I! 1 (21) 3498683/28-13 (22) 11. 10. 82 (46) 30. 06. 84. Бюл. Р 24 (72) В.А.Ежов, Н.И.Санцевич,, С.И.Безбородова, 3. A. Виестуре, И. К.Шпрунка, В.Э.Шкинке и Л. A.Îðíà (71) Институт биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР и Научнопроизводственное объединение "Биохимреактив" (53) 663.18(088.8) (56) 1. Сб. Нуклеазы микроорганизмов. Под ред. A. М. Безбородова, М., "Наука", 1974, с.228.

2. Ежов В.A. Изучение условий биосинтеза внеклеточных рибонуклеаз

Penicillium hrevi-compactum и получение их в высокоочищенном виде.

Дис. на соиск. учен. степени канд. биологических наук, Пущино, 1979. (I%SU(Ii) А (54) lllTAMM PENICILLIUM BHEVI-COMPACTUM ВКМ.F-2464D вЂ” продуцент ри-бонуклеаэ. (57) Штамм Penicillium brevi-compactum BKM.F-2464D (Всесоюзная коллекция микроорганизмов, коллекционный номер ВКМ F 2464 D) - продуцент рибонуклеаз.

1100309

Изобретение относится к микробиологической промышленности и представляет собой штамм, который может быть использован для получения ферментов рибунеклеаэ.

Нуклеаэы являются реагентами, необходимыми для расшифрОвки структуры нуклеиновых кислот. Гуанилспецифическая щелочная рибонуклеаза используется для получения различных нуклеотидов, а также в исследованиях по изучению взаимосвязи свойств ферментов и их структуры. Неспецифическая кислая рибонуклеаза используется при ферментатинном синтезе олигонуклеотидов. Возможно также ее применение в медицине в качестне противовирусного препарата, Известно,. что грибы вида Penicil1ium brevi-соврас1ив выделяют в пита. тельную среду неспецифическую кислую 20

{преобладающий компонент) и гуанилспе. цифическую щелочную {минорный компонент) рибонуклеазы (1).

Известен также штамм Penicillium

brevi-compactum F-399 f23. 25 . Этот штамм является низкопродук- тивным. Достигаемая с помощью этого штамма ферментная активность составляет 30 ед/мл гуанилспецифической и 5 ед/мл неспецифической рибонук- gp леаэ.

Цель изобретения - повышение hK тивности рибонуклеаз.

Указанная цель достигается получе нием нового штамма Penicillium brevi- З5

compactum BKN F-24640, обладающего более высокой продуцирующей активностью.

Новый штамм получен н результате многократных моноспоровых рассевов культуры Penicillium brevi-compactum

F-399 с последующим отбором.наиболее активных вариантов. Предлагаемый штамм продуцирует как гуанилспецифическую, так и неспецифическую 45 рибонуклеазы в количестве до 70 ед/мл каждой.

Культуральная и морфологическая характеристики штамма.

Ре n i c i 1li um brevi - с ompact um ВКМ

F 2464. 50

Кул ь ту раль ные приз н аки.

Среда 1. Среда Чапека, (г/л саха" роза 30, О, маМ0 2, 0; КН2РО+ 1, 0р

МК$0„7Н 0; 0,5; КС1 0,5; ИБО+-7HzO

0,1р агар-агар 20,0. 55

На 9-е сутки колонии при 24 С диаметром 3-4 см. Бархатистые, до почти войлочных, рыхлые с краевой зоной сранительно тонкой, слегка радиально бороздчатые. Вначале белые, быстро 60 приобретают тускло-зеленую окраску, близкую к светло-серым или желтоватосеро-зеленым тонам, в конидиальной зоне приближающимся к серовато-оливковым при старении. На обратной стороне тускло-оливково-зеленые до темно-коричневых. Иногда образуют бесцветную зону (1-2 см). Эксудат обильный, бесцветный или кремовый.

Среда 2; Сусло-агар (нейтральный).

Рост культуры на сусло-агаре очень хороший. Отличается от роста на среде

Чапека отсутствием эксудата. Колонии окрашены в серо-зеленый цвет, плоские. Обратная сторона цвета среды.

