Способ получения дигидрохлоридов производных ди-0- @ - алкилглицеринов

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ даГИДРОХЛОРИДОВ ПРОИЗВОДНЫХ ДИ-0-Н-АПКШ1ГЛИЦЕРИНОВ . формулы CHg-v сн-т CHg-OR где один, из Y и Y означает h «О СНгННг a другой ОК, R,, и R каждый означает Cg- или C.jj-алкил, отличающийся тем, что соединение формулы паз - 7 , CH-Z iCHf OR где один из Z и Z означает СО h СХ CN a другой OC, где R -.имеет указанные значения, подвергают каталитической гидрогенизации в присутствии bo ю ю to никеля Ренея с последующим переводом полученного основания в дигидрохлорид .

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

ЮЦМФ й

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ CCCP

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНЯТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К flATKHTV иД(CH3NHi (21) 2764751/23-04 (22) 14.05.79 (31) 906260 (32) 15.05.78 (33) СМ (46) 30.10.84. Бюп. Ф 40 (72) Аллен Ричард Краска (США) (71) Пфайзер Инк (CIIIA) (53) 547.27.07 (088.8) (56) 1. С. Renoux et al. J. Iaaaunol, 10Я, 1972, р. 761.

2. Патент СЯА В 2738351, кл. 260-293.4, опублик. 1956.

3. Бюпер K., Пирсон Д. Органические синтезы. ч. 1 . И., "Иир", 1973, с. 477., (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИГИДРОХЛОРИДОВ ПРОИЗВОДНЫХ ДИ-О-н-АПКИЛГЛИЦЕРИНОВ формулы °

СИ-Y и

СН вЂ” Y !

СН вЂ” QR1

„SU„„12222 A (Щ) С 07 211 26 // А 61 К 31/445 где один, из и (означает а другой ОР, R„H и каждый означает С вЂ” или С -алкил о т л и

Э 1о

Ф ч а ю шийся тем, что соединение формулы д Z 1 г CH Х

I ,СН 0 1 где один из 21 и 2 означает гк N

N С см

Ю а другой Ор, где и †.имеет указан- В ные значения, подвергают каталитической гидрогенизации в присутствии никеля Ренея с последующим переводом полученного основания в дигидрохлоР °

1122220

1

Изобретение относится к способу получения новых дигидрохлоридов производных ди-О-н-алкилглицеринов, которые могут быть испсльзованы в качестве неспецифических стимуляторов клеточного промежуточного иммунитета.

В частности, эти соединения пригодны при стимулировании противоопухолевой активности, а также могут 10 быть использованы в сочетании с известнымн иммунологическими веществами в качестве стимуляторов при вакуумировании.

Известно использование биологи- 15 ческих вакцин — синтетического левамизола в качестве иммуностимулятора 1.17, Однако указанные соединения не проявляют цитотоксичность к опухолеобра зованиям.

Известны производные глицерина формулы

R — х-сН

1 2

1 25

СН- 2-883c- S.

1 -У вЂ” СН

2 2

R> циклоалкил, замещен- 30 ный нитрогалогенгруппой арил, Х, У, Е - О, $, $0, a

1-6 атомов С; 35

 — ди (низший) алкиламино, пиперидино, морфолино, пиролидино, (низший) алкилпиролидино;

H — алкил пиперазино, которые получают взаимодействием

1 3-ди (замещенного) 2-пропанола в виде натриевой соли с трет.аминоалкилгалоидом. укаэанные соединения используют 45 в качестве анестетиков в медицинской практике 2 .

Целью изобретения является разработка способа получения дигидрохпоридов производных ди-О-н-алкилглицеринов с более широким спектром действия по сравнению с известными (1).

