Способ получения производных винбластина общей формулы R R3 OR ш.о OR где R - метоксигруппа; R - ацетил; R -оС-этил, или -этил; Я - -оксигруппа, или атом водорода; R - линейный С -Ст -алкил, или изопропил, изобутил, циклогексил , аллил, бензил, или их эпимеров, отличающийс я тем, что соединение общей формулы « OR СНзО ( СОК СО 00 OR о со где R ,R2,;R3 и R имеют указанные значения, а R имеет любое из знаСАЭ чений R, кроме того, которое желн тельно для конечного продукта, подвергают взаимодействию 30-50кратном избытком спирта общей формулы ROH где R имг-ет указанные значения, при рН 3, затем устанавливают для реакционной смеси рН 7 и пoлyчeнныi продукт или его эпимеры вьщеляют с последующей при желании очисткой.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (19) (! 1) В(I ")1(Щу g

",„, 1З

ÈÜÌÈ:И к@4

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

1З. К ПАТЕНТY

° ю

О0СН3

0еН3

0@2

I HH0 CORK

0Р II

СН30

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3320102/23-04 (22) 17.08.81 (31) 2563/80 (32) 22.10.80 (33) ВНР (46) 30.01.85. Бюл. Ф 4 (72) Лайош Данчи, Тибор Кеве, Дьердь

Фекете, Эстер Дежери, Шандор Герег, Тибор Ач, Чаба Сантаи, Лайош Сабо, Каталин Хонти, Шандор Экхардт, Иван Хинди, Шандор Керпель-Фрониуш, Жужанна Релле и Янош Шугар (ВНР) (71) Рихтер Гедеон Ведьесети

Дьяр PT (BHP) (53) 547.945.1.07(088.8) (56) 1. Патент США Ф 3097137, кл. 424-195, опублик. 1963.

2. Вейганд-Хильгетаг. Методы эксперимента в органической химии.

М., "Химия", 1968, с. 361. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ ВИНБЛАСТИНА ИЛИ ИХ ЭПИМЕРОВ. (57) Способ получения производных винбластина общей формулы

R+ з

4(51) С 07 D 519/04 А 61 К 31/475

1 где R - метоксигруппа;

R2 вЂ” ацетил;

- (--этил или и -этил.

-у -оксигруппа, или атом водорода;

R вЂ” линейный С4-С -алкил, или изопропил, изобутил, циклогексил, аллил, бензил, или их эпимеров, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что соединение общей формулы

R ф % 0 СО

0R .где R" R 1Р и R4 имеют указанные значения, à R* имеет любое из значений R" кроме того, которое жела тельно для конечного продукта, подвергают взаимодействию. с 30-50кратном избытком спирта общей формулы

R ОН

ape R им ет указанные значения, при рН 3, затем устанавливают дпя реакционной смеси рН 7 и полученньЫ продукт или его эпимеры выделяют с последующей при желании очисткой.

Изобретение относится к получения новых химических ний,являющжсся производными иа,а именно соединений общей

1138033 способу г соединевинбластин формулы

2 де R,,R R и R имеют указанные (4 начения; R* имеет любое из значеий R, кроме того, которое желательно для конечного продукта, подвергают взаимодействию с 30вЂ”

50-кратным избытком спирта общей формулы осн, 10

ОИРУ "ыо со((2 ов"

СНО

00CHg (II) 50

ОВ

1 "Ю СОВ 2

ОрФ

55 где R" вЂ” метоксигруппа;

К вЂ” ацетил;

R вЂ” -этил или Р- ýòèë

R вЂ” -оксигруппа или атом водорода; ((R вЂ” линейный С -С -алкил, или изопропил, изобутил, цикло- 5 гексил, аллил, бензил, или их эпимеров, обладающих цитостатической активностью.

Известен природный алкалоид вЂ винбластин, который получают обработкой З0 водно-спиртового раствора растительного сырья Vinca rosea вЂ” кислотой с последующим выделением винбластина экстракцией и хроматографией(.1) .

Известен также метод расщепле35 ния простой эфирной связи под действием кислотныхагентов,например ангидридов илихлорангидридов кислот (2) .

-Цель изобретения вЂ” получение но .вых производных винбластина, проявляющих цитостатическое действие.

