Способ получения бактериофага шигелл зонне

 

(19)SU(11)1128599(13)A1(51)  МПК 6    C12N7/00(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯк авторскому свидетельствуСтатус: по данным на 17.01.2013 - прекратил действиеПошлина:

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БАКТЕРИОФАГА ШИГЕЛЛ ЗОННЕ

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к способам получения лечебных бактериофагов. Известен способ культивирования бактериофага шигелл Зонне путем выращивания бактерий и фага в питательной среде с последующим выделением целевого продукта. Однако в известном способе штаммы в S-форме быстро диссоциируют с образованием SO-OR-R-форм, что не обеспечивает высокой литической активности фага в отношении вирулентных штаммов гомологичного вида. Целью изобретения является повышение литической активности вирулентных штаммов гомологичного вида при сохранении литических свойств фага в отношении диссоциированных форм бактерий. Эта цель достигается тем, что в способе получения бактериофага шигелл Зонне путем выращивания бактерии и фага в питательной среде с последующим выделением целевого продукта выращивание осуществляют в питательной среде в присутствии 10-12% панкреатического или 15-17% кислотного гемагидролизата. П р и м е р. Для приготовления питательной среды используют водный раствор солей, содержащий 0,05% Na2HPO4, 0,05% КН2РО4, 0,1-0,2% глюкозы, 10-12% панкреатического или 15-17% кислотного гемагидролизата. Конечная концентрация аминного азота 0,05-0,07% пентонов 0,3-0,4% ионов железа 0,01-0,02 мг/л, рН среды 7,2-7,6, стерилизуют при 115оС в течение 30 мин. Для создания плотного варианта вводят 0,4-1,5% агар-агара, содержание аминного азота 0,1-0,2% Панкреатический гемагидролизат получают путем гидролиза сухим панкреатином (8-10% ) отходов производства гамма-глобулина. Избыток ионов железа удаляют добавлением 1-3% активированного угля. Кислотный гемагидролизат получают в результате гидролиза того же сырья соляной кислотой при 127оС. Избыток ионов железа удаляют дробным осаждением при изменении рН. На данных средах было испытано 20 штаммов шигелл Зонне в Svir-форме и бактериофаг S-1 гомологического вида. Культивирование бактерий шигелл Зонне проводят на 1,5%-ной агаровой среде, фага в жидкой среде при 37оС. В питательную среду добавляют смыв 18-часовой агаровой культуры штамма-субстрата до конечной концентрации 5-8107 бактериальных клеток в 1 мл, инкубируют в статических условиях гетерогенного поверхностного культивирования в течение 1-1,5 ч. Затем определяют концентрацию микробных клеток по оптическому стандарту мутности и заражают фагом с множественностью заражения 1/1-2 или 1/100-150 (соответственно 1 фаговая частица на 1-2 бактериальные клетки 1 цикл, и 1 фаговая частица на 150-100 бактериальных клеток 2 цикла). Данные о диапазоне и степени литической активности клона S-1 приведены в таблице. Из таблицы видно, что клон S-1, полученный предложенным способом с использованием штамма-субстрата Svir-хемотипа на среде с основой роста в виде панкреатического или кислотного гемагидролизата обладает одинаково широким диапазоном и высокой степенью литической активности как в отношении диссоциированных форм (хемотипы Ra, Rb, Rс, Rd) lg xg 4,90,39, так и в отношении вирулентных для человека штаммов lgxg 50,39). Различия статистически не значимы (Р > 0,05). Клон S-1, полученный известным способом на диссоциированных вариантах Sh. Sonnei N 28 хемотипов Ra и Rb, Rc, Rd (SO-OR-R-формы) на бульонах Хоттингера и Мартена, обладает более узким диапазоном и низкой степенью литической активности в отношении вирулентных штаммов шигелл Зонне. Логарифм средней геометрической титра по Аппельману на Svir-штаммах составляет 1,470,6 (штамм-субстрат Ra-хемотипа) и 0,270,2 (штамм-субстрат Rb, Rc, Rd-хемотипов). Диссоциированные штаммы, клон S-1, выращенные известным способом на бактериальных клетках Ra-Rd-хемотипов, лизировали в достоверно более высоком титре -lgxg 4,270,56 и 3,2 0,48 (Р < 0,01). Найденные различия в широте диапазона и степени литической активности клона S-1, полученного известным (прототип) и предложенным способами, статистически значимы (Р < 0,01). Снижение степени и сужение диапазона литической активности клона S-1 в отношении вирулентных для человека штаммов Зонне носит необратимый характер, т.е. при возврате его (S-1) на культуру Svir-хемотипа свойства не восстанавливаются. Культивирование штаммов Зонне на этих средах позволяет сохранить в Svir-форме 94% (на кислотном гемагидролизате) и 100% штаммов (на панкреатическом). Среднее количество колоний S-формы при рассеве на 1,5%-ную агаровую среду составляет 97,5 1,5% и 98,20,7% в зависимости от используемой основы. Конечный титр бактериофага 5,7-7,2109. Штаммы шигелл Зонне могут длительно храниться без изменения антигенных свойств. Использование способа позволяет расширить диапазон литической активности бактериофагов Зонне в отношении вирулентных для человека штаммов и тем самым повысить эффективность компонента Зонне поливалентного дизентерийного бактериофага, лизирующего как вирулентные формы бактерий при активном инфекционном процессе, так и диссоциированные и непатогенные формы, выделяемые реконвалесцентами, ускоряя санацию последних и способствуя снижению заболеваемости.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БАКТЕРИОФАГА ШИГЕЛЛ ЗОННЕ путем выращивания бактерий и фага в питательной среде с последующим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения литической активности фага в отношении вирулентных штаммов гомологичного вида при сохранении литических свойств в отношении диссоциированных форм бактерий, выращивание осуществляют в питательной среде в присутствии 10 12% панкреатического или 15 17% кислотного гемагидролизата.

РИСУНКИ

Рисунок 1



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к составам вакцин против ньюкаслской болезни птиц

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть применено при производстве вакцинных препаратов для массовой профилактики гриппа
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, в частности, к штамму коронавируса собак, используемого для контроля иммуногенной активности вакцин и получения сывороток для лечения и диагностики коронавирусной инфекции собак
Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, а именно к аттенуированным вирусам чумы плотоядных, и может быть использовано при изготовлении препаратов для диагностики и специфической профилактики заболевания пушных зверей и собак, вызванного вирусом чумы плотоядных
Изобретение относится к биотехнологии и медицине и касается лечебно-профилактического препарата на основе человеческого лейкоцитарного интерферона

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к производству медицинских биологических препаратов и может быть использовано при получении лечебно-профилактических бактериофагов, предназначенных для парентерального и внутривенного введения

Изобретение относится к медицинской вирусологии и касается получения вакцинного штамма для живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых, соответствует по антигенным свойствам актуальному вирусу А/Иоганесбург/33/94 (Н3N2)

Изобретение относится к медицинской вирусологии и касается получения вакцинного штамма для живой гриппозной интраназальной вакцины для детей, соответствующего по антигенным свойствам актуальному вирусу А/Иоганесбург/33/94 (Н3N2)

Изобретение относится к области генетической инженерии и биотехнологии, в частности, к получению рекомбинантной плазмидной ДНК рС-NS3, обеспечивающей интеграцию комплекса генов C, prM, E, NSI, NS2A, NS2B, NS3 вируса клещевого энцефалита (ВКЭ) в геном вируса осповакцины (ВОВ), и соответствующего штамма ВОВ
Наверх