Штамм в/ленинград/489/80 вируса гриппа,используемый для приготовления инактивированной гриппозной вакцины

 

Штамм В(Ленинград)489/80 вируса гриппа ГКВ 1817 (Государственная коллекция вирусов Института вирусологии им. Д.И.Ивановского), использye fidй для приготовления инактивированной гриппозной вакцины.

„Я0.„112

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

Ю

РЕСПУБЛИК

3459

ОПИСАНИЕ ИЭОБРЕТ

К ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ. В»

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТ!Й (21) 3613439/28-! 3 (22) 30.06.83 (46) 30.1!.84. Бюл.Ф 44 (72) М.А. Гордон, E.М.Войцеховская, Е.Б.Гринбаум и В.Ф.Попов (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт гриппа и Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича (53) 615.372(088.8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР

Ф 895094, кл. С .12 0 7/00, !981 (прототип). (54) ШТАММ В(ЛЕНИНГРАД)489/80 ВИРУСА ГРИППА, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ИНАКТИВИРОВАННОЙ ГРИППОЗНОЙ ВА1ЩИНЫ. (57) Штамм В(Ленинград)489/80 вируса гриппа ГКВ !8!7 (Государственная . коллекция вирусов Института вирусологии им. Д.И.Ивановского), используеюй для приготовления инактивированной гриппозной вакцины.

1126598

Изобретение относится к вирусологии и касается создания нового

1 штамма вируса гриппа, пригодного для получения гриппозной вакцины, современной антигенной структуры. 5

Известен штамм вируса гриппа

В(Ленинград) 14/76, используемый для приготовления инактивированной гриппозной вакцины jIj .

Однако известный штамм по анти- 10 генной структуре близкородственен эталонному вирусу В1Гонконг) 5/72 и отличается от современного эталона В(Сингапур) 222/79.

Цель изобретения — создание штам- I5 ма вируса гриппа, соответствующего по антигенной структуре эталонному и циркулирующим вирусам и характеризующегося высокой репродуктивной активностью.

Эта цель достигается с помощью штамма В(Ленинград) 489/80 вируса гриппа.

Штамм выделен в Ленинграде в июле

1980 г. от больного ребенка. Хранит- ZS ся в Государственной коллекции вирусов гриппа под номером ГКВ 1817 и характеризуется следующими признаками.

Морфология. Полиморфная структура, типичная для вирусов гриппа.

Физические свойства. Коэффициент седиментации 750 g плавучая плотность I 21 г/см 3

По антигенной структуре штамм

В(Ленинград)489/80 близок к эталонному вирусу В (Сингапур) 222779.

В перекрестной реакции торможения гемагглютинации нейтрализуется антисывороткой В(Сингапур ) 222/80 от 1/2

40 до полного титра.

Чувствительность к ингибиторам.

Штамм В(Ленинград1 489/80 чувствителен к термослабильным ингибиторам (ТЛИ) нормальных сывороток мор

45 ских свинок, белых мышей, кроликов, телят; достигая титров (1 . 80)-(1:320/, и нечувствителен к ТЛИ сывороток крыс и лошадей. Ингибирующая активность полностью устранялась прогрео 50 ванием сывороток при 60 С в течение

I ч.

Активность к специфическим антителам человеческих сывороток.

Было проведено сравнительное изу-у1 чение способности указанного штамма выявлять антитела в.человеческих сыворотках в РТГА в сопоставлении с

2 диагностическим штаммом В(Ленинград)

369/75 и вирусом В(Сингапур) 222/79.

Оказалось, что штамм обладает высокой диагностической активностью в

РТГА.

Среднегеометрические титры антител при ыспользовании предлагаемого штамма. приближаются к показателям эталонного вируса В(Сингапур) 222/79.

Спектр нейтрализующей активности специфических антител.

Изучена сравнительная характеристика спектра нейтралиэующей активности специфических антител, полученных после иммунизации белых крыс эталонными штаммами и различными вирусами 1975-1981 гг, выделения. Показано, что штамм В(Ленинград)489/80 характеризуется высоким показателем нейтралиэующей активности специфических антител — коэффициент нейтрализации составляет 0,57 и превосходит по этому показателю эталонный штамм В(Сингапур) 222/79 (коэффициент

0,29) ..

Репродукционная активность. Вирусный изолят на уровне 2-3 пассажа характериэовался умеренной репродукционной активностью. Повышение гемагглютинирующей и инфекционной активности достигнуто в результате.последовательного пассирования в развивающихся куриных эмбрионах с чередованием инфицирующих доз.

Аллантоисный вирус: титр инфекционнный — 7,5-8,5 3g 3IIg /0,2 мл, титр гемагглютинина — (1: 256) — (1 . 1024) в 0,2,мл с 1 -ными эритроцитами кур.

Лиофилизированный вирус: титр инфекционный — 7,0-7,5 66 ЭИД .„ /0,2 мл, 1титр гемагглютинина — 1:256 в 0,2 мл.

Стабильность биологических свойств прослежена дополнительно до 20 пассажа на развивающихся куриных эм\ брионах, Штамм используют следующим обраэом.

П р и и е р. Маточный материал вируса В(Ленинград) 489/80, прошедший контроли на стерильность, наличие посторонних гемагглютинирующих вирусов, биологическую активность и безвредность для белых мышей при подкожном введении, разводят в 100000 раэ (1О ) на фосфатно-солевом буфере (рН 7,2), содержащем антибиотики, Куриные эмбрионы 11-дневного возраста заражают полученным раэведе!

126

Составитель Г,Смирнова

Техред Т.Маточка Корректор Е,Сирохман

Редактор Т.Колб

Заказ 8640/20 Тираж 521 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035,Москва, )К-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4

3 нием вируса из расчета по 0,2 мл на

1 эмбрион в аллантоисную полость в дозе 10 ЭИД /О;2 мл. Зараженные

Ъ куриные эмбрионы инкубируют в термостате с увлажнением воздуха в те- 5 чение 72 ч при 32 С, после чего их охлаждают при 4 С в течение )8 ч.

Куриные эмбрионы стерильно вскрывают, всю аллантоисную жидкость собирают и выдерживают при 4 С в тече- !О

О ние l& ч. Полученный материал проверяют в реакции гемагглютинации с

)У.-ной вэвесью эритроцитов кур в физиологическом растворе и проводят все указанные биологические контро- tj ля. Полученная аллантоисная вируссодержащая жидкость является материалом для дальнейшего приготовления инактивированной вакцины различными методами. 20

Экспериментальные серии, 3,4 и 6 вакцины имеют гемагглютинирующую активноств 414 МЕ/мп, 200 МЕ/мл и

600 МЕ/мл соответственно овальбумин

598 4 в количестве 0,26 мкг/мл, 0,16 мкг/мл и 0,5 мкг/мл. Среднегеометрические титры к типу В у иммунизированных мьпией равны 1;182, l. 182 и 1, )20.

При проверке иммуногенности на людях сероконвексия к типу В составила у серии 3 707., у серии 4 — 73X и у серии 6 — 73X. Среднегеометрические титры антител равны соответственно 1, 97, 1:104 и 1:97.

Использование штамма В(Ленинград)

489/80 вируса гриппа позволит повысить иммуногенность инактивирован- ной гриппозной вакцины типа В за счет антигенного соответствия вак-. цинного штамма эпидемическому.

Кроме того, предлагаемый штамм характеризуется высокой гемагглютинирувщей активностью и использование его в промышленном производстве инактивированной вакцины позволит снизить расход куриных эмбрионов, являющихся ценным пищевым сырьем.