Поставленная цель достигается 55 тем, что согласно способу получения дигидрохлоридов производных ди-О-н-алкилглицеринов общей формулы Г где один.иэ - 3> означает г нг а другой ОЙ, R. и Д каждый означа1 2 ет Св- или С,ц-алкил, соединение формулы я

СК вЂ” Z

Й ся- Хг! г О где один из " и Z> означает а другой Ой, где и имеет указанные значения, подвергают каталитической гидрогенизации в присутствии никеля Ренея с последующим переводом полученного основания в дигидрохлорид.

Предлагаемый способ основан на реакции каталитического восстановления соединений, содержащих циангруппу, в присутствии никеля Ренея 3), П р и и е р 1. 4-Циано-1- 2,3-(ди-н-децилокси) -и-пропил14-фенил-пиперидин .

1, 2-Ди-О-sf-де цил- (3-0-д е цил) -3-0-(п-тоэил)-глицерин (20 г, 0,0189 моль), полученный из 1,2-ди- -О-(н-децил)-глицеринхлорида и 4- циано-4-фенилпиперидина (4,5 г, 0,024 моль), соединяют вместе и нагревают до 180 С 20 мин. К охладившемуся продукту добавляют воду (50 мл) и эфир (100 мп) . Эфирный слой отделяют и промывают насыщенным раст вором бикарбоната натрия (2 - 100 мл) н.раствором хлорйстоводородной кислоты (100 мл), водой (2 . 100 лп), насыщенным раствором бикарбоната . натрия (100 мл) и водой (100 мл) .

Затем эфирный раствор высушивают над сульфатом магния, обрабатывают актнвированным углем, отфильтровы3 1122220 4 вают н концентрируют до маслообраз-, этаноле (50 мл), затем полученный ного продукта (10 г). Масло абсор- раствор насыщают газообразным аммиа, бнруют силикагелем, который затем ком и гндрируют под давлением отмывают гексаном (3 . 200 мп), толу- 3,51 кг/см в течение 3 ч, применяя олом(3" 200 мл),хлороформом(3 200 мл) 5 скелетных никелевый .катализатор по и этилацетатом (3 . 200 мл). После Ренею (0,7 r). Далее восстановленную концентрирования этнлацетата полу смесь отфильтровывают, и фильтрат чают чистое циано-соединение: масло концентрируют при пониженном данлеинфракрасный спектр (точные дан- нии до масла (1,1 r). Это масло хроные) 2220 см". 19 матографируют над силикагелем, отмы" вают из адсорбента смесьв бензол:этаПример 2. 4-Амынометил-1- . нол, превращают в хлористоводороднув .

- 2,3-(ди-н-децилокси)-н-пропил -4- соль и перекристаллиэовывавт из

-фенил-пнперидин. этилацетата, что дает чистую хлорис»

Нитрил,.полученный в примере 1 15 товодороднув соль (0,32 r, выход 24X); (f 2 г, 0,0022 моль), растворяют в . т.пл. 138-140 С

СН2ЗН2

СН -СН-СН1-22Д(2HC1 Â/ц Н10

l ph оС®Нвосу

Найдено,X: С 66,46 Н 10.,561 .N 4,43

С Н НО 2НС2 3/4 НО

Вычислено,X: С 66,59; Н 10,78; N4,4

Аналогично получены дигидрохлорид .: формулы

СВ2ЗН2

٠— СН вЂ” СŠ— 1(2Hi0

1 1 Ph

ОС8%17 ® 6@17, с т.пл. 176-178 С.

Найденов: С 65,27 Н 9,90

К 4,95 н,с„о — сн

t 211Hr

СН- 2HC1 CHrQ

РЬ к с„о-сн с т.пл. 190-192 С.

С31Н О И . 2НС1 - 1/2 Нуо

Вйчислейо,X:C 65,23» Н 10;42; N 4 90; а также дигидрохлорид формулы а -о-сн

СНфН сн,-хХ

РЬ

Найдено,X: С 66,70 Н 10,20, N 4,27. и,на„ы О ° 2HC1 .. 3/4 ЦР

Вйчислено,Xг С 66,53; Н 10,78;, И 4,43

Пример 3. Сншение развития опухоли на модели саркомы 1803.

