Способ получения фосфатидилхолина

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (!Ю (В

3(59 А 61 K 35/30

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPGHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕНКИЙ НОМИТЕТ СССР

flO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3450208/28-13 (22) 10. 06. 82 .(46) 15.07.84. Бюл. В 26 (72) С.Г. Батраков, В.A. Внуков, Г.А. Ермолин, Г.К. Митрофанова и О.Г. Саканделидзе (71) центральный ордена Ленина институт усовершенствования врачей (53) 615.361(088 ° 8) (56) 1. Гуров В.A. Иноземцев й.A.

Эамиховский A.H. Справочник по производству органопренаратов. И., 1970, с. 137-139. (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФОСФАТИДИЛхОлинА, включающий измельчение животного сырья, его экстракцию органическим растворителем,-очистку полученного экстракта от примесей и выделение целевого продукта, о т л и ч а ю.»» шийся тем, что, с целью увеличе 1 ния выхода целевого продукта и расширения сырьевой базы, в качестве сырья используют головной мозг тюленя, экстракцию сырья проводят неоднократно ацетоном при соотношении сырья и ацетона (1:5) †(1гб) при температурЕ 2025 С, а очистку проводят обработкой упаренного экстракта смесью хлороформа, этанола и воды, взятых в соотношении 15:5:4, далее раствор повторно упаривают, образовавшийся осадок растворяют в смеси хлороформ -.этанол, взятых в соотношении (1:1)-(1:1,5) и выделение целевого продукта осуществляют нанесением полученного раствора на силикагель с последующим допол. нительным нанесением на него смеси Я хлороформ - этанол, взятых в соотноиеиии (1:1) - (1 1,5) в присутствии Q)

8-103 водного аммиака.

1102603

Изобретение относится к медицинской промышленности, в частности к способам получения Фосфолипидов из животного сырья.

Известен способ получения фосфати5 дилхолина, включающий иэмельчение жи-, вотного сырья, его экстракцию органическим растворителем, очистку полученного экстракта от примесей и выделение целевого продукта t1).

Однако известный способ не позволяет получить целевой продукт с достаточно высоким выходом. Кроме того, в известном способе используется головной мозг сельскохозяйственных животных, представляющий собой пищевой 15 продукт, и спинной мозг, который является субпродуктом l категории.

Пель изобретения — увеличение выхода целевого продукта и расширение сырьевой базы.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения Фосфатидилхолина, включающему иэмельчение животного сырья, его экстракцию органическим растворителем, очистку полученного экстракта от примесей и выделение целевого продукта, в качестве сырья используют головной мозг тюленя, экстракцию сырья проводят неоднократно ацетоном при соотношении сырья и ацетона (1:5)-(1:6) при 30 температуре 20-25 С, а очистку провоо дят обработкой упаренного экстракта смесью хлороформа, этанола и воды, взятых в соотношении 15:5:4, далее раствор повторно упаривают, образо- .35 вавшийся осадок растворяют в смеси хлороформ-этанол, взятых в соотноше нии (1:1) †(1:1,5) и вьщеление целевого продукта осуществляют нанесением полученного раствора на силикагель40 с последующим дополнительным нанесени ем на него смеси хлороформ — эта 1 нол, взятых в соотношении (1: )†(1:1,5) в присутствии 8-10%-ного водного аммиака. 45

Способ осуществляют следующим образом.

Замороженный натуральный мозг тюленя дефростируют, измельчают при помощи мясорубки и экстрагируют

6-8 раз 5-6-кратными объемами ацетона при 20-25 С. Экстракт упаривают досуха, остаток растворяют в 15-20кратном объеме смеси хлороформ96%-ный этанол, взятых в соотношении

3:1, и раствор встряхивают с водой (20% от объема раствора). Нижнюю фазу образовавшейся двухфазной системы упаривают досуха, остаток растворяют в 2-3-кратном объеме смеси хлороформ96%-ный этанол, взятых в соотношении 60 (1:1) — {1:1,5) . Раствор наносят на силикагель (5-6-кратное количество по отношению к весу остатка), помещенный в цилиндрическую Фильтровальную воронку, силикагель промывают, 65