Цель достигается тем, что согласно способу получения производных винбластина соединение общей формулы

R ОН (( (zzz) Ц где R вЂ” изопропил или изобутил, при рН 3, затем устанавливают рН реакционной смеси 7 и полученный продукт или его эпимеры выделяют с последующей при желании очисткой.

Пример 1. N-Дезметил-N-(метоксиметил)-винбластин.

t 0 г (1,1 ммоль) сульфата винбластина растворяют в смеси 240 мл абсолютного не содержащего примесей спирта дихлорметана, 8,0 мл метанола и 25 мл ледяной уксусной кислоты и охлаждают полученный раствор до

-55 С. К раствору винбластина добавляют в течение 5 мин в токе сухого азота при интенсивном перемешивании охлажденный до -55 С раствор 0.5 r (5 0 ммоль) трехокиси хрома в 40 мл уксусного ангидрида. При этом нужно следить за тем, чтобы температура смеси не поднималась выше -55 С.

Ход окисления контролируют с помощью тонкослойной хроматографии (адсорбент:алюминиевая фольга для тонкослойной хроматографии вЂ” силикагель

60 Р з,, Art. 5554; подвижная фаза: смесь диэтилового эфира, этанола, бензола и диэтиламина в соотношении 10:0,5:0,5:0,5). Окисление, как правило, заканчивается через 2030 мин. После окончания реакции к реакционной смеси добавляют при охлаждении 190 мл концентрированного водного раствора аммиака и 200 r льда. Температура смеси поднимается до 0-10 С. После этого прекращают охлаждение и энергично перемешивают смесь, рН которой равно 8,5-9, в течение 10 мин. Фазы разделяют и из водной фазы трижды проводят экстракцию 30 мл дихлорметаном. Экстракты четыре раза промывают 25 мл разбавленным 1:1 раствором аммиака, а затем дважды 30 мл воды, высушивают над сульфатом магния, фильтруют и упаривают фильтрат в вакууме.

В результате получают 0,85 г сырого продукта, 0,3 г из которых подвергают хроматографии на колон3 11380 ке, заполненной окисью алюминия ак-тивност и П-Ш, используя в качестве элюента дихлорметан. Собирают фракции по 6 мл, которые анализируют с помощью тонкослойной хроматографии (адсорбент:алюминиевая фольга для тонкослоййой хроматографии вЂ” силикагель F 4, Art. 5554, подвижная фаза: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 5:0,4, проявление па- 10 рами иода или УФ-светом с длиной волны 254 нм) °

Фракции, содержащие один и .тот же алкалоид, объединяют и по отдельности упаривают. Целевое соединение содержится в фракциях 6-25. В результате получают N-дезметил-Nâ€ (метоксиметил)-винбластин (хроматографическая чистота 64X), плавящийся при 205-210 С (этанол). Hip =+23 20 (с=1, хлороформ}.

Масс "спектрометрия m/е: 840 (М .1003), 810, 809, 781, 751 ° 681, 651, 650, 601, 499, 355, 282, 243, 241, 154, }49 .. 25

Пример 2. N-Дезметил-И-(изобутоксиметил)-винбластин.

0,5 г (0,55 ммоль) сульфата винбластина растворяют в смеси 120 мл абсолютного дихлорметана, 3,7 мл >0 изобутанола и 12,5 мл ледяной уксусной кислоты и охлаждают полученный раствор до -55 С. К этому раствору добавляют охлажденный до -55 С раствор 0,25 г (0,5 ммоль) трехокиси хрома в 40 мл уксусного ангидрида.

Протекание реакции контролируют с помощью тонкослойной хроматографии (адсорбент: полимерная пленка для тонкослойной хроматографии вЂ” силика- 40 гель 60 Р,5, Art. 5735, подвижная фаза: смесь эфира, этанола, бензола и диэтиламина в соотношении 10:0 5:

:0,5:0,5) описанным в примере 1 образом. Реакция заканчивается через 45

140 мин. Реакционную смесь обрабатывают далее описанным в примере 1 образом. В результате получают

0,65 г сырого продукта, который подвергают очистке с помощью хромато- 50 графин на колонке, заполненной силикагелем 60 (Art. 9385), используя дихлорэтан в качестве растворителя.