Вести самцам СД-1 мъией (2025 г). внутрибрювннно вводят 106-1804 клеток в возрасте 5-6 дней. Через день после инокулирования опухоли мышам вводят испытуемое соединение (0,1 мл) в виде водно-жировой эмуль- 55 сионной среды (для лекарства типа нИнтралипид" (Куттер Лейбортриз) ,в нужной дозировке

Затем ведут наблюдение до наступ»

)ления смерти (в течение 40 дней). Результаты выражены в возрастающем процентном исчислении периода времени жизни (X ВПВ), определяемом по формуле среднее выживание леченных мышей

i BIIB 100 среднее вьмивание нелеченных контрольных мышей

При проведении указанного испыта.ния с использованием соединений форВг0- в .

me Р„и Р означают н-С Н или н-с1,н, получены результаты, представленные в табл. 1.

Пример 4. Оценка внутрибрюшинного активирования макрофага.

Мьпиам делают внутрибрюшинные инъекции соленого раствора испытуемого соединения. Макрофаги выращивают через 72 ч посредством внутрибрюшннной инъекции 3 мп 8Х-ной зародышевой

) сыворотки теленка — 92Х RNI 1460 среда (Гранд Айленд Байолэджикел К, Нью-Йорк) (1640g>FCS ) + 5 мл гепарина. Температуру всей среды выцерживают при 37 С, промывают полость

1-2 мин, вскрывают и всю внутрибрюшинную жидкость удаляют посредством стерильной силикониэированной пипетки и переносят в пластмассовую трубку, вьщерживаемую во льду. Макрофаги подсчитывают с помощью гемоцитомет— ра и доводят до концентрации

1,5 ° 10 /мл посредством 1640ggFCSs.

Затем клетки помещают в пластинки с многочисленными ячейками (1,5 10 клеток в ячейке) и инкубируют 1-2 ч при 37 С в атмосфере

5Х-ной двуокиси углерода. Всплывший слой отбрасывают, и ячейки однократно промывают средой; макрофаги прилипают к днищам ячеек. 1210 клеток (выращенных иэ сероэной жидкоститранссулата в полости брюшины мышей

ДВА, примерно через 5 дней после .иннокуляции)суспендируют в 1640э

РС$а, затем добавляют 1 мл 1 - 10 клеток/мп в каждую ячейку и инкубируют при 37 С в течение 24-36 ч в атмосфере, содержащей 5Х двуокиси углерода. Затем клетки пульсируют

ЗН-Tdr (1,0 Ci/èë, Amersham/Seazlees)

6 ч при 37 С. Всплывший слой отделяют и отбрасывают с помощью фильтра

Reeve Angeel для сбора клеток. Клетки промывают пятикратно соленым раствором. Диски фильтра уповают и помещают в сосуды для сцинтилляции со сцинтиллирующей жидкостью "1.|С" (5,0 r "РРО" и 0,2 г "РОРОР"/л толуола; Иорктаун Рисерч). Отсчеты производят 2 мин с применением счет чика "Беекман LS-250". При проведении данной процедуры с использованием соединений формулы

1 получены результаты, приведенные в ,О Teteï

Пример 5. Оценка активности моноцита в периферической крови.

Крысам вводят внутривенно испытуемое соединение. Солевой раствор вводят контрольным животным. Моноциты собирают через 72 ч посредством отбора 2 мп крови в трубку "ЕДТА" и разбавления 2 мл соленого раствора.

Полученную смесь тщательно разделяют на слои 3 мп "LSN" (среда для разделения лимфоцитов - Bionetics) и центрифугируют при ВОО об/мин 40 мин при комнатной температуре. Для сбора мутного центрального слоя. содержащего моноциты и лимфоциты, используют пипетку. Эти клетки дважды промывают балансированным соленым раствором Ханкса, повторно суспендируют в 1640>>FCS>, помещают в чашки с ячейками и иняубируют при 37 С в 5Х-ной двуокиси углерода на 1,5 ч.

