Питательная среда для производственного культивирования лактобактерий штамма @ @ 8- @ -3

 

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВЕННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЛАКТОБАКТЕРИЙ ШТАММА LACTOBAKTERIUM PLANTARUM 8-РА-З, содержащая в качестве источников углерода и азота глюкозу , цистеин солянокислый, ацетат натрия и цитрат аммония, минеральные соли: марганец сернокислый, магний сернокислый, калий фосфорнокислый двузамещенный, а также твин-80 и воду , отличающаяся тем, что, с целью увеличения среднего срока годности сухого препарата лактобактерий , а также удешевления среды, в качестве источника азота среда дополнительно содержит гидролизат соевого шрота с содержанием аминного. азота 120-150 мг% при следующем соотношении компонентов, г/л: 10-25 Глюкоза 1,0-2,5 Цистеин солянокислый 1,0-2,5 Цитрат аммония 2,5-6,25 Ацетат натрия 0,10-0,25 Магний сернокислый 0,025-0,075 Марганец сернокислый Калий фосфорнокислый (Л 1,0-2,5 двузамещенный 0,5-1,0 мл Твин-80 100,0-200,0 Вода Гидрат соевого шрота с содержанием аминно% Остальное го азота 120-150 мг

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН..SUÄÄ 1102810 A

С 12 N 1/20; С 12 R 1/25

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ду,отличающаяся тем, что, с целью увеличения среднего срока годности сухого препарата лактобактерий, а также удешевления среды, в качестве источника азота среда дополнительно содержит гидролиэат соевого шрота с содержанием аминного. азота 120-150 мгХ при следующем соотношении компонентов, г/л:

1, 0-2,5

0,5-1,0 мл

100,0-200,0

Остальное

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЬПИЙ (21 ) 3486 282/28-13 (22) 05.07.82 (46) 15.07.84. Бюл. N 26 (72) Н.l1. Ефимова, Л.Л. Красик и В.А. Несчисляев (71) Пермский ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт вакцин и сывороток (53) 663.15(088.8) (56) 1. "Регламент производства лактобактерина сухого, Ф 23-75. (54)(57) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВЕННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЛАКТОБАКТЕРИЙ ШТАМЧА ЬАСТОВАКТЕКЮМ PLANТАщМ 8-PA-З, содержащая в качестве источников углерода и азота глюкозу, цистеин солянокислый, ацетат натрия и цитрат аммония, минеральные соли: марганец сернокислый, магний сернокислый, калий фосфорнокислый двуэамещенный, а также твин-80 и воГлюкоза

Цистеин солянокислый

Цитрат аммония

Ацетат натрия

Магний сернокислый

Марганец сернокислый

Калий фосфорнокислый двузамещенный

Твин-80

Вода

Гидрат соевого шрота с содержанием аминно- го азота 120-150 мг Х

10-25

1,0-2,5

1,0-2, 5

2,5-6,25

О, 10-0, 25

0,025-0,075 а

1102810

Содержание аминного азота в среде составляет 100-130 мг 1).

Недостатком среды является то, что для приготовления ее используют дефицитное пищевое сырье: молоко натуральное, печень говяжью, дрожжи пищевые, солод ржаной.

Эта среда не всегда обеспечивает необходимую концентрацию живых лактобактерий (выживаемость лактобакте- рий) в 1 мл среды для выпуска препарата с максимальным сроком годности (12 мес). Концентрация живых лактобактерий (нь1жшзаемость лактобактерий) штамма Т,асtobact.erium plantaruH! 8-PA 3 HB солодовой среде после

Изобретение относится к микробиологической промьш|ленности и может быть использовано для производства лактобактерина, Известно несколько питательных 5 сред для производственного культинирования лактобактерий штамма Lactobacterium plantarum 8-PA-3.

Наиболее близкой к предлагаемой является содовая питательная среда для производственного культивирования лактобактерий штамма Lactobacterium plabtarum 8-РА — 3, содержащая в качестве источников углерода и азота гидролизат молока, дрожжевой автолизат, экстракт ржаного солода, печеночный экстракт, пептон, глюкозу, цистеин солянокислый, цитрат аммония, минеральные соли: марганец сернокислый, магний сернокислый, калий фос20 форнокислый днузамещенный, а также фолиевую кислоту, твин-80 и воду при следующем соотношении компонентов, г/л:

Гидролизат молока 250 мл Дрожжевой антолизат 75 мл

Экстракт солода ржаного 500 мл

Печеночный экстракт 50 мл

Пептон 5

Цистеин солянокислый 0,1

Марганец сернокислый 0,025

Магний сернокислый 0,1

Калий фосфорнокислый двухзамещенный 1 35

Цитрат аммония 1

Ацетат натрия 2,5

Фолиеная кислота 0,001

Глюкоза 10

Твин-80 0,5

Желатина 15

Бода дистиллированная Остальное

10 ч культивирования в реакторе достигает 8,0-1,0 млрд.кл/мл. После лиофильной сушки количество живых лактобактерий н готовом препарате составляет 3,5-1,0 млрд н 1 дозе.

Срок годности препарата занисит от количества живых лактобактерий в

1 дозе. При содержании 4,0 млрд и выше устанавливается максимальный

sI.ше уста ц вливается максимальный срок годности — 1 год, средний срок годности сухого препарата лактобактерий 7,8 — 0,9 мес.

Цель изобретения — увеличение срока годности сухого препарата лактобактерий, а также удешевление среды.