Проявление и элюирование осуществ.ляют с помощью дихлорметана. Соби- 55

;рают фракции по 10 мл. В первых

,330 мл элюата не содержится алкалои ! да. Далее элюирование продолжают ди.

33 4 хлорметаном, содержащим 3Ж метанола.

В первых 90 мл полученного элюата содержится целевое соединение, которое вьщеляют путем отгонки растворителя. Выход 169 мг (357 от теоретического выхода).

ИК (KBr): 3400 (NH, OH), 1730 (C02CH3), 1605, 1220 см " (ОАс) .

Масс-спектрометрия m/е: (М

1007), 864, 851, 823, 810, 779, 751, 723, 651, 650, 514, 355, 346, 329, 154.

Пример 3. N-.Äåçìåòèë-N-(гептоксиметил)-винбластин.

Процесс проводят таким же образом, как это описано в примере 2, но в качестве реагента используют.

3,7 мл 1-гептанола. Реакция продолжается в течение примерно 90 мин. В результате переработки реакционной смеси получают около 4 r сырого продукта, который растворяют в 30 мл дихлорметана и вводят в колонку, заполненную силикагелем 60.(Art.

9385). Элюирование осуществляют с помощью дихлорметана. Собирают фракции по 10 мл. В первых 300 мл не содержится алкалоида. Далее элюирование продолжают дихлорметаном, содержащим 37. метанола. В первых 120 мл полученного элюата содержится целевой продукт. Выход

217. от теоретического выхода, т.пл.

200-205 С (смесь ацетона и эфира).

ИК (KBr): 3450 (OH, ИН), 1740 (CO СН ), 1610, 1220 см (OAc).

Масс-спектрометрия m/е: (М

1007), 906, 893, 865, 822, 810, 765, 751, 737, 651, 650, 649, 469, 455> 355э 282.. 154е 1351 122 °

Пример 4. N-Дезметил-НвЂ (бензилоксиметил)-винбластин.

Работают таким же образом, как это описано в примере 2, с той разницей, что вместо изобутанола используют 4,3 мл бензилового спирта.

Реакция заканчивается через 45 мин.

В результате получают 4 мл сырого продукта в виде маслянистой жидкости, который вьщеляют с помощью препаративной хроматографии на бумаге (адсорбент: силикагель РГ „ ц, подвиж251 336 ная фаза: смесь 100 мл дихлорметана и 8 мл метанола). Выход 75 мг (15Х от теоретического выхода), т.пл.

215-218 С (смесь метиленхлорида и эфира).

1138033

ИК (KBr): 3400 (ОН, NH), 1740 (СО СН ); 1610, 1230 см (ОАс).

Масс-спектрометрия m/е (М, f00X), 885,. 857, 822, 810, 796, 799, 757, 751, 737, 651, 650, 649, 5

514, 355, 346, 329, 282, 154, 135.

Пример 5. N-дезметил-N-(метоксиметил) -винбластин.

5 г (5,5 ммоль) сульфата винбластина растворяют в 150 мл воды. Вин10 бластиновое основание выделяют в свободном виде, добавляя к раствору концентрированный раствор аммиака (рН 8) и проводят четырежды экстракцию 50 мл дихлорметана. Органическую фазу высушивают над сульфатом натрия, фильтруют и упаривают в вакууме досуха. В результате получают

4 г винбластинового основания, которое растворяют в смеси 1000 мп не содержащего примесей спирта дихлорметана, 120 мл уксусной кислоты и

6 мл метанола и охлаждают раствор до -55 С.. К полученному раствору добавляют в течение примерно 5 мин охлажденный до -55 С раствор 2,5 r (25 ммоль) трехокиси хрома в 470 мл уксусного ангидрида. Реакционную смесь перемешивают в течение 45 мин при -55 С и затем выливают в смесь >0

940 мл концентрированного раствора аммиака и 940 мл ледяной воды. При этом нужно следить за тем, чтобы температура не поднималась выше

30 С. Затем фазы разделяют и органи- 35 ческую фазу встряхивают в делительной воронке с 1 л 1Х-ного раствора аммиака. Органическую фазу отделяют, высушивают над сульфатом натрия, фильтруют и упаривают досу- 40 ха в вакууме. Полученные 3,8 г сырого продукта подвергают очистке с помощью хроматографии на колонке.

