Питательная среда для учета споровых анаэробных микроорганизмов-вредителей молочного производства

 

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ УЧЕТА СПОРОВЫХ АНАЭРОБНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ ВРЕДИТЕЛЕЙ МОЛОЧНОГО ПРОИЗВОДСТВА, содержащая ферментативный гидролизат обезжиренного молока, уксуснокислый натрий, крахмал водорастворимый, цистеин и воду, отличающаяся тем, что, с целью ускорения роста микроорганизмов, она дополнительно содержит фосфорнокислый однозамещенный калий, бромкрезоловый пурпурный и фуксин кислый, а в качестве ферментативного гидролизата молока - . сухой1амилоризиновый гидролизат обезжиренного молока при следующем количественном соотношении компонентов, г/л: Сухой амилоризиновый гидролизат обезжирен30- ного молока Крахмал водораствори0 ,8-1,0 мый . . 5,0-5,5 Уксуснокислый натрий . Фосфорнокислый одно2 ,7-3,0 замещенный калий Бромкрезоловый 0,03-0,04 пурпурный 0,045-0,050 Фуксин кислый 0,5-0,6 Цистин,. До 1 л Вода О ND 00 IS

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (19) (И) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ 1" ;

1 i

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

flO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3512070/28-13 (22) 17. 11.82 (46) 15.07.84. Бюл. 1(" 26 (72) Н.M. Гостищева, С.Н. Карликанова, Н.В. Мартынова, А.В. Гудков, Г.Д. Перфильев, К.А. Калунянц и Т.А. Смирнова (71) Северо-Кавказский филиал Всесоюзного научно-исследовательского института маслодельной промышленности и Московский ордена Трудового Красного Знамени технологический институт пищевой промышленности (53) 576.8.096.33(088.8) (56) 1. Среды питательные сухие для микробиологического контроля молока и молочных продуктов. ТУ-49-513-78. (54)(57) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ УЧЕТА

СПОРОВЫХ АНАЭРОБНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ

ВРЕДИТЕЛЕЙ МОЛОЧНОГО ПРОИЗВОДСТВА, содержащая ферментативный гидролизат обезжиренного молока, уксуснокислый натрий, крахмал водорастворимый, цис (Ю С 12 Q 1/04 // С 12 N 1/20 теин и воду, отличающаяся тем, что, с целью ускорения роста микроорганизмов, она дополнительно . содержит фосфорнокислый однозамещенный калий, бромкрезоловый пурпурный и фуксин кислый, а в качестве ферментативного гидролиэата молока сухой амилоризиновый гидролизат обезжиренного молока при следующем количественном соотношении компонентов, г/л:

Сухой амилоризиновый гидролизат обезжиренного молока 30

Крахмал водорастворимый О, 8-1,0

Уксуснокислый натрий 5,0-5,5

Фосфорнокислый однозамещенный калий 2,7-3,0

Бромкрезоловый пурпурный 0,03-0,04

Фуксин кислый 0,045-0,050

Цистин,. 0,5-0,6

Вода До 1 л

1102812

Изобретение относится к микробиологической промьпнленности, н част— ности к молочной промьппленности, и касается питательной среды для выявления анаэробон — вредителей молочного производства.

Известна питательная среда для учета спос<>бных анаэробных микроорганизмов — вредителей молочного производства, содержащая ферментативный гидролизат обезжиренного молока, уксуснокислый натрий, крахмал водорастворимый, цистеин, агар-агар и воду (1).

Однако известная среда не обеспечивает быстрого роста микроорганизмов.

Цель изобретения — ускорение роста микроорганизмов.

Поставленная цель достигается тем, что питательная среда для учета споровых анаэробных микроорганизмов вредителей молочного производства, содержащая ферментативньзй гидролизат обезжиренного молока, уксуснокислый натрий, крахмал водорастворимый, цистеин и воду, дополнительно содерж фосфорнокислый однозамещенный калий, бромкрезолонь«й пурпурный и фуксин кислый, а в качестве ферментативного гидролизата молока — сухой амилоризиновый гидролизат обезжиренного кремового плотного ослцкл и отстаивание с. «зетла-корич««евой про:«>;.> Illo>I жид— кости. В ..зто время следят з;1 . лрлс:тл— иием лминног<. а 3oT;1. «!ри содержании лминного лзотл 140 «I ",. процесс прекращают л«зтокллвиронанием пр«« 121 С с>, н течение 15 ми««. Одновременно гидролизат освобождают о т бс>лко«з<>го осадка.