Поставленная цель достигается тем, что питател,ная среда для производс г1 IIHQI культивирования лакто— бактерии штамма LactobacCer1ппз plantarum 8-PA-3, содержащая н качестве источников углерода и азота глюкозу, цистеин солянокислый, ацетат натрия и цитрат аммония, минеральяые соли: марганец сернокислый, магний сернокислый, калий фосфорнокислый днузамещенный, а также твин-80 и воду, н качестве источника азота дополнительно содержит гидролизат соевого шрота с содержанием аминного азота 120150 мг7. при следующем соотношении компонентов, г/л:

Глюкоза 10,0-25,0

Цистеин солянокислый 0,1-0,25

Цитрат аммония 1,0 — 2,5

Ацетат натрия 2,5-б,25

Магний сернокислый 0,1-0,25

Марганец сернокислый 0,025-0,075

Калий фосфорнокислый днузамещенный 1,0-2, 5 ,Твин-80 0,5 — 1,0 мл

Вода дистиллированная 100 0-200 0 мл

Гидролизат соевого Остальное шрота

Пример 1. 1 кг соевого шрота заливают 10 л дистиллированной воды. Тщательно перемешивают 1520 мин и выдерживают при 4 С в течение 18-25 ч. Полученный экстракт декантируют и подогревают до 45 С. о, Добавляют панкреатин из расчета 8 г на 1 л и устанавливают рН 8,2-8,4 с помощью 207-ного растнора едкого натра. Затем добавляют хлороформ

20 мл на 1 л экстракта. Гплролиз

02810 4 вают 15-20 мин и подогревают до 45"С.

Добавляют панкреатин (из расчета

10 г на 1 л), устанавливают рН

8,2-8,4 с помощью 20Х-ного раствора

Na0H. Гидролиз ведут при 45 С в течение 6 ч, при коррекции рН и периодическом перемешивании в течение первых .2 ч. Затем гидролизат декантируют, подкисляют уксусной кисло10 той до рН 4,7-4,9 и кипятят 5-10 мин.

Гидролиэат фильтруют через миткаль.

Готовый гидролиэат содержит, мг7.:

Аминный азот 120 . Общии азот 350

2

5

1,0

1,0

2,5

10,0

Вносят 0,5 мл твина-80. Тщательно перемешивают полученный раствор.

Доводят объем жидкости гидролиэатом 2 иэ соевого шрота до 1000 мл, В гидролизате предварительно устанавливают рН 7,0-7,2 с помощью 207.-ного раствора едкого натра. Затем добавляют желатозу в количестве 1,5-2Х, полученную 30 посредством автоклавирования желати- ны при 2 атм в течение 2 ч. Среду стерилизуют текучим паром 30 мин и под давлением 0 5 атм 20 мин при 110 С.

Содержание аминного азота в среде 100 мг7..

При производственной проверке предлагаемой среды получены следующие результаты (табл. 1).

Пример 2. 7,5 кг перемоло" 40 того до порошкообразного состояния соевого шрота заливают 100 л дистиллированной воды. Тщательно перемешиз 11 ведут при 45 С,в течение 24 ч. Затем о гидролизат декантируют, подкисляют. ледяной уксусной кислотой до рН

4,7-4,9, кипятят 5-10 мин. Гидролизат фильтруют через полотно миткаль.

Готовый гидролизат используют для приготовления среды. В готовом гид" ролизате содержится, MrX:

Аминный азот

Общий азот

Для приготовления 1 л среды в 200 мл дистиллированной воды последовательно растворяют, г:

Марганец сернокислый О, 05

Цистеин солянокислый О, 2

Магний сернокислый 0,2

Калий фосфорнокислый двуэамещенный

Цитрат аммония

Ацетат натрия

Глюкоза

Для приготовления 1 л среды в 100 мл дистиллированной воды последовательно растворяют, г:

Марганец сернокислый 0,025

Цистеин солянокислый 0,1

Магний сернокислый 0,1

Калий фосфорнокислый двуэамещенный

Цитрат аммония

Ацетат натрия

Глюкоза

Вносят 0 5 мл твина-80. Тщательно перемешивают раствор. Доводят объем жидкости гидролизатом соевого шрота с содержанием аминного азота 150 игЕ до 1000 мл. В гидролиэате предварительно устанавливают рН 7,0-7,2 с помощью 207-ного раствора !!аОН. Добавляют желатозу в количестве 1,57..

Среду стерилизуют текучим паром

30 мин и под давлением 0,5 атм 20 мин

„9 при 110 С, Содержание ампнного азота в среде составляет 130 мг7.

Таким образом, реализация изобретения позволяет увеличить срок годнос,ти сухого препарата лактобактерий и удешевить среду °

1102810 а б л и ц а 1

Концентрация живых лактобактерий до и после лиофильной сушки в зависимости от применяемой среды

Концентрация живых лактобактерий

Среда в среде после 10 ч культивирования в реакторе, млрд.кл/мл препарата, год

0,5-1

Таблица 2

Препарат на среде

Срок годности препарата, мес

2 3 4 5 6 7

1 8 9 10 Средний

12 12 12 12 12 12 12 12 12 12 12,0-0,0

12 12 12 6 б 6 6 6 6 6 7 8 0 9

Соевая

Солодовая

Составитель Е. Воробьева

Редактор Л. Пчелинская Техред M. Кузьма

Корректор А. Ильин

Заказ 4905/16 Тираж 522

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д, 4/5

Подписное

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, Предлагаемая

Известная

11, 0-2, 0

8,0-1,0 в 1 дозе препарата после лиофильной сушки, млрд.кл/доза

5,0-1,0

3,5-1,0

Срок годности