Затем клетки энергично промывают средой для удаления неприставших клеток. Оставшиеся моноциты повторно вводят в среду и добавляют L 1210

И клеток в соответствии с процедурой, описанной в примере 4. Клетки пульсировали 3Н-Tdr H c vwm s с НТапляционном счетчике.

Используя данную процедуру, уста @ новлено, что 1,25 мг/кг 4-амииометил-(2,3-ди-й-децилокси)-н-пропил-4-фенилпиперидина обеспечивают

80Х-ное ингибирование синтеза ДНК.

Пример 6. Испытание действия предлагаемах эфиров в качестве вспомогательного вещества для вакцины на ингибирование гемагглюцинации.

Вирус инфлюэнцы, взаимодействия с эритроцитом, вызывает гемагглюти50 нацию. Если в пробе сыворотки присутствуют противовирусные антитела, то взаимодействие вируса с красными клетками крови, приводящее к их склеиванию, предотвращается. Таким

SS образом, отсутствие агглютинации свидетельствует о наличии противовирусных антител. Определение титра

1122220

7 гемагглютинЫции обеспечивает измерение уровня антител.

Испытуемые соединения в нужной дозировке вводят в состав рецептуры посредством растворения в 0,3 мл 5 этанола, после чего добавляют

0,1 мп "Твин-80", и полученную смесь добавляют к 4,6 мп "Интранипида" (Куттер Лейбортриз). Готовят также соответствующие среды без добавления испытуемого соединения. Вирус

"Флюоген" инфлюэнцы (Парк-Дэвис и

К ) смешивают с каждой из сред с целью получения 250 ССА антигена на

0,5 мп объема для инъекции. Одной 15 группе самок морских свинок "Харт.лей" (Камм Лейбортриз) вводят виутримьапечно 0,5 мп среды, содержащей

"Флюоген" и испытуемое соединение.

Контрольной группе морских свинок 20 делают инъекцию среды, содержащей

"Флюоген", но без испытуемого соединения. Спустя 30 дней после первичной сенсибилиэации животным дополнительно вводят внутримьанечно- одина" ковый антиген, тот же, которым они быпн первоначапьно иммуиизированы.

У животных берут кровь путем пункции сердечной мышцы несколько раз после первоначальной сенсибилизации. 30

Отделяют сыворотку с: применением интегрирующей трубки для отделения сыворотки "Корвак" (фирма "Кориинг

Гласс Уоркс" ) и хранят при (-20) С до титрования в ходе гемагглютинационного испытания

Испытуемую сыворотку, обработанную 0,011 н.раствором йодистого калия для удаления неспецифических факторов сыворотки, которые ингибируют агглютинацию, разливают в серийных двухкратных растворах в

0,025-миллиметровых емкостях в ячейки микротитратера (Линбро

Сайентифик Компани, Нью Хейвен, Коннектикут,США) типа ?3-И%С 96), содержащие 0,025 мп 0,01-м физиологического сопевого раствора, буферироваиного фосфатом (ФБР), при рН 7,2.

Суспензию испытуемого вируса, со50 держащую гемагглютии единицы на

0,025 мп ФБР, добавляют в каждую ячейку. Включают также ячейку, содержащую один лишь ФБР, и контрольные ячейки с антигеном (ФБР и.вирусантиген). После инкубирования пластинок при комнатной температуре в те. чение 30 мин в каждую ячейку добавляют 0,05 мл эритроцитов крови цыпленка, промытый 0,57-ным солевым раствором (Флоу Лейбортриз, Роквилл, Мэриленд, CIIIA) . Инкубирование продапжают до тех пор, пока контрольная ячейка не покажет нормальное осаждение. Сыворотку, полученную у нормальных морских свинок и обработанную перйодатом, включают для оценки уровня ингибирования неспецифической агглютинации,остающейся в испытуемой сыворотке, образованной йодистым калием. Титр ингибирования гемагглютинации определяют как наиболее высокую степень разбавления, при ко" торой происходит полностью ингибированная гемагглютинация с учетом поправки на неспецифическое ингибирование.