Колонку заполняют 230 г окиси алюминия активности П-Ш (Brockmann), 45 которую увлажняют бензолом. Сырой продукт растворяют в 20 мл смеси бензола и хлороформа, взятых в соотношении 8:2, и вводят полученный раствор в колонку. Элюирование осу- 50 ществляют этой же смесью (около 8 л). Собирают фракции по 100 мл.

Содержащие одно и то же вещество фракции объединяют и упаривают (адсорбент: силикагель, подвижная фаза: смесь бензола, этанола, диэтиламина и диэтилового эфира в соотношении 5:5:5:100). В реэультате получают 2,1 r продукта. После перекристаллизации из 6 мл этанола получают 1,5 r очищенного продукта с такими же физическими константами, как и у продукта, полученного по способу в соответствии с примером 1.

Пример 6. М-Дезметил-N-(пропоксиметил)-винбластин.

Работают таким же образом, как это описано в примере 5, но вместо метанола применяют 4,5 мл пропанола. В результате получают 0,6 г целевого соединения, плавящегося при 200210 С, (о ) = 31,2 (с = 1, хлороформ).

Пример 7. N-Дезметил-N-(метоксиметил)-винбластин.

Работают таким же образом, как это описано в примере 1, но в качестве исходного соединения вместо сульфата винбластина применяют винбластиндигидрохлорид. Выход полученного продукта 28Х от теоретического. Физические константы его такие же,как и у продукта, полученного по способу

/ в соответствии с примером 1.

Пример 8. N-Дезметил-N-(метоксиметил) -винбластин .

Работают таким же образом, как это описано в примере 1, но в качестве растворителя вместо дихлорметана используют не содержащий примеси спирта хлороформ, дихлорэтан или ацетон. Выход 40-50Х от теоретического (в зависимости от природы используемого растворителя). Физические характеристики полученного продукта такие же, как и продукта, полученного по способу в соответствии с примером f

Пример 9. N-Дезметил-N-.

-(метоксиметил)-20 -дезокси-лейрозидин °

60 мг (0,067 ммоль) сульфата 20вЂ” (-дезокси-лейрозидина (полученного путем каталитического гидрирования

3,4 -ангидровинбластина в среде метанола в присутствии палладия на угле в качестве катализатора и последующего получения сульфата) растворяют в смеси 20 мл абсолютного дихлор1 метана, 1,5 мл ледяной уксусной кислоты и 0,5 мл метанола. Раствор охлаждают до -55 С и смешивают с охлажденным до -55 С раствором 30 мг

1 (0,3 ммоль) трехокиси хрома в 3,5 мл уксусного ангидрида. Реакция проте1138033

55 кает в течение 60 мин, после чего реакциойную смесь вливают в смесь

12 мл концентрированного раствора аммиака и 12 г льда. После разделения фаз водную фазу трижды встряхивают в делительной воронке с 10 мл дихлорметана. Объединенные органические фазы дважды промывают 10 мл разбавленного 1:1 раствора аммиака и затем дважды водой, порциями по

5 мл. После высушивания органическую фазу упаривают. В результате получают 48 мг сырого продукта, который подвергают очистке с помощью хроматографии на колонке (адсорбент. силикагель с размером частиц 0,0400,063 мм фирмы Merck, Art. 9385, элюент: дихлорметан и затем дихлорметан, содержащий ЗХ метанола). В результате получают 18 мг (32Х от теоретического выхода) продукта, который плавится с разложением при

185-190 С. (4.), = +50 (с = 1, хлороформ).

ИК (KBr): 3400 (NH) 1720 (СОгСНз)

1610, 1230 см (АОс).

В качестве побочного продукта при хроматографической очистке получают

46 мг (22Х от теоретического выхода)

N-дезметил"N-формил-20 -дезоксиI

-лейрозидина, т.пл. 205-210 С (с разложением), (®Q+54 (с = 1, хлороформ) .

Пример 10. N-Дезметил-N-(изобутилоксиметил)-винбластин.