Продолжите:«ьность гидролизл 6-8 ч, конечный рН 7,6. В 0,5 л осветленного гидролизата рлст«зоряют 0,5 кг цисти— на при рН 10,5 и переносят в <>стал«вЂ” ной объем. Гидролизат уплривак>т при

3G

60 С до содержания сухих веществ 507.

Сгущенный гидролизат высушивают распылительным способом до содержания сухих веществ 967..

Уплкоькл сухой питательной среды, преднлзначенис>й для приготовления

1 л рабочего субстрата, содержит, г сухой амилоризиновый гидролизат 30; крахмал водорастворимьп« 0,8; натрий уксуснокислый 5; калий фос"1>орнокис40 лый однозамещениый 2,7; бромкрезоловый пурпурный 0,030; фуксин кислый

0,045. Сухая питательная среда содержит аминного азота 1 00 мг :.

Среды упаковывают и пакеты из чер45 ной полимерной пленки и хрлнят н течение 18 мес при комнатной температурс H относительной влажности 757.. ,Цля приготовления рабочего субстрата в производственных условиях содержимое упаковки переносят в колбу и доводят дистиллиронанной нодой до 1 л. нагревают до растворения порошка, разливают в пропибрки с поплавками и стерилизуют при 121 С в течение 15 мин (рН рабочего субстрата 7,2).

Биологический контроль среды проводят в сравнении с изнестной средой.

В качестве посевного материала ис30,0-35,0 ного молока

Крахмал нодорастноримый

Уксуснокислый натрий

Фосфорнокисльпз однозамещенный калий

Бромкрезоловый пурпурный

Фуксин кислый

Цистин

Вода

0,8-1, О

5,0 5,5

2,7-3,0

0,03-0,04

0,045-0,05

0,5-0,6

До 1 л молока при следующем количественном соотношении компонентов, г/л:

Сухой аминолоризиновый гидролизат обезжиренПитательную среду готовят следующим образом.

Обезжиренное молоко подвергают ферментатинной обработке амилорезином П 10 х (25-30 ед/г) при рН

8,0-9,0 в течение 6-8 ч до содержания аминного азота 140-160 мг%. Затем н небольшое количество осветленного гидролизата при рН 10,0-10,5 добавляют 0,5-0,6 г/л среды цистина и объединяют с гидролизатом. В высушенный гидролизат вводят калий фссфор««о к««с 3 лл!с п1е>I «II 111 б !» M Iс>:IoDhlH пурпурный, фуксин кислый, Цвет среды фиол< то«зо — «11«1>1«<евый.

Г! р и и е р 1. !>сру1 100 л обез— жиренного молока с титрусмой кислотЭ,, ностью не больш» 20 Г, подогревают до 45 С и устанавливают рН 9,0.

В 1 л подогретой смеси ра..>вопят

О, 2 кг амилоризинл акти«зиостьк.

1G 25 ед/г и переносят в об«1«ую массу.

Смесь вторично перемешивают, I идро, <> . лиз «зедут при 32+2 С. Вносят хлороформ в количестве 0,5 Jl. Ферментер герметически з акры«зл«>т, <«ерсз з каждый члс гидролизлт пс рс>л«е«п«1«зл«<>т.

Внешним признаком получения готоного гидролизлтл яв.«яется отделение

Вычисление титра споровых анаэробных

Споровые анаэробные микроорганизмы, обнаруженные в объеме, мл

1 1 1 О, 1 O,i О,,01 0,01 0 01 0,01 0,001 0,001 0,001 Вычисленный титр, мл

3,0

3,0 з 11028 пользуют штаммы споровых анаэробных микроорганизмов СР.butyricum b

2 .

С1 . betyrium III>, Cl . tyrobutyricum

1754, Cf; tyrobuturicum 1755, молоко сырое, молоко, настоянное на силосе, образцы сыров. Термостатируют

0 посевы при 37 С в течение 3 сут. Наличие спор учитывают по разрыву столбика агара в пробирках с общепринятыми средами, образованию пузырьков газа в поплавках и изменению цвета среды, приготовленной по предлагаемому способу, до желто-розового.

Результаты исследований при определении споровых анаэробных микроор15 ганизмов на индикаторной среде можно получить через 48 ч, а на общепринятых питательных субстратах через 72 ч.