Результаты, полученные при испы" таниях 4-амико-метил-1-(2,3-(дн-н-дицилокси) -н-пропил 4 9ениппириднна, приведены в табл. 3.

Наиболее высокий титр ингибирова" ния гемагглютинации наблюдают после перевакцинации у тех животных, кото-.. рым вводят с лечебной целью испытуе- мое соединение, что свидетельствует об активности соединения в качестве стимулятора при вакцинации.

Приведенные результаты соответствуют результатам, наблюдаемым у каждого животного в соответствующих группах.

Пример 7. Испытание на цитотоксичность против клеток меланомы В-16 соединения формулы

Pb

СН2—

СН ЯК . I

CgH21 0 CH и левамизола проводят следующим образом.

Различные группы здоровых мышей обрабатывали (внутрибркяиинно) с оединением CP-46,665 с нормами применения в интервале 0,625-20 мг Kr живого веса, левамиэолом с нормами применения в интервале 0,1-10 мг/кг живого веса, или не подвергали обработке (контропь). Через 72 ч у мышей собирали брюшинные экссудатные клетки и испытывали in vitro на их способность к цитотоксичности (т.е. на способность уничтожать) по отношению к клеткам меланомы В-16. Клет9 1122220 кн, собранные у мышей, обработанных левамизапом, не проявляли цитотоксичности в сравнении с клетками, собраннвачи у контрольной группы мышей.

Клетки, собранные у мыпей, обработаиных соединением СР-46,665, демонстрировали следующую цитотоксичность относительно контрольной группы:

Доза, мг/кг

Цитотокснчность, Таблица 1. Х ВПВ при дозе, мг/кг

И„-%

0,25

f09

f54 (1) 192 (4) 1t3

139 (1) 127 (1) 108

Та бли ца 2

Доза, мг/кг

Ингибирование синтеза ДНК инкубированных клеток 1. 1210. лейкемии (in vitro) Х

В, -В

1,25

0,625

0,313

Таблица 3

Титр ингибирования гемагглютинации

Антиген

44""

0

0

160

0

10

Флюоген

80

0

160

100

1280

t0

640

2360

10 н-С Н

М 24 н-С, Н

»» » » »

Сутки " 30++

0,625

1,25

2,5

20

31

64

59

12

1122220

Продолжение табл, 3

Титр ингибирования гемагглютанации

Антиген

Сутки +

640

1280

640

160

10

10

10

10

10

+ Сутки после первичнбй сенсибилизации (анафилаксии) .

Ф% Повторное измерение через 30, 44, 65 дней после первичной сенсибилизации

Редактор Н.Швыдкая

Заказ 8009/45 Тирам 409 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Флюоген 4-амино-метил-1-(2,3-(ди-н-децилокси)-н-про ил3-4-фенилпиперидин (5 мг) Составитель М.Меркулова

Техред Т,Дубин чак Корректор И.Эрдейи

Способ получения дигидрохлоридов производных ди-0- @ - алкилглицеринов Способ получения дигидрохлоридов производных ди-0- @ - алкилглицеринов Способ получения дигидрохлоридов производных ди-0- @ - алкилглицеринов Способ получения дигидрохлоридов производных ди-0- @ - алкилглицеринов Способ получения дигидрохлоридов производных ди-0- @ - алкилглицеринов Способ получения дигидрохлоридов производных ди-0- @ - алкилглицеринов Способ получения дигидрохлоридов производных ди-0- @ - алкилглицеринов 

 

Похожие патенты:
Наверх