0,80 г полученного по способу в соответствии с примером 1 сырого продукта, с содержанием N-дезметил-Ы-(метоксиметил)-винбластина 65Х растворяют в смеси 50 мл безводного дихлорметана и 2,4 мл (25 ммоль) изобутанола. Раствор охлаждают до

0 С и добавляют к нему при перемешивании в атмосфере азота безводный раствор соляной кислоты в эфире до, достижения рН 3. Протекание реакции

i, контролируют с помощью тонкослойной, хроматографии (адсорбент: алюминие; :вая фольга для тонкослойной хроматографии вЂ” силикагель 60 Р 4, Art.

5554, подвижная фаза: смесь эфира, этанола, бензола и диэтиламина в

:соотношении !О:0,5:0,5:0,5). После окончания реакции смесь вливают в

2 мл концентрированного раствора аммиака, фазы разделяют и из водной фазы трижды экстракцию проводят дихлорметаном, порциями по 5 мл. Объе5

40 диненные экстракты трижды промывают

3 мл воды, высушивают над сульфатом магния, фильтруют и упаривают. Полученные 1,7 г сырого продукта растворяют в 25 мл дихлорметана и подвер гают хроматографии на колонке силикагель 60, Art. 9385). Элюирование вначале проводят 120 мл дихлорметана, а затем смесями метанола и дихлорметана с содержанием метанола

1,2 и 4Х. В первых 290 мл элюата не содержится алкалоида. Следующие

300 мл элюата содержат N-дезметил-N-(изобутоксиметил)-винбластин. В результате получают 416 мг продукта с такими же физическими характеристиками, как и у продукта, полученного по способу в соответствии с примером 2.

Пример 11, N-дезметил-N-(гептоксиметил)-винбластин.

Работают таким же образом, как это описано в примере 10, с той разницей, что вместо изобутанола используют 2,5 мл (17 ммоль) 1-гептанола. Протекание реакции контролируют с помощью тонкослойной хроматографии,причем в качестве адсорбента используют полимерную пленку для тонкослойной хроматографии с нанесенным на нее силикагелем 60 Р (Art.

5735). Полученный сырой продукТ подвергают очистке с помощью хроматографии на колонке, как это описано в примере 10. В первых 310 мл элюата не содержится алкалоида. Следующие

200 мл содержат N-дезметил-N-(гептоксиметил)-винбластин. Выход 350 мг.

Физические характеристики полученного продукта таке же, как и у продукта, полученного по способу в соответствии с примером 3.

Пример 12 N-Дезметил-МвЂ (бензилоксиметил)-винбластин.

Работают таким же образом, как это описано в примере 10, с той разницей, что в качестве исходного реагента применяют 3,0 мл (27 ммоль) бензилового спирта. Полученный сырой продукт подвергают очистке описанным в примере 10 способом. В первых 350 мл элюата не содержится алкалоида Целевой продукт содержится в следующих 300 мл элюара.

Выход 320 мг. Физические характеристики полученного соединения такие же, как и соединения, полученного по способу в соответствии с примером 4.

1138033

S l0

Пример 13. N-Дезметил-N-(изобутоксиметил)-винбластин.

0,1 r сырого продукта, полученного по способу в соответствии с примером 1, содержащего 65Х И-дезметил-N- 5

-(метоксиметил) -винбластина, растворяют в смеси 15 мл дихлорметана и

30-50 моль эквивалентов изобутанола.

К раствору добавляют при 0 С при перемешивании безводный раствор соляной кислоты в эфире до рН 3.

После окончания реакции смесь нейтрализуют карбонатом калия до рН 7, выпадающий осадок соли отфильтровывают, а фильтрат вЂ” после упаривания при желании в вакууме вЂ” подвергают очистке с помощью хроматографии на колонке описанным в примере 10 способом. В результате получают целевой продукт с 53Х-ным выходом, физические характеристики которого такие же, как и у продукта, полученного по способу в соответствии с примером 2.

Используя соответствующие исходные соединения, аналогичным образом получают N-дезметил-N-(изопропоксиметил) винбластин. Выход 35Х от теоретического, т.пл. 172-182 С (с разложением). 30

ИК (KBr): 3400 (ОН, NH), 1730 (СО CH ), 1610, 1220 см "(AOc) .