Среда 3. Среда Чапека-Докса, г/л: глюкоза 20,0у Каноэ 2,0; КН РО 1,0;

Higso< ° 7Н О 0,5; КС1 0,5; еРэО 7Н>О

0,01; агар-агар 20,0.

Рост очень скудный, колония растет концентрическими кругами. Цвет зеро-зеленый. Обратная сторона неокрашенная.

Среда 4. Среда Ваксмана, {г/л1

КН РО 1, О; М &0 7Н20 0,5; глюкоза

10,0; пептон 5,0; агар-агар 20,0.

Колония серо-зеленая, рост скудный, концентрическими кругами. Обратяая сторона желтого цвета.

Среда 5. Глюкоэо-,картофельный, агар.

Рост очень скудный. Цвет серо-зеленый, Центр колонии приподнят в месте укола. Обратная сторона неокрашена.

Морфологические признаки.

Среда 1. Гифы толстые до 3-4,5 мкм, гранулированные. Конидиеносцы большей частью 300-500х4-5 мкм, гладкие с 1-2 веточками, плотно прижатыми вверху. Веточки 10-15õ3-4,5 мкм. Метули по 3-6; обычно расширенные вверху, клиновидные. Канодии почти шаровидные 3-5 мкм.

Среда 2. Гифы, как и на среде 1, густоГранулированные. Спороношение более интенсивное по сравнению с ростом на среде Чапека. Конидии шаровидные размером 2-3 мкм.

Пример 1 ° Культуру Penicillium brevi-compact,um BKN F 2464, хра.

) нящуюся на скошенном агаре на среде ,Чапека с сахаоозой, выращивают на среде, содержащей, г/л: соевая мука

0,5; глюкоза 5,0у пептон 1,0;

{МН ) 50 О, 2; /й 504 ° 7Н О 0,05)

СаСЮ ° 2Н20 О, 02 (рН до .стерилизации 6, 1-6, 4 ), в течение суток при

24 С в колбах емкостью 750 мл с объемом укаэанной среды 100 мл на качалке при 200 об/мин. Посевной Материал в количестве 10% добанляют в среду указанного состава и культивируют при тех же условиях н течение

3 сут.

Активность рибонуклеаз определяют при рН 5,0 (кислой) и рН 7,8 {щелочной) с использованием в.качестве субстрата дрожжевой РНК- Р{а {НПО "Биохимреактив") и выражают в спектрофотометрических единицах (Е2eo) в пересчете на 1 мл исследуемой жидкости.

1100309

Составйтель Т. Мелентьева

Редактор Т. Веселова Техред М.Кузьма Корректор А. Ильин

Заказ 4543/23 Тираж 522 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г.ужгород,ул. Проектная, 4

Активность кислой рибонуклеазы

70,0 ед/мл, щелочной вЂ” 64,7 ед/мп.

Пример 2. Подготовку посевного материала проводят аналогично примеру 1.

Полученную .культуру в количестве

10% используют для засева ферментера - инокулятора емкость ферментера 30 л, объем среды 20 л . Выращи- . вание инокулюма проводят при 24т1 С,; перемешивании 300 об/мин и аэрации ,0,6 объема воздуха на 1 объем среды в минуту на среде, указанной в примере 1. Через cvTKH выоосший инокулюм в количестве 10% от объема средыпередают в ферментер емкостью 100 л, содержащий 70 л указанной среды. Культивируют 72 ч при 24 1 С, перемешивании 350 об/мин, поддерживают значение рН на уровне 3,0, содержание растворенного кислорода не ниже

20-30. К 72-м часам ферментации активность культуральной жидкости составляет по кислой рибонуклеаэе

57,5 ед/мл, щелочной - 44,0 ед/мп.

Таким образом, предлагаемый штамм обладает более высокой продуцирующей способностью, чем известные штаммыпродуценты рибонуклеаз.

Штамм @ @ - @ @ -2464 @ -продуцент рибонуклеаз

Похожие патенты: