюл,, Р 24 (72) М.A.Ñèäîðîâ, Э,А1Шегидевич, В.B.Ôåäîòîâ и J0,Й.Рустамов (71) ВсесоюзнЬЮ ордена Ленина науч" но-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им.Я.Р,Ко валенко (53) 576.8.093.1(088.8) (56) 1, Arch,ехрег.vet,med,heipkig.

1977, 31, 9 1 бб, 2. Ветеринарные препараты. Под . ред, Д.Ф.Осидзе. И,, "Колос", 1981, с,238 (прототип), „.SUÄÄ 11 О А (54) (57) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ PASTEURRLLA MULTOCIDAq BKJI10чающая бульон на основе перевара Хоттингера, о т л н ч а ю ы а я с и тем, что, с целью восстановления вирулентности, она дополнительно содержит моннозу, галактозу, рамнозу и глюкозу при следукщем соотношении компонентов, мас.%:

Манноза 0,1-1,2

Галактоза 0,1-1,2

Рамноза 0 1-1,2

Глюкоза 0,1-1,2

Бульон на основе перевара Хоттингера Остальное

1100303

Изобретение относится К ветеринарной микробиологии, в частности к получению питательной среды для выращивания Pasteurella multocida, Пастереллез - инфекционная болезнь многих видов .животных, в том 5 числе и птиц, вызываемая отдельными разновидностями Пастерелл.

Для получения диагностических сывороток, а также препаратов специфической йрофилактики пастереллезов сельскохозяйственных животных необходимо наличие штаммов с полноценной антигенной структурой. pasteurella multocida обладает большой степенью изменчивости, что сопровож- 5 дается снижением их иммуногенной активности и вирулентности. В связи с этим представляет важное значение восстановление утраченных пастереллами свойств путем выращивания ик на определенных средах, а получение полноценных питательных сред для культивирования пастерелл является актуальной проблемой.

Известна питательная среда для выращивания P,multocida f13 следую" щего состава:

На< НРО< 12Н>О 32,3

КН РО 1р36 . 10

Г аСЕ 1,19 20

MySOy 7Н О 0,25 1

Глюкоза 6,0 30 л-йргинин, НСР 0,2 1 л-Аспаргиновая кислота

1,6

0 12

12

0,5

35 л-Цистеин л-Глютаминовая кислота 0 15 дл-Серии 0,2 л-Иэолейцин 0,65 л-Лейцин 0,065 л-Фениланин 0,085 л-Тирозин 0,09

Са-пантотенат 0,002

Никотиноамидная кислота 0,005

Витамин В1 (тиамин НСВ1 0,001

Железо (Е) цитрат 0 001

Оротная кислота 0,015 0,1

В связи со сложной технологией изготовления эта среда не нашла применения в практике.

Известна питательная среда для выращивания P ° multoñida, состоящая иэ бульона на основе перевара Хоттингера (23, 1

0,5

0,5

0 /5.

0 5

45

Однако P,multocida, выращиваемая на этой питательной среде, обладает высокой степенью диссоциации и в процессе длительных пассажей снижает, свои вирулентные свойства, Целью изобретения является получение питательной среды, восстанав- 65 ливающей вирулентность P.multocida различных серологических типов вследствие деблокирования синтеза сахаров в полисахаридной цепи, входящей в состав капсулы бактерий, ответственной за вирулентность.

Поставленная цель достигается тем, что питательная среда для выращивания pasteurella multocida, включающая бульон на основе rrepeaapa

Хоттингера, дополнительно содержит маннозу, галактозу, рамнозу и глюкозу при следующем соотношении компонентов, мас..Ъ:

Манноза 0,1-1,2

Галактоэа 0,1-1,2

Рамноза 0,1-1 2

Глюкоза 0,1-1,2

Бульон на основе перевара Хоттингера Остальное

Способ изготовления среды состоит в следующем.