IÍ-ЯМР (С DC1 ) 100 МГц: сУ 8,.1 (S 1Н, N Н), 7,51 (m, 1Н, С„-E), 7,2-7,03 (m, ЗН, Cg,-С„,-Н), 6,70 З5 (S, 1Н, CS-Н), 6,35 (S, 1Н. Ся-Н .), 5,85 (dd, 1Н, С„;Н). 5,38 (S, 1H, С1 -Н), 5,30 (d, 1Н, C„>-H) . 4,75, 4, 15 (2Н, I<>10 Гц, Na-СН, -О.-), 4,0 (8 1Н, С -Н), 2, 1 (S ЗН, gg

ОСОСН ), 0,„95-0,60 (12H, CH -группы).

N-Дезметил-N- (алилоксиметил) вЂ .

;винбластин (выход 55Х от теоретического), т.пл. 205-210 С (с разложением).

ИК (KBr) 3300 (ОН, NH) 1730 (СО СН ), 1610, 1220 см (АОс).

N-Дезметил-N-(циклогексилметил)-винбластин.

Выход 36Х от теоретического, S0 т. пл. 175-180 С (с разложением) .

ИК (KBr): 3400 (OH, NH), 1730 (СО: СН ), 1610, 1230 см (OAc) .

Пример 14. N-Дезметил-N-(метокснме тил) -в инбластин . 55

0 15 г (О, 17 ммоль) N-дезметил-N-(изобутоксиметил)- винбластина,полученного по способу в соответствии с примером 2, растворяют в смеси

30 мл дихлорметана и 1,5 мл метанола. Раствор охлаждают до 0 С и устанавливают его рН равным 3 с помощью безводного раствора соляной кислоты в эфире. Протекание реакции контролируют с помощью тонкослойной хроматографии (адсорбент:силикагель 60

F -, подвижная фаза: смесь эфира, этанола, диэтнлового эфира и бензола в соотношении 20:1:1:1). После окончания реакции реакционную смесь нейтрализуют твердым карбонатом калия, раствор фильтруют и фильтрат упаривают д вакууме. Выход 14 r.

Физические характеристики полученного продукта такие же, как и продукта, полученного по способу в соответствии с примером 1 °

Пример 15. N-Дезметил-N-(этоксиметил)-винбластин.

Охлажденный до 0 С раствор 50 мг

N-дезметил-N-(алилоксиметил)-винбластина в 10 мл безводного дихлор- . метана и 0,3 мл этанола подкисляют безводным раствором соляной кислоты в эфире до рН 3. Через 5 мин раствор нейтрализуют твердым карбонатом калия. Выпадающий осадок соли отфильтровывают, а фильтрат упаривают. В результате получают 46 мг

N-дезметилокси-N-(этоксиметил)винбластина, т.пл. 235-238 С. (с ) ° = +30.5 (с = 1, хлороформ).

Пример 16. N-Дезметил-N-(пропоксиметил)-винбластин.

К раствору .100 мг N-дезметил-М-(гептоксиметил)-винбластина в

20 мл безводного бензола добавляют

1 мл н-пропилового спирта. Раствор подкисляют безводным раствором соляной кислоты в эфире до рН 3 и через 5-10 мин нейтрализуют твердым карбонатом калия. После упаривания фильтрата получают 90 мг N-дезметил--N-(пропоксиметил)-винбластина. Физические характеристики полученного соединения такие же, как и у продукта, полученного по способу в соответствии с примером 6.

Реакция протекает также полностью, если в качестве растворителя использовать диэтиловый эфир, диоксан, ацетон или этилацетат.

Пример 17.,N-Дезметил-М- (аллилоксиметил) -винбластин.

50 мг N-дезметил-N-(метоксиметил)-винбластина растворяют в смеси 10мл

1138033 ких мьппей. Каждая группа подопытных животных состояла из 6 мьппей весом

27-31 г. Иэ испытуемых соединений готовили на физиологическом растворе

1 поваренной соли растворы для инъекций, в которые при необходимости добавляли каплю Tween 80. Полученные растворы вводили животным внутрибрюшинно в дозах от не

10 вызывающих смертельного исхода до вызывающих. 100Х-ную смертность.

N-Дезметил-N-(метоксиметил)-винбластин

К-Деэметил-К-(этоксиметип) -винбласзин

К-Дезметил-N-(пропоксиметил)-винбластин

N-Дезметил-К-(изобутоксиметил)-винбластин

N-Деэметил-N-(гептокснметил)-винбластин

- 60

- 45

К-Дезметил-N-(аллилоксиметил) -вин блас тин

" 70

N-Дезметил-К-(бензилоксиме тил) -винбластин

К-Дезметил-К-(циклогексилокснметил)-винбластин

- 60

4,2

Винкристин*

Винбластин

Виндецин*

7,6

4,0

*Наблюдается побочное парализующее действие.

Предлагаемые соединения в 15-25 раз менее токсичны, чем винкристин и виндецин и в 8-13 раз менее токсич- 0 ны, чем винбластин. В отличие от винкристина и виндецина в случае предлагаемых соединений вплоть до средней смертельной дозы не наблюдается побочных парализующих явлений.

Цитостатическую активность предлагаемых соединений испытывали на ткабезводного дихлорметана и 0,5 мл аллилового спирта. Охлажденный до

0 С раствор подкисляют безводным

50Х-ным эфирным раствором бортрифторидэфирата до рН 3. Через 5 мин раствор нейтрализуют карбонатом калия, выпадающий осадок соли отфильтровывают и фильтрат упаривают. В результате получают 40 мг N-дезметил-N-(аллилоксиметил) -винбластина с такими же физическими характеристиками, как и у продукта, полученного по способу в соответствии с примером 13.

Соединения общей формулы (1) цитостатически активные. Они менее ядовиты, чем известные соединения.

Острая токсичность соединений испытывалась на самцах швейцарсНиже приведены результаты испытаний, оцениваюцихся по методу

Lichfie1d и Vilcoxon (для сравнения приведены также данные, полученные при использовании известных соединений, винбластина, виндецина и винкристина) невых культурах в различных трансплантированных опухолях. е

Испытуемые соединения растворяли в культурах клеток (Hela культуре) в количествах от пороговой дозы

1x10 мкг/мл до верхнего предела

100 мкг/мл. Через 24 ч исследовали ,культуры in vivo под микро ..копом.При этом были получены следующие результаты (с учетом зафиксированных в метафазе клеток).

1138033

О, 001

0i001

О, 001

0, 001

О, 001

К-Дезметил-N- (меток симетил) -вин блас тин

N-Дезметил-N-(пропоксиметил)-винбластин

N-Дезметил-Н-(изобутоксиметил)-винбластин

N-Дезмети -N-(гептоксиметнл)-винбластин

N-Дезметил-N-(аллилоксиметил)-винбластин

N-Дезметил-N-(бензилоксиметил)-винбластин

0,01

N-Дезметил-N-(циклогексилоксиметил)-винбластин

0,001

В аналогичных условиях были npo(l ведены опыты с окрашенными культурами клеток, что дало возможность фиксировать более точные различия.

При этом обнаруженное действие мож но разрелить на 5 стадий.

Первая стадия характеризует дозу, вызывающую минимальное действиевЂ” возрастание количества блокированных митоз. Часть этих митоз, например тройные митозы, вырождается или на полюсах их появляется несколько отделившихся хромосом, анафазы в большинстве случаев пропадают. На второй стадии происходит сильное блокирование метафаз и нормальные мито- 35 зы практически отсутствуют. Хромосомы располагаются в более рыхлом клубке. Доля клеток, находящихся в интерфазе, незначительна. На третьей стадии хромосомы скучиваются (коалес-40 цируют) в виде плотной массы в центре клетки. Это состояние можно охарактеризовать как пикномитоз или "шаро,вая метафаза". На четвертой стадии действие соединений на находящихся 4> в интерфазе клетки проявляется в том, что уже имеется сравнительно небольшое количество блокированных клеток, поскольку они уже не в состоянии входить в митозу. Цитоплазма клеток в интерфаэе расширяется, края ее становятся неопределенными, "бахромчатыми", клетки часто принимают вытянутую, фибробластовую форму.

На пятой стадии цитоплазма заполняется тонкой счетчатой структурой, и находящиеся в интерфазе клетки явно погибают в результате обработки. Указанные пять стадий можно легко отличить друг от друга.

Наиболее активными являются гептокси-, а также аллилоксипроизводные.