10-12 объемами той же смеси раствор = телей, а затем 5-7 объемами этой же

Смеси, содержащей 8-10% концентрированного водного аммиака. После упаривания аммиачного фильтрата и высушивания остатка в вакууме получают чистый фосфатидилхолин. Выход целевого .продукта 1,4-1,6% от веса натурального мозга, содержание основного вещества в препарате не ниже 95%, перекисное число не выше 0,02, полнота извлечения из мозга не менее

90%.

Пример . Используют головной мозг гренладского тюленя-белька, находящегося на вольерном содержании на побережье Белого моря и эабиваемого в возрасте 1 мес. Мозг, извлеченный из забитых животных, немедленно замораживают (-15 С), а через о

10 сут 1 кг мозга дефростируют, измельчают s мясорубке, помещают в бутыль емкостью 10 л и заливают 5 л ацетона (квалификация ЧДА) . Смесь перемешивают механической мешалкой

1 ч при 20 С, после чего фильтруют через стекляйный пористый фильтр Р 2, твердый остаток экстрагируют еще б раз описанным способом.

Все полученные фильтраты объединяют и упаривают досуха (здесь и далее растворители отгоняют на роо торном испарителе при 30 С и остаточном давлении 15 мм рт. ст.), добав ляя в качестве пеногасителя 10%н-бутанола. Остаток перемешивают

30 мин с 600 мл смеси хлороформ96%-ный этанол (3:1 по объему) .

Смесь фильтруют, фильтрат встряхивают 5 мин с 120 мл воды и оставляют для полного разделения фаз. Нижнюю фазу отделяют и упаривают досуха.

Остаток растворяют в 80 мл смеси хлороформ - 96%-ный этанол (1:1 по объему), раствор вносят в цилиндрическую фильтровальную воронку диаметром 40 мм с пористым стеклянным фильтром Р 2, заполненную 50 г силикагеля КСК (Воскресенского химкомбината; размер частиц от 75 до 200 мкм)

После слива через силикагель основной массы жидкости пропускают дополнительно 400 мл смеси хлороформ— .96%-иый этанол (1:1 по объему), аэатем силикагель промывают 250 мл этой же смеси, содержащей 20 мл концентрированного водного аммиака. Аммиачный фильтрат собирают отдельно и упаривают досуха. Остаток сушат

8 ч над безводным хлористым кальцием при 30 С и остаточном давлении

0,2 мм рт. ст., получают 15 1 г (1,5% от веса натурального мозга) фос. фатидилхолина. Содержание основного вещества в препарате 95,5%, перекисное число 0,016. При тонкослойной хроматографии на силикагеле продукт мигрирует в виде одного пятна и не

1102603

Составитель Э.цыганов

Техред Т. Маточка Корректор И. Эрдейн

Редактор Т.Мнтейко.Эаказ 4867/6 Тираж 688 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП Патент, r.Óæãoðîä, ул.Проектная,4 отличается от заведомого образца

ФосФатидилхолина, полученного из мозга быка.

Таким-образом в предлагаемом способе в качестве сырья используются нереализуемые отходы .промысла., тогда 5 как в известном способе сырьем служат пищевые продукты - головной мозг сельскохозяйственных животных и(или) высокоценный субпродукт - спинной мозг тех же животных. Выход фосфати- 30 дилхолина при его получении известным способом не превышает 0,33% в расчете на натуральный мозг, при этом содержание целевого продукта в препарате менее 20%, в качестве примесей присутствуют токсичные ве щества, - продукты деструкции липидов и перекиси (перекисное число более 0,7), в предлагаемом способе выход увеличен почти в 5 раз и составляет 1,4-1,6% при содержании це левого продукта в препарате более

95%, продукты деструкции липидов отсутствуют, перекисное число ниже

0,02.