Берут навески маннозы 10-120 г, галактозы 10-120 г, рамнозы 10-120 г, глюкозы 10-120 r. В каждую навеску в отдельности наливают дистиллированную воду до 100 мл, полученные растворы стерилизуют текущим паром, в колбу наливают по 10 мл растворов маннозы, галактозы, рамнозы и глюкозы и добавляют бульон на основе перевара Хоттингера до 1000 мл.

Пример 1, Питательная среда с содержанием маннозы,.галактоэы, райнозы и глюкозы по 0,1%, бульон на основе перевара Хоттингера - до

100%. При культивировании серологического варианта В Р,multocida на этой среде значения Лд колебались в пределах 170-250 бактерий.

Пример 2, Питательная среда с содержанием маннозы, галактоэы рамнозы и глюкозы по 0,6%, бульон на основе перевара Хоттингера - до

100%, Значения ЛД P,mgltocida сероварианта В колебались в пределах

150-220 бактерий.

Пример 3. Питательная среда с содержанием маннозы, галактозы, рамнозы и глюкозы по 1,2%, бульон на основе перевара Хоттингера— до 100%. Значения ЛД Г,multocida сероварианта В колебались в пределах 200-270 бактерий.

Пример 4. Питательная среда с содержанием маннозы, галактоэы, рамнозы и глюкозы по 0,05%, бульон на основе перевара Хоттингера — до 100%. Значения Лд о выращенной на этой среде культуры серова-. рианта В составили 0,5-1 млн бактерий, Пример 5. Питательная среда с содержанием маннозы, галактозы, рамнозы и глюкозы по 1,8%, бульон

1100303

Питательные среды и значения

ЛД выращенных на них культур (количество микробных клеток) Серологические варианты

Пастерелл

Известная среда прототип) Предлагаемая среда

Е 290 000 + 30000

35+20

Составитель В.Романова

Редактор Т.Веселова ТехредЛ. Коцюбняк Корректор A,Èëüèí

Заказ 4543/23 Тираж 522 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул. Проектная, 4 на основе перевара Хбттингера — до .100%. Культура Р,multocida серова-. рианта В, выращенная на этой среде, имела значение ЛД 1-1,5 млн,бактерий.

Из приведенных примеров следует, что оптимальной концентрацией сахаров маннозы, галактозы, рамнозы и глюкозы в питательной среде, обеСпечивающей восстановление вирулентности P.multocida, является 0,1-1,2%. 1О

Концентрация сахаров ниже 0,1% не достаточна для деблокирования ферментов, ответственных эа синтез полисахаридной цепи капсульного антигена, Избыточное содержание сахаров 15 (выше 1,2% ) также не обеспечивает деблокирование Ферментов, по-видимо" му вследствие повышенного парциального давления и нарушения осмоса и диффузии сахаров внутрь бактериальных клеток.

Пример 6. Для изучения восстановления вирулентности культур

Раsteurella multocida различных серологических типов вариантов культивировали одни и те же штаммы

pasteurella multocida в предлагаемой и известной (бульон Хоттингера )сре" дах.

Вирулентность Пастерелла мультоцида различных серологических вариантон, выращенных в известной и предлагаемой питательной средЬ, приведена в таблице, Из приведенных данных следует, что культивирование Пастерелла муль- З5 тацида разных серовариантов в пред« лагаемой среде способствует восстановлению утраченной вирулентности культур, вследствие чего вирулентность их повышается в десятки и несколько тысяч раэ. Поскольку вирулентность пастерелл коррелирует с иммуногенностью, то предлагаемая питательная среда может быть использована не только для восстановления вирулентности штаммов, но и для изготовления более активных вакцин пастереллеза.

А 1.160.000<50000 175+100

В 145 000 + 5000 35+10

Д 580 000 + 10000 6+4

ЛД - количество микробных клеток, вызывающих гибель 50% зараженных белых мышей массой 16-18 r.