Уже в дозе 0 001 мкг/мл эти соединения вызывают сильное блокирование метафазы, пикномитоза появляется при дозе 0,1 мкг/мл, а воздействие на клетки, находящиеся в интерфазе, проявляется при дозе 1-10 мкг/мл.

Действие изобутокси- и циклогексил-. оксипроизводных на порядок ниже: при минимальной дозе 0,001 мкг/мл еще имеются. нормальные митоэы.

Самой низкой активностью обладает бензилоксипроизводное. При минимальной дозе оно оказывает слабое блокирующее действие, имеется еще некоторое количество вырожденных митоз, анафазы уже однако отсутствуют. При дозе 0 01 мкг/мл блокирование умеренное; сильное блокирование и пикномитоз проявляются только при дозе 1 мкг/мл.

Действие предлагаемых соединений на внутрибрюшинно трансплантированные опухоли (лейкемия мышей

P 388 и Ascites Lymphoma NK/Ly).

Лейкемия P 388 поддерживалась у мышей (BDF< -гибриды) . Каждый из опытов проводили на 6 животных, которым внутрибрюшинно трансплантировали по 10 опухолевых клеток.

Лечение начинали через 24 ч после трансплантации, для чего животным ежедневно вводили внутрибрюшинно соединения. Ежедневно контролиро" вали вес и состояние подопытных животных. Лродолжительность жизни мышей, подвергнутых лечению, выражали в

1138033!

Таблица

Продолжительность жизни животных,Х

Доза, мг/кг, внутри брюшин-. но

Эффективность, 7 от количест

Соединение подвергну- контроль тых лече- ных ва контрольных животнию ных

139

14,3

10,3

8х0,4

8х4,0

8х8,0

181

10,3

18,7

217

9,9

21,3

126

10,3

8х0,4

8х4,0

5х8,0

13,0

178

18,3

10,3

195

9,9

19,2

133

8х0,4

8х4,0

8х8,0

13,7

10,3

194

20,0

10,3

208

9,9

20,5

122

12,7

10,3

8х1,0

8х2,0

178

10,5

18,7

155

16,8

171

8х4,0

19,0

17,7

163 182

10 5

8х6,0

8х8,0

19,2

18,7. 172

10,9

205

20,2 процентах от продолжительности жизни контрольных животных.

Результаты приведены в табл. 1.

Из данных табл. 1 видно, что предлагаемые соединения дают возможность 5 значительно продлить жизнь пораженных лейкемией мышей.

Аналогичные опыты были проведены с использованием N-дезматип-N-(метоксиметил)-20 -дезокси-лейрозидина. 10

При этом помимо дозировки варьировалась также продолжительность лечения (см. табл . 2) .

Подопытным мышам .(Swiss-Н/Riop, неродственное разведение) трансплан- 1S тировали внутрибрюшинно 5х10 опухолевых клеток ascites. Каждый из опытов проводили на 10 мышах. Лечение начинали через 24 ч после трансплантации. Исследуемые соединения вво- 20

N-Дезметил-N-(гептоксиметил)"винбластин

К-Дезме тип-0-(бен эилоксиметил)вЂ”

-винбластин

N-Дезметил-N-(изобутоксиметил)-винбластин

Н-Дезметил-N-(метоксиметил)-винбластин дили ежедневно в течение 5 дней.

Средняя продолжительность жизни мышей из контрольной группы составляла 15,7 дня. Эффективность соединений проявляется в увеличении про должительности жизни подопытных животных, что следует из табл. 3.

Предлагаемые соединения сущест.вЂ”, венно тормозят развитие опухолевых штаммов P 388 и NK/Ьу в дозах

4-8 мг/кг. При этом тормозящее действие их такое же, как и в случае известных дииндоловых алкалоидов .

Предлагаемые соединении однако значительно менее токсичны, чем известные аналогичной структуры.

При лечении людей предлагаемые соединения следует применять в виде внутривенных инъекций или вливаний.

1138033

18!

Продолжение табл. f

f f

Продолжительность жизни животных, i.

Доза, . мг/кг, внутрибрюшинно

Эффективность, Х от количестСоединение подвергну- контрольтых лече- ных ва контрольных животнию ных

N-Дезметил-N-(пропоксиметил)вЂ”