На индикаторной среде появление газа в пузырьках совпадает с изменением ее цвета. Исследуемая среда более чувствительная к небольшому обсеменению продукта спороными анаэробными микроорганизмами и выявляет их количества на порядок выше. 25

II р и м е р 2. Отвешивают 30,0 г сухого амилоре3инового гидролизата обезжиренного молока (с растворенным в нем цистином из расчета 0,5 r на 1л гидролизата), добавляют крахмал водо30 растворимый в количестве 0,8 r, натрий уксуснокислый 5,0 г, калий фосфорнокислый однозамещенный 2,7 r, а также ин дикаторы: бромкрезоловый пурпурный 0,03 г и фуксии кислый 0,045. Сухие компоненты хорошо перемешивают, переносят в колбу и доводят дистиллированной водой объем до 1 л. Содержание колбы нагревают до растворения порошка, разливают в пробирки с поплавками и стерилизуют при 121 С в о, 40 течение 15 мин (рН рабочего субстрата

6,0).

Пример 3. Отвешивают 32,5 r сухого амилорезинового гидролизата обезжиренного молока (с растворенным

45 в нем цистином из расчета 0,55 r на

1 л гидролизата), добавляют крахмал

12 4 водорастворимый в количестве 0,9 r, натрий уксуснокислый 5,26 г, калий фосфорнокислый однозамещенный 2,85 r, а также индикаторы: бромкрезоловый пурпурный 0,035 и фуксин кислый

0,0475 г. Сухие компоненты хорошо перемешивают, переносят в колбу и доводят дистиллированной водой объем до 1 л. Содержимое колбы нагревают до растворения порошка, разливают в пробирки с поплавками и стерилизуют при 121 С в течение 15 мин (рН рабочего субстрата 7,1).

Пример 4. Отвешивают 35 r сухого амилорезинового гидролиэата обезжиренного молока (с растворенным в нем цистином из расчета 0 6 г на 1 л гидролиэата), добавляют крахмал водорастворимый в количестве

1,0, натрий уксуснокислый 5,5 г, калий фосфорнокислый однозамещенный

3,0 r, а также индикаторы: бромкрезоловый пурпурный 0,04 r и фуксин кислый 0,05 r. Сухие компоненты хорошо перемешивают, переносят в кол6у и доводят дистиллированной водой объем до 1 л. Содержимое колбы нагревают до растворения порошка, разливают в пропибрки с поплавками и стерилизуют при 121 С в течение 15 мин о (рН рабочего субстрата 7,2).

Для определения наиболее вероятного количества клеток в единице объема, веса исследуемого образца используют таблицу Мак-Креди. Вычисление титра споровых анаэробных бактерий проводят по табл. 1.

Результаты анализа приведены в табл. 2.

Использование питательной среды позволяет ускорить рост микроорганизмов (с 72 до 48 ч), что, в свою очередь, ускоряет способ индикации анаэробов — вредителей молочного производства. Исключение из состава среды агар-агара и уменьшение расхода цистеина (последний заменен цистином) позволяет удешевить среду.

Таблица 1 бактерий

1102812

Продолжение табл. 1

Споровые анаэробные микроорганизмы, обнаруженные в объеме, мл

1 0,1 О, 1 0,01 0,01 0,01 0,01 0,001 0,001 0,001 Вычисленный титр, мл

3,0

3,0

0,3

+ + + +

0,03

+ + + + +

0,03

+ + + + + +

0,03

+ + + + + + +

+ + + + + + + +

+ + +

+ + + + + +

+ + + + + + + +

+ + + + +

Таблица 2

Количество спор анаэробных микроорганизмов, выявленных на индикаторной и известной средах, вычисленный титр

Известная среда

Индикаторная среда

Образец

Время культивирования Титр, Время культивирования Титр, 24 48 72 мл

24 48 72

СФ. turobutyricum 1755 2,5 2,5

2,5

2,5 0,3

Молоко сырое (25 повторностей) 0,003

2,5 2,5х10 2,5х103 0,003 2,5х10 2,5х10 2,5х10 0,03

Образцы сыров (30 повтор" костей)

Фэ

2, 5 2,5х10 0,03

2,5

0,3

Молоко сырое при силосном кормлении (10 повторностей) 2,5 2,5х10 2,5х10 О, 003 — 2,5 2,5х10 о

БНИИПИ Вака 4905/16 Т аа 522 Яаущсноф

0,003

0,003

0,003

О, 